Taq 처리에는 고온이 필요하며 일부 Taq은 초기부터 고온이 요구됩니다
대부분의 체외 증폭 응용은 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 열 안정성 중합효소를 사용합니다. 가장 많이 사용되는 PCR 효소는 Taq DNA 중합효소입니다. Taq DNA 중합효소는 70°C 이상의 온도에서 자라는 극호열성 유박테리움(eubacterium) Thermus aquaticus에서 추출합니다. 이는 Taq DNA 중합효소의 최적 효소 활성이 약 72°C에서 발현된다는 뜻입니다.
일반 PCR과 hot-start 중 어느 것을 선택해야 하나요?
일반 Taq 중합효소는 72°C에서 최적 활성을 나타내지만 37°C부터 활성화되기 시작합니다. 저온 활성은 상당히 많으며 PCR 반응 초기 저온 단계 동안 비특이적 증폭과 프라이밍 오류(mis-priming) 현상이 발생할 수 있다는 단점이 있습니다. PCR 자동화가 필요한 경우, hot-start Taq 중합효소 사용을 고려하십시오.
Hot-start 중합효소는 일반 Taq과 다르게 상온에서는 활성화되지 않습니다. Hot-start PCR 기술은 기존 PCR과 같은 원리이지만 첫 번째 변성 단계가 완료될 때까지 효소 활성이 억제됩니다. 이렇게 하면 비특이적 결합과 프라이밍 오류가 최소화되고 특이성이 향상됩니다. 또한 이 기술은 실온에서 반응을 설정할 수 있는 상당한 편의성을 제공하여 PCR 자동화를 가능하게 합니다. 어떤 경우에는 비특이적 증폭이 특정 표적 증폭에 필요한 반응 성분을 고갈시키기 때문에 민감도조차 향상됩니다
모든 Taq 중합효소는 다음에 적합합니다.
도구, 계산기, 변환기를 찾으시나요?
반응 설정, DNA 및 RNA의 질량과 분자 수 변환, 용액량 계산을 위한 도구 등 다양한 도구를 제공합니다.
PCR 응용 분야를 위한 효소
표준 PCR 또는 자동화 및 고처리량 PCR 응용 분야에 적합한 hot-start 효소에 대한 요구 사항에 따라 Taq DNA 중합효소를 선택하십시오.
* Stoffel Fragment Taq DNA 중합효소는 유전형 및 프라이머 연장에 권장됩니다. Stoffel 결실(5’→3’ 엑소뉴클레아제)은 전장 Taq보다 약간 더 높은 정확도로 효소의 열 안정성을 약간 더 높여주어 GC rich 및 이차 구조 템플릿에 강력히 제안됩니다. 정량적 real-time PCR 분석에서 TaqMan 유형 프로브는 신호를 생성하기 위해 Taq DNA 중합효소의 5' 핵산분해효소 활성에 의해 PCR 중에 가수분해되어야 합니다. Light-Cycler 분석에서 혼성화 프로브는 가수분해되지 않아야 하므로 5' 핵산분해효소 활성이 없는 Stoffel 단편을 사용하면 정량 측정의 정밀도가 향상됩니다.