CAR T cell immunotherapy, chimeric antigen receptor T cell immunotherapy, proteins, cell therapy, gene therapy
Pharma und Biotech

Zelltherapie

Bei der Zelltherapie werden Zellen mit der gewünschten Funktion in den Patienten oder die Patientin übertragen. Die Zellen werden außerhalb des Körpers modifiziert, bevor sie dem Patienten injiziert werden. Sie können vom Patienten selbst (autologe Zellen) oder von einem Spender (allogene Zellen) stammen. Ein Beispiel für Zelltherapie sind CAR-T-Zellen. Eine sorgfältige Qualitätskontrolle ist unabdingbar, um ihre Wirksamkeit und Reproduzierbarkeit aufrechtzuerhalten.

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CAR-T-Zellen

Chimäre Antigenrezeptor(CAR)-T-Zellen sind auf dem besten Weg, zu einer vielversprechenden Behandlung für Krebs- und Immunerkrankungen zu werden. T-Zellen werden genetisch mit CAR modifiziert, die antikörperbasierte Erkennungsdomänen für Oberflächenantigene auf dem Zielzelltyp aufweisen.

T-Zellen und neuerdings auch NK-Zellen können mithilfe von Lentiviren und Retroviren genetisch manipuliert werden. Virusvektoren weisen eine hohe Transduktionseffizienz auf, bereiten aber Probleme durch Immunogenität und Zelltoxizität.

CAR T cell immunotherapy, chimeric antigen receptor T cell immunotherapy
Pipetting artus cleanroom, manufacturing of an artus mastermix

Entwicklung von CAR-T-Zellen

Aktuelle Forschungsbestrebungen konzentrieren sich auf den Einsatz von CRISPR-Editierung zum Engineering von CAR-T-Zellen für reproduzierbare, sichere und leistungsstarke CAR-T-Zell-Produkte. Der derzeitige Herstellungsprozess für CAR-T-Zellen erfordert eine spezielle Ausrüstung und fundierte technische Expertise – die Ausarbeitung sicherer und dabei einfacher Entwicklungsmethoden für CAR-T-Zellen ist also dringend nötig. Ein alternativer Ansatz ist die In-vivo-Reprogrammierung von CAR-T-Zellen unter Einsatz von Nanotechnologie zur Verkapselung CAR-exprimierender Plasmide. Virusvektoren wie Lentiviren wurden ebenfalls für die In-vivo-Generierung von CAR-T-Zellen getestet.

Wir bieten eine Reihe von Produkten für die Quantifizierung von Virustitern und Virusvektoren, den Nachweis restlicher Wirtszell-DNA und Lösungen für die CRISPR-vermittelte Editierung für das CAR-T-Zell-Engineering an.

Lentivirus-Produktion

Eine der vielseitigsten Gentransfermethoden für T-Zell-Therapien arbeitet mit rekombinanten Lentivirusvektoren, da diese sowohl teilungsfähige als auch nicht teilungsfähige Zellen transduzieren können. Effektive und reproduzierbare Zelltherapien erfordern sensitive und präzise Methoden zur Qualitätskontrolle der Lentivirus-Produktion. Die traditionelle qPCR-Quantifizierung von Nukleinsäuren kann durch PCR-Inhibitoren beeinträchtigt werden und zudem einen Referenzstandard für die Quantifizierung erfordern. Das QIAcuity Digital PCR System hingegen ermöglicht eine schnelle, reproduzierbare und absolute Quantifizierung von Virusvektoren und Virustitern ohne Referenzstandard, und gewährleistet so Qualität und Reproduzierbarkeit in der Zelltherapieforschung. Die Technologe hat außerdem eine höhere Toleranz gegenüber Inhibitoren als die qPCR.

Cignal, lentivirus
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Literatur

Lindsey A. Murphy et al. (2022). Digital polymerase chain reaction strategies for accurate and precise detection of vector copy number in chimeric antigen receptor T-cell products. Cytotherapy.https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2022.09.004

Lindsey A. Murphy et al. (2021). Detection of Vector Copy Number in Bicistronic CD19xCD22 CAR T Cell Products with Digital PCR. Blood. 138 (1): 4001.https://doi.org/10.1182/blood-2021-153889