Enzymes, NGS, Two female scientists both Caucasian discussing results one holing a test-tube with blue liquid in a laboratory setting
분자 생물학용 효소

클로닝 및 DNA 재조합

점착(sticky) 또는 평활(blunt): 변형, 어닐링, 연결

클로닝 및 DNA 재조합 기술은 건강과 질병에 있어서 유전자 및 세포의 작용에 대한 많은 통찰력을 제공했습니다. 이제 클로닝 기술과 응용 기술은 조합 라이브러리의 높은 처리량 어셈블리 및 후성유전학적 변형 매핑과 같은 혁신적인 응용 기술을 통해 더욱 발전했습니다.

클로닝용 효소

적합한 플라스미드 벡터로 템플릿 DNA를 복제하기 전에 말단 변형이 필요할 수 있습니다. 클로닝을 위해 확인된 DNA는 일반적으로 제한 효소 분해 또는 PCR 증폭을 통해 공급원에서 얻게 됩니다. Klenow Fragment, T4 DNA 중합 효소, T4 폴리뉴클레오티드 키나아제와 같은 특수 효소는 DNA 단편과 벡터 사이의 공유 결합을 개선하기 위해 3’ 또는 5’ 말단을 변형합니다.

다음 클로닝 단계는 벡터와 인서트의 말단을 어닐링하는 데 적합한 효소를 사용한 라이게이션입니다.

테일링은 일반적으로 TA 클로닝에 사용할 T-벡터를 준비하거나 TA 클로닝에 사용할 고성능 중합효소(Taq 아님)에 의해 생성된 PCR 제품을 A-테일링하기 위해 수행됩니다. Taq DNA 중합효소로 증폭한 산물은 이미 A-테일링 되어 있습니다.

DNA 말단 변형

*T4 DNA Polymerase의 3’→ 5 ’ 엑소뉴클레아제 활성은 염기서열 및 라이게이션 독립적 클로닝(Sequence and Ligation Independent Cloning, SLIC) 프로토콜에 필수적입니다.

† 평활(blunt) 말단 DNA로의 전환은 T4 DNA Polymerase(P7080)의 5’→ 3 중합효소와 3’→ 5’ 엑소뉴클레아제 활성을 이용하여 이루어집니다. T4 Polynucleotide Kinase(Y9040)는 평활(blunt) 말단 DNA 단편의 끝을 5’-인산화하여 T4 DNA Ligase에 의한 후속 라이게이션을 보장합니다.

도구, 계산기, 변환기를 찾으시나요?
반응 설정, DNA 및 RNA의 질량과 분자 수 변환, 용액량 계산을 위한 도구 등 다양한 도구를 제공합니다.
도구 찾기

DNA 라이게이션

* 열 안정성; 이중 DNA 구조의 고온, 고강도 라이게이션이 필요한 응용 기술에 적합합니다.
† 열 안정성, 갭이나 불일치하는 염기쌍 없이 정확하게 틈을 라이게이션할 수 있습니다.

클로닝을 위한 SLIC 방법

염기서열 및 라이게이션 독립 클로닝(Sequence and Ligation Independent Cloning, SLIC)은 엑소뉴클레아제 효소 활성을 이용합니다.

차세대 염기서열 분석을 위한 클로닝

차세대 염기서열 분석을 위한 라이브러리는 단편화된 DNA로 시작됩니다. 효소 작용으로 클로닝 단계가 완료됩니다.

  • icon-genomics평활(blunt) 단편

    말단이 평활화되고 효소인 T4 DNA 중합효소, Klenow Fragment, T4 PNK로 5’ 인산화됩니다.

  • icon-bio-informaticsA-꼬리 말단

    다음으로, 이 효소 중 하나를 사용하여 3’ 말단을 A-꼬리로 만듭니다. Taq DNA 중합효소 또는 Klenow Fragment(3’→5’ exo-).

  • icon-barcode어댑터 추가

    그런 다음 최종 효소인 T4 DNA 리가아제로 라이게이션하여 보완 어댑터 또는 바코드를 추가합니다.

DNA 라이브러리 구축에 필요한 모든 효소 구성 요소는 어댑터를 사용하여 '자가 제작(home-brew)' 라이브러리 준비 키트로 조합할 수 있습니다.

유전자 합성

유전자 합성은 상보적으로 겹치는 긴 영역을 가진 올리고데옥시뉴클레오티드를 결합하는 것을 기반으로 합니다.

  • icon-temperature열 안정성 Taq DNA 리가아제

    T4 DNA 리가아제 대신 열에 안정한 Taq DNA 리가아제를 사용하여 합성을 개선합니다.

    라이게이션 온도가 높을수록 올바른 라이게이션 생성물을 형성할 확률이 높아집니다.

  • icon-target닉(nick) 선택적 리가아제

     

    갭을 가로지르는 라이게이션으로 인한 결실을 방지하려면 닉(nick) 선택적 리가아제를 사용합니다.

    길게 합성된 DNA는 순서대로만 결합됩니다.

클로닝 및 DNA 재조합용 주요 효소 알아보기

OEM에 관심이 있으세요? 지금 바로 문의해 보세요.
끊임없이 변화하는 기술 환경에서 OEM 솔루션으로 경쟁 우위를 확보 할 수 있습니다. 귀하의 목표를 위해 당사의 풍부한 경험을 이용하세요.
문의하기

클로닝 및 재조합용 효소에 대한 FAQ

질문이 있으신가요? 
효소에 대한 더 자세한 정보가 필요하신가요? 
새로운 실험실을 시작하시나요?  가까운 영업 담당자가 귀하의 연락을 기다리고 있습니다.
문의하기