Enzymes, NGS, Black male pipetting in front of computer screen in a laboratory environment
분자 생물학용 효소

RNA 분석

RNA의 모든 것: 증폭, 염기서열, 연결, 라벨

유전자 발현의 다운스트림 분석을 위해 RNA를 조작하는 데 사용할 수 있는 효소 제품군이 있습니다. 역전사 효소는 전사체로부터 상보적 DNA(cDNA)를 생성합니다. cDNA는 클로닝이나 정량적 연구를 위해 라벨링하거나 증폭시킬 수 있습니다. RNA 리가아제는 염기, 라벨, 어댑터를 결합하고, RNA 중합효소는 리보뉴클레오티드를 추가하며, 리보핵산분해효소는 리보뉴클레오티드를 제거합니다. 

증폭을 통한 RNA 검출 및 조작

역전사 효소는 원래의 RNA 템플릿에 상보적인 DNA 한 가닥(cDNA)을 중합할 수 있는 효소입니다. RNA는 RNAase에 의해 쉽게 분해되므로 역전사 효소를 사용하여 cDNA를 생성하면 mRNA로 작업할 때의 문제를 극복할 수 있습니다. cDNA는 유전자 발현 분석과 같은 RNA 연구를 위한 다양한 다운스트림 응용에서 안정적인 템플릿이 됩니다. cDNA 템플릿의 증폭에는 일반 PCR, qPCR, one-step RT-qPCR 또는 등온법을 사용할 수 있습니다. 증폭 산물은 기존 효소 프로토콜을 사용한 클로닝 또는 T4 DNA polymerase의 3’→ 5’ 엑소뉴클레아제 활성을 활용한 독립적인 라이게이션 클로닝을 수행할 수 있습니다. 

모든 역전사 효소(RNA 의존성 DNA 중합효소)는 다음에 사용할 수 있습니다.

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역전사 효소

RNA 템플릿 또는 응용 분야의 요구 사항에 따라 역전사 효소 또는 키트를 선택하세요.

RNA 중합효소 및 리가아제

RNA 중합효소, 또는 더 구체적으로 DNA-directed RNA 중합효소는 DNA 템플릿에서 RNA를 합성하는 효소입니다. Poly(A) 중합효소는 단일 가닥 RNA를 프라이머로 사용하여 아데닌 잔기를 RNA의 3’ 종단점에 결합시키는 촉매 작용을 통해 RNA에 poly(A) 꼬리를 추가합니다. 

T4 RNA 리가아제는 특히 고처리량 RNA 염기서열 분석 및 마이크로어레이와 같은 절차의 업스트림에서 RNA 분석에 유용한 효소입니다. T4 RNA ligase 1과 2는 인접한 3'-OH 및 5'-PO4 폴리뉴클레오타이드를 결합하여 RNA의 라벨링, 원형화 또는 분자 간 라이게이션을 수행할 수 있는 효소입니다. T4 RNA ligase 1로 RNA 3' 말단에 어댑터를 부착하는 것은 RT-PCR 및 고처리량 염기서열 분석을 통한 RNA 정량화 및 발견에 유용한 첫 단계입니다.

이러한 중합효소와 리가아제를 사용하면 RNA를 쉽게 조작할 수 있습니다.

RNA 분해 및 보호

리보핵산분해효소 보호 분석(RPA)은 효소 RNase A를 사용하여 상대적 또는 절대적 전사체 존재비(abundance)를 결정하고 mRNA 종단점 및 인트론/엑손 경계를 매핑하는 데 사용되는 기술입니다.

단일 염기 치환은 RNA:DNA heteroduplexes 의 단일 염기 불일치에 대한 RNase A 절단과 관련된 간단한 효소법으로 검출 및 위치 확인이 가능합니다.

이러한 특정 리보핵산 내부 분해효소 중 하나로 RNA를 분해합니다. QIAGEN의 RNase 억제제로 RNA를 보호하세요.
* RNase A는 낮은 염 농도(0~100mM NaCl)에서 단일 가닥 및 이중 가닥 RNA뿐만 아니라 RNA-DNA 혼성체의 RNA 가닥도 절단합니다. NaCl 농도 0.3M 이상에서 RNase A는 단일 가닥 RNA를 특이적으로 절단합니다.

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RNA 분석에 대한 FAQ

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