Taq 喜欢高温，有些从一开始就喜欢高温
大多数体外扩增应用使用耐热酶进行聚合酶链反应 (PCR)。最常用的 PCR 酶是 Taq DNA 聚合酶。Taq DNA 聚合酶来源于水生栖热菌，这是一种在 70°C 以上温度下生长的极端嗜热真杆菌。这意味着 Taq DNA 聚合酶在大约 72°C 温度下发挥最佳酶活性。
标准 PCR 还是 hot-start？
标准 Taq 聚合酶在 72°C 时发挥最佳活性，但在 37°C 左右就开始表现出活性。这种低温活性不容忽视，因为其具有在 PCR 反应的初始较低温度阶段允许非特异性扩增和误引发事件的缺点。如果您需要自动化 PCR，那么可以考虑使用 hot-start Taq 聚合酶。
Hot-start 聚合酶与标准 Taq 不同，它在常温下没有活性。Hot-start PCR 技术遵循与常规 PCR 相同的原理，但直到完成第一个变性步骤之前，酶活性始终处于抑制状态。这最大限度减少了非特异性结合和误引发，从而提高了特异性。此外，该技术提供了在室温下构建反应体系的显著便利性，使得 PCR 自动化成为可能。在某些情况下，灵敏度也会提高，因为非特异性扩增会大量消耗特异性目标扩增所需的反应体系组分。
所有 Taq 聚合酶适用于：
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根据您对标准 PCR 或适用于自动化和高通量 PCR 应用的 hot-start 酶的要求，选择 Taq DNA 聚合酶。
* 推荐使用 Stoffel 片段 Taq DNA 聚合酶进行基因分型和引物延伸。Stoffel 缺失 (5’→3’ exo-) 使该酶比全长型 Taq 略微更加耐热，因此保真度稍高，强烈建议用于富含 GC 的二级结构模板。在定量 real-time PCR 检测中，TaqMan 型探针必须在 PCR 过程中通过 Taq DNA 聚合酶的 5'-核酸酶活性水解以产生信号。杂交探针在 Light Cycler 检测中不得水解，因此使用缺乏 5'-核酸酶活性的 Stoffel 片段会提高定量测量的准确性。