粘着または平滑：修正、アニーリング、ライゲーション
クローニング用酵素
テンプレートDNAを適切なプラスミドベクターにクローニングする前に、末端修飾が必要になる場合があります。クローニング用に同定したDNAは通常、制限酵素消化またはPCR増幅によってソースから分離されます。 Klenow Fragment、T4 DNAポリメラーゼ、T4ポリヌクレオチドキナーゼなどの特殊な酵素は、3’または5’末端を修飾し、DNA断片とベクターの共有結合を改善します。
次のクローニングステップは、ベクターとインサートの末端をアニーリングするのに適した酵素を用いたライゲーション です。
テーリングは通常、TAクローニングに使用するT-ベクターの調製や、TAクローニングに使用するハイフィデリティポリメラーゼ（Taqではない）によって生成したPCR産物をAテーリングするために行われます。Taq DNAポリメラーゼ（Taq）による増幅産物は、すでにA-テーリングされています。
DNAの末端修飾
*T4 DNA Polymeraseの3’→5’エキソヌクレアーゼ活性は、シークエンシングおよびライゲーション非依存姓クローニング（SLIC）のプロトコールに不可欠です。
† 平滑末端DNAへの変換は、T4 DNA Polymerase（P7080）の5’→3’ポリメラーゼ活性と3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を利用することによって実現します。T4 Polynucleotide Kinase（Y9040）は、T4 DNAリガーゼによるその後のライゲーションのために、平滑末端DNA断片の末端を確実に5’リン酸化します。
DNAライゲーション
† 耐熱性。ギャップやミスマッチ塩基対がないニックの正確なライゲーションに適しています。
これは、SLICのクローニング方法です
シークエンシングおよびライゲーション非依存性クローニング（SLIC）はエキソヌクレアーゼの酵素活性を利用します：
次世代シークエンシング用クローニング
次世代シークエンシングを目的とするライブラリは、断片化したDNAからスタートします。酵素の作用により、クローニングステップが完了します。
DNAライブラリー調整に必要なすべての酵素成分をアダプターで、「自家製」ライブラリー作成キットにアセンブリできます。
遺伝子合成
遺伝子合成は、長い相補的オーバーラップ領域を持つオリゴデオキシヌクレオチドの結合に基づいています。
クローニングおよびDNA組換用の注目の酵素をご覧ください
クローニングおよび組換え用酵素に関するFAQ
新しいラボをセットアップしますか？ お近くの営業担当者までぜひお問い合せください