La novedad absoluta en PCR – PCR digital

El poder de la PCR digital: encontrar «la aguja en el pajar»

La PCR digital (dPCR) es una técnica en la que la muestra se divide en muchas reacciones individuales, de tal modo que en cada reacción estén presentes cero, una o más moléculas diana. Gracias a este enfoque es sorprendentemente fácil detectar un solo positivo en un fondo muy potente de negativos, el típico problema de encontrar «la aguja en el pajar». En estos casos, debido a la existencia de un límite de detección más bajo, quedan excluidas las real-time PCR estándar cuantitativas (qPCR) como posible método.

La característica definitoria de la PCR digital es la cuantificación absoluta de los ácidos nucleicos. Después de la partición, las reacciones se someten a termociclado de PCR convencional y las particiones se analizan para determinar la presencia (reacción positiva) o ausencia (reacción negativa) de una señal de fluorescencia. Atendiendo a esta información, se puede calcular el número absoluto de moléculas presentes en la muestra. A diferencia de la qPCR, la dPCR no se basa en curvas estándar. Por ello, la dPCR tiene un límite de detección más bajo y una precisión mayor que la qPCR.

Los investigadores utilizan cada vez más la PCR digital para aplicaciones sensibles, como el análisis de variación del número de copias, la cuantificación de la expresión génica y la detección de dianas poco frecuentes. El método ha ayudado a avanzar en la investigación de terapias celulares y genéticas, la investigación del cáncer, la vigilancia de enfermedades infecciosas, las pruebas de alimentos, etc.

Revelamos el secreto

Los métodos de partición de muestras en la PCR digital incluyen chips de microfluidos, micromatrices, discos de microfluidos giratorios y técnicas de gotas basadas en emulsiones de aceite y agua. Hemos reinventado la familiaridad, la facilidad de uso y una resolución más precisa, y hemos desarrollado nanoplacas de microfluidos para lograr una partición superior y datos PCR digitales mejorados.

Sin gotas. Sin cristales. Sin chips.

Las ventajas clave de las PCR digitales en nanoplacas son, entre otras muchas, las siguientes:

• Las placas son fáciles de usar y el pipeteo es sencillo, como en las qPCR.
• Las divisiones fijas evitan las variaciones de tamaño y la fusión.
• Las nanoplacas selladas evitan la contaminación cruzada entre pocillos.
• Se agiliza el análisis de los resultados gracias a la lectura simultánea de todas las divisiones de una muestra.
• Se aplica un control de calidad integrado, lo que significa que el usuario puede observar la placa para detectar señales fluorescentes únicas de los recuentos de partes positivas individuales.
• Las placas son compatibles con la automatización de las fases iniciales.

Ventajas frente a las PCR digitales por gotas (ddPCR)

Además de las ventajas destacadas anteriormente, el QIAcuity Digital PCR System basado en nanoplacas ofrece ventajas significativas con respecto a los sistemas basados en la PCR digital por gotas.

Todo el flujo de trabajo de las PCR digitales está integrado en un solo sistema, lo que lo hace considerablemente más rápido, con menos tiempo de intervención y mayor escalabilidad.

Más información sobre dPCR frente a ddPCR