Taqs mögen es heiß und manche mögen es von Anfang an heiß
Standard-PCR oder Hot-Start-PCR?
Die Standard-Taq-Polymerase entfaltet ihre optimale Aktivität bei 72 °C, doch aktiv wird das Enzym schon ab etwa 37 °C. Die Aktivität bei niedrigeren Temperaturen ist beträchtlich und hat den Nachteil, dass sie unspezifische Amplifikationen und Mispriming-Ereignisse während der anfänglichen Niedrigtemperaturphase einer PCR-Reaktion zulässt. Für eine automatisierte PCR sollten Sie eine Hot-Start-Taq-Polymerase verwenden.
Hot-Start-Polymerasen sind, anders als die Standard-Taq, bei Raumtemperatur nicht reaktiv. Hot-Start-PCR-Techniken folgen dem gleichen Prinzip wie die konventionelle PCR, mit dem Unterschied, dass die Enzymaktivität unterdrückt wird, bis der erste Denaturierungsschritt abgeschlossen ist. Dies minimiert unspezifische Bindungen und Fehlpriming, wodurch die Spezifität verbessert wird. Darüber hinaus bietet diese Technik den großen Vorteil, dass die Reaktionen bei Raumtemperatur angesetzt werden können, was eine Automatisierung der PCR ermöglicht. In einigen Fällen verbessert sich sogar die Sensitivität, da durch die unspezifische Amplifikation die für die spezifische Zielamplifikation erforderlichen Reaktionskomponenten verbraucht werden.
Alle Taq-Polymerasen eignen sich für: