Pharmaceutique et biotechnologie

Thérapie génique

Thérapie génique – créer des thérapies sûres et efficaces

La thérapie génique implique la transmission de matériel génétique dans les cellules corporelles du patient en vue de traiter ou potentiellement soigner diverses maladies génétiques.

La thérapie génique est en général mise en œuvre à l’aide de transfert de gènes à médiation virale à l’aide d’un virus adéno-associé (AAV) ou d’un lentivirus. Les vecteurs AAV ont une taille réduite (-5 kb), mais il s’agit de virus non intégratifs qui présentent une expression transgénique prolongée. Ils ne peuvent se propager sans un virus assistant, ce qui les rend sûrs pour un usage clinique.

La dPCR joue également un rôle important dans la maîtrise de la contamination, un processus essentiel des environnements de fabrication destiné à minimiser et éliminer les substances indésirables, notamment dans la production de biopharmaceutiques. La dPCR permet une sensibilité accrue de détection avec un échantillon de moindre quantité, les applications sont ainsi plus fiables.

Flux de travail de la thérapie génique

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Thérapie génique par AAV | Quantification et intégrité du titre viral

Les virus adéno-associés (AAV) jouent un rôle essentiel dans la thérapie génique en tant que vecteur de distribution de gènes thérapeutiques, grâce à leur capacité à transférer une grande variété de types cellulaires et à leur immunogénicité relativement faible. Il est essentiel de quantifier et de caractériser les AAV avec précision pour garantir le dosage précis du patient. La qPCR est une méthode largement utilisée pour la quantification du titre des AAV. Mais cette technique est limitée par la présence d’inhibiteurs de PCR susceptibles d’entraver l’amplification et d’introduire une variabilité, sans compter qu’elle demande une courbe d’étalonnage.

À l’inverse, la PCR numérique affiche une efficacité d’amplification accrue et une tolérance aux inhibiteurs supérieure à la qPCR, compte tenu du fractionnement et de la mesure en point final, et ne nécessite pas de courbe d’étalonnage.

Nous avons mis au point un nouveau flux de travail pour la quantification du génome du vecteur viral, de la lyse de la capside à la détermination du titre et de l’intégrité, avec des dosages simples et multiples pour quantifier et qualifier les AAV à l’aide du QIAcuity Digital PCR System.

L’un des avantages d’utiliser la dPCR en nanoplaques pour la quantification de l’ADN résiduel de cellule hôte est la facilité à configurer et à détecter l’ADN de cellule hôte, grâce au master mix prémélangé et au contrôle interne/positif. Un autre avantage réside dans la précision de détection d’ADN résiduel d’E .coli, de CHO et de cellules HEK293 à de faibles taux de femtogrammes, même en présence de contaminants et inhibiteurs de PCR.

Partenariat avec Niba Labs

Niba Labs s’engage à développer des solutions analytiques innovantes pour l’industrie biopharmaceutique dans le domaine des thérapies cellulaires et géniques. Nous traitons des attributs de la qualité tels que le titre et l’intégrité du génome des vecteurs, ainsi que la biodistribution grâce à des techniques de PCR numérique de pointe.

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Nous pouvons développer des dosages et analyser des échantillons en vue de fournir des études de biodistribution conformes aux BPL. En outre, nous pouvons assister nos clients du développement de la méthode à sa validation et à l’analyse d’échantillons en vue d’obtenir le certificat BPF pour des méthodes telles que la PCR numérique, la real-time PCR et ELISA. De plus, nous prenons en charge la caractérisation des échantillons grâce à un séquençage et une microscopie électronique en transmission à haut débit.

« Niba Labs s’engage à développer des solutions analytiques innovantes pour l’industrie biopharmaceutique dans le domaine des thérapies cellulaires et géniques, et à étudier de façon rigoureuse les attributs de la qualité tels que le titre du génome des vecteurs et l’intégrité du génome des vecteurs », affirme David Dobnik, PhD, CSO chez Niba Labs.

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Ressources relatives aux applications de thérapie génique

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Nous savons bien qu’une solution unique n’est pas adaptée à toutes les situations. Nous proposons des produits, technologies et services destinés à la recherche sur la thérapie génique. Contactez-nous, nous définirons ensemble un pack sur mesure pour vous.

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Maîtriser la contamination

La maîtrise de la contamination implique le respect de procédures et de normes rigoureuses afin de veiller à ce que les contaminants, tels que l’ADN résiduel de cellule hôte (resDNA ou HCD), ne compromettent pas la sécurité et l’efficacité du produit. Un transfert d’ADN résiduel de cellule hôte (HCD) induit des risques importants de sécurité lors de la fabrication de traitements à base de protéines et de vaccins. Ces risques incluent l’oncogénicité, l’infectivité et l’immunogénicité imputables au produit final. Par conséquent, les taux de HCD ne doivent pas dépasser ceux définis par les organismes de réglementation tels que la Food and Drug Administration (FDA) et l’Organisation mondiale de la Santé (OMS).

En outre, l’ADN contaminant dans vos réactifs de PCR peut être une source importante de fond et de faux positifs. Une production ultra-propre améliore la spécificité et l’efficacité de la PCR numérique avec sondes, cela permet une analyse unique (singleplex), voire jusqu’à 5-plex, de précision. Des processus dédiés sont intégrés pour permettre une production ultra-propre du master mix, ce qui limite le fond d’ADN contaminant et le biais de GC et vous permet de vous fier totalement à vos réactifs de PCR. C’est le choix parfait pour des applications microbiennes sans contamination et des applications de contrôle qualité, comme les tests d’ADN résiduel.

Détection des mycoplasmes

Les mycoplasmes sont des contaminants courants dans les produits biologiques dérivés de lignées cellulaires dans l’industrie biopharmaceutique. Ils sont souvent introduits soit à partir des lignées cellulaires source, soit au cours de la production. De nombreuses directives et documents techniques abordent le risque des infections au mycoplasme au cours du processus de fabrication.

La PCR numérique est une méthode efficace de détection de ces infections au mycoplasme dans les cultures cellulaires et produits biologiques connexes. Par exemple, le kit QIAcuity Mycoplasma Quant Kit est un kit RT-dPCR extrêmement sensible capable de détecter l’ARNr et l’ADN de 127 espèces de mycoplasmes. Ce kit comprend un contrôle interne pour éviter les faux négatifs entraînés par les inhibiteurs de PCR ou les erreurs lors de l’extraction d’ARN et des réactions de transcriptase inverse.

D’autre part, les kits de quantification QIAcuity Residual DNA Quantification Kits fournissent des résultats précis de quantification d’ADN résiduel (resDNA) de CHO, d’E. coli et de HEK293, avec ou sans extraction, même en présence de contaminants de PCR et d’autres réactifs inhibiteurs. Les dosages sont des dosages cibles multicopies qui déterminent avec précision l’ADN résiduel de cellule hôte fortement fragmenté

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Accélérez vos thérapies géniques grâce aux données

De l’analyse des données aux bases de données, de l’expression génique à l’assemblage du génome, de l’interprétation à l’intégration – QIAGEN Digital Insights présente les caractéristiques et qualités des outils de bio-informatique qu’il vous faut pour obtenir des informations pertinentes et faciliter des découvertes en matière de thérapie génique.