Cambie a las PCR de miARN superiores sin contratiempos

Nuestro objetivo es proporcionar los productos más innovadores y de mejor calidad para ayudar a los científicos a superar los desafíos y avanzar en sus investigaciones. Para alcanzarlo, dejaremos de fabricar productos miScript miRNA PCR el 1 de mayo de 2021. Después de esa fecha, los productos miScript PCR estarán disponibles el tiempo que duren las existencias. Recomendamos a los usuarios de miScript PCR que comiencen a usar los sistemas miRCURY LNA miRNA PCR.

Los análisis de miARN basados en qPCR suponen algunos desafíos, como que, debido a la poca cantidad de elementos diana en los distintos tipos de muestra habituales, suele ser necesario un paso de amplificación previa o que las secuencias de longitud corta hacen que resulte complicado diseñar sondas y cebadores muy específicos. Los sistemas miRCURY LNA miRNA PCR eliminan todos estos problemas y proporcionan un proceso de caracterización de miARN muy sensible y sólido, sin necesidad de amplificación previa, para las aplicaciones más exigentes.

miRCURY LNA miRNA PCR ofrece varias ventajas exclusivas:

• Sensibilidad inigualable con cuantificación de hasta 1 sola copia de miARN
• Detección precisa a partir de muestras de bajo contenido en miARN, como suero/plasma, secciones de FFPE y muestras de LCM, sin amplificación previa
• Especificidad alta y criterios de discriminación elevados para clasificar miARN estrechamente relacionados
• Personalización en línea sencilla de ensayos y paneles
• Protocolo rápido y sencillo que solo tarda entre 2 y 3 horas

miRCURY LNA PCR: cuando la sensibilidad, la precisión y la flexibilidad realmente importan

Los sistemas miRCURY LNA miRNA PCR están disponibles en dos versiones: una, basada en SYBR® Green, y otra, basada en sondas. Además, combinan la comodidad y la velocidad de una reacción de transcripción inversa universal con la sensibilidad y la especificidad de los cebadores de qPCR optimizados con ANB. El flujo de trabajo sencillo está diseñado para una caracterización de miARN de alto rendimiento y proporciona unos resultados rápidos y sencillos en todos los tipos de muestras, incluso aquellas con un contenido bajo en ARN.

Ajuste la configuración de su experimento a sus necesidades específicas mediante ensayos individuales o paneles personalizables totalmente flexibles. Con la misma reacción a cADN, podrá cambiar sin problemas de un panel o ensayo de cebador personalizado a uno prediseñado. Nuestro extraordinario catálogo de paneles y ensayos prediseñados le permite detectar y cuantificar hasta los blancos menos frecuentes con una gran eficacia.

Cuantificación precisa sin amplificación previa

La cuantificación de miARN poco abundantes con qPCR requiere, normalmente, una amplificación previa. Sin embargo, gracias a los sistemas miRCURY LNA miRNA PCR, obtendrá resultados precisos sin necesidad de llevar a cabo este paso adicional. ¿Cuál es el secreto? Los ensayos y paneles miRCURY PCR contienen bases de ácido nucleico bloqueado (ANB) posicionadas de manera óptima. Los oligonucleótidos optimizados con ANB muestran una mayor afinidad de unión al cebador, lo que permite el diseño de cebadores (y sondas) muy cortos que son específicos para el miARN y lo suficientemente cortos para evitar que se superpongan cuando se unen a la secuencia diana. Esto no es posible con oligonucleótidos convencionales. Como resultado, podemos diseñar un ensayo óptimo para detectar cualquier miARN biológicamente relevante con la máxima especificidad y sensibilidad sin que sea necesario llevar a cabo la amplificación previa.

El sistema miRCURY LNA miRNA PCR ya ha ayudado a muchos científicos a avanzar en su investigación. ¿Desea obtener más información? Este equipo empleó nuestro sistema para descubrir nuevos biomarcadores de miARN para el diagnóstico precoz de la osteoporosis. Estos investigadores lo utilizaron para detectar características distintivas en el miARN del plasma asociadas a los fenotipos relacionados con algunas de las enfermedades humanas más habituales. Nuestras guías para llevar a cabo una caracterización de los miARN de biofluidos analizan cómo realizar el seguimiento de la eficacia de las PCR con puntas de ARN e incluyen consejos y recomendaciones para que los análisis mediante PCR proporcionen resultados exitosos en muestras de biofluidos con poco contenido de miARN sin un proceso previo de amplificación.

Si tiene una aplicación especializada que requiere amplificación previa, póngase en contacto con nuestros expertos para obtener asistencia.

Elección de la sustancia química de detección

Los ensayos basados en SYBR® Green tienen un diseño flexible y ofrecen unos costes de configuración y puesta en marcha inferiores. Sin embargo, a muchos investigadores les preocupan los falsos positivos, porque el colorante se une a todo el ADN bicatenario. Los falsos positivos suelen deberse a unas condiciones de PCR por debajo de las adecuadas, no a los productos químicos de detección. Además, la detección basada en SYBR® Green permite llevar a cabo el análisis de la curva de fusión inmediatamente después de la PCR, por lo que se puede confirmar la especificidad de una reacción elevada y descartar la formación de dímeros de cebador o amplicones no específicos.

Las sondas de hidrólisis posibilitan una detección muy sensible y fiable, ya que solo se detecta el producto de PCR deseado. Sin embargo, el diseño de los ensayos puede ser complejo en el caso de elementos diana cortos, como el miARN, y, a menudo, diseñar sondas y cebadores de oligonucleótidos de ADN resulta imposible. Además, las herramientas de amplificación pueden competir entre sí por los componentes reactivos, lo que podría perjudicar la eficiencia y la sensibilidad del ensayo, y reducir la capacidad de obtención de los productos de PCR deseados.

Ambos métodos pueden proporcionar resultados excelentes siempre y cuando se empleen sistemas de PCR específicos con cebadores (y sondas) con un buen diseño, y que se optimicen las condiciones de reacción para garantizar que solo se amplifican los elementos diana deseados. Los ensayos y paneles miRCURY LNA miRNA PCR están optimizados con ANB, lo que nos permite crear cebadores (y sondas) con separación espacial, pero que muestran una especificidad y una afinidad muy altas. miRCURY LNA PCR garantiza un análisis con resultados óptimos en cada ocasión, sin que ocurran interferencias de dímeros de cebador ni falsos positivos.