Verogen ForenSeq Kintelligence Kit

• 精简了工作流程，以提高法医相关 SNP 的评估效率
• 经整理的法医相关标记基因可尽量减少医疗数据隐私问题
• 单 SNP 多重处理适用于全球人群
• 将 ForenSeq 和 GEDmatch 工作流程与应用专属支持相结合
• 保持对实验室证据和相关数据的完全控制权

利用 ForenSeq Kintelligence Kit，针对明确整理用于获得扩大范围亲缘关系结果的 10,230 个 SNP 标记基因。ForenSeq Kintelligence 是唯一专为法医遗传谱系学（Forensic Genetic Genealogy，FGG）设计的基于序列的检测，通过排除全基因组测序（Whole-Genome Sequencing，WGS）或基于阵列的工作流程中发现的医学信息性和次要等位基因频率 SNP，最大限度地减少隐私问题。稳健的 PCR 和引物设计使单 SNP 多重处理适用于全球人群。

ForenSeq Kintelligence 是一种法医遗传谱系学（Forensic Genetic Genealogy，FGG）集成解决方案。在精简过的单一工作流程中对文库进行制备、测序和分析，以提高法医相关 SNP 的评估效率。该试剂盒根据现有基于 STR 的方法并参考市场上的方法以及成熟的研究和数据库进行开发，可让实验室对法医DNA 样本（包括那些输入量低和严重降解的样本）进行靶向测序和准确的分析。ForenSeq Kintelligence 在既有方法论的基础上，通过应用经过整理的 SNP 集、低输入量要求和经过法医验证的工作流程，提供了为悬案、失踪人口和身份不明人类遗骸找到走出死胡同并发现突破口的机会。

• 在经过验证的系统上对受损样本进行测序，以轻松获取结果
• 经过整理的内容设计确保了数据私密性，并根据法医相关性选择了 SNP 集
• 将证据和相关数据存放在实验室，并保持完全控制权
• 为 ForenSeq 和 GEDmatch 这两个熟悉工作流程的结合使用提供了全面的整合和支持

悬案样本和失踪人口样本往往会因年代久远、暴露于环境因素和污染物以及经过多变的提取和存放程序而劣化。因此，Verogen 将 ForenSeq Kintelligence Kit 设计为通过对降解和受抑制的案件工作类型样本进行分析研究，并通过对照样本进行灵敏度评估，从而使该试剂盒能在各种 DNA 输入量条件下可重现地生成 SNP 鉴定结果，从而从受损样本中获得高回收率。

ForenSeq Kintelligence 在模拟案件工作研究中表现出色，能够从降解的血液样本、受钙抑制的牙齿样本以及受到火化、焚烧和防腐等损伤的同时期骨骼样本中获得了高检出率。灵敏度评估对输入量为 5 ng 到 50 pg 的对照 DNA 进行了评估。从 5 ng 到 250 pg 的输入量都达到了 100% 的检出率。在 100 pg 和 50 pg 下的性能同样很高，分别为 99.9% 和 99.6%（见“对照 DNA 在一系列输入量下的灵敏度滴度”图）。约达 1500 倍的靶标位点高平均覆盖率为高检出率创造了条件，并确保检出结果的可靠性。

由于悬案样本暴露在自然环境中，且因年代久远而长期降解，因此很容易无法通过质量控制检查，并导致覆盖率低。这会导致 DNA 回收率低，并影响等位基因的检出率。为了最大限度地提高回收率，ForenSeq Kintelligence 缓冲液可耐受许多常见的抑制剂，包括血红素、腐植酸、靛蓝和单宁酸，以及大肠杆菌等微生物污染物。对于掺入 10 ng 微生物 DNA 的 1 ng gDNA 样本，Verogen 观察到的 SNP 回收率达到了 100%。受添加的大量其他常见法医抑制剂抑制的对照样本表现出高达 99.2% 的高平均检出率，与对照样本相当（见“抑制剂性能评估”图）。高平均检出率实现了样本的深层覆盖，不受低输入量的影响。

强大的聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）和引物设计实现了单 SNP 多重处理，无需进行多次检测。扩增子平均大小较小 (< 150 bp)，提高了扩增效率，并便于回收和分析已降解的 DNA。此外，ForenSeq Kintelligence Kit 还包括六个唯一双index（Unique Dual Indices，UDI）接头，可将唯一的识别序列连接到样本的两端，以获得最佳的数据恢复效果。

ForenSeq Kintelligence 可查询 10,230 个 SNP，这些 SNP 都经过精心挑选，用于支持 FGG 的靶向测序。

这些 SNP 与 Illumina Infinium CytoSNP-850K BeadChip 和 Infinium Global Screening Array 中的相关标记基因重叠，并与基因组聚合数据库 (gnomAD) v3.0 和单核苷酸多态性数据库 (dbSNP) v151 进行了交叉参照，以确保在全球人群中获得稳健表现。重要的是，ForenSeq Kintelligence 排除了已知与医学相关或次要等位基因频率低的 SNP，以减少隐私问题并保护基因健康数据。

ForenSeq Kintelligence 的设计受到了 ForenSeq DNA Signature Prep 的影响，加入了所有经过调查线索生成验证的生物地理学祖先、身份和表型 SNP。此外还加入了作为参考的 Y-SNP 和 X-SNP，它们分别有助于确定血统和生物性别。

优化过的缓冲液系统可耐受法医样本中常见的一系列抑制剂，如钙、靛蓝和腐殖酸，从而获得超过 98% 的检出率。检测设计具有高水平的流程完整性和数据质量，因此即使是最具挑战性的法医样本分析，也能获得值得信赖的结果。

ForenSeq Kintelligence 的投入样本与法医实验室常用的 DNA 提取方法兼容。文库制备利用的核心 ForenSeq 化学试剂是 Verogen 文库制备产品组合的基础。ForenSeq Kintelligence 试剂可在 8 小时内制备多达 12 个双index人类特异性文库，其中的手动操作时间仅为 1 小时 55 分钟。测序在 28 小时内完成，分析在 1 小时内完成，全集成式 NGS 工作流程可在不到 40 小时内提供结果，包括可由用户直接上传到数据库的 GEDmatch PRO 报告。如果存在匹配项，GEDmatch PRO 可在不到 2 天内得出结果。

除了提供包括均一化在内的快速文库制备外，ForenSeq 化学试剂还能非常灵活地适应口腔拭子、血液、骨骼和牙齿等样本来源，而 25 μl 的输入容量可增强对降解和抑制样本的支持。12 次反应试剂盒包括用于扩增的预混液、用于清理的纯化珠和具有六个安全停止点的简明方案。

FGG 将微阵列基因分型或全基因组测序（Whole‑Genome Sequencing，WGS）DNA 图谱生成方法与 GEDmatch 等家谱数据库中的遗传亲属比较相结合，GEDmatch 是用于法医比较的容纳自愿提交 DNA 图谱的最大规模数据库。通过在数据库中进行比较，家谱学家可以利用人口普查记录、人口记录、讣告和报纸档案构建家谱，然后通过家谱追溯 DNA 的来源。

基于微阵列和 WGS 的方法无法支持与法医案件相关的全谱系生物样本。这些样本通常会因来源材料的年代久远或环境暴露而降解或受到抑制，导致数据质量低下，令 FGG 受到限制。微阵列和 WGS 还会产生大量与医学相关的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）数据，但这些数据并不适用于法医应用，从而引发对基因数据隐私和使用的担忧。ForenSeq Kintelligence Kit 是唯一适合法医用途的 FGG 检测试剂盒。ForenSeq Kintelligence 专为在美国国家 DNA 索引系统（National DNA Index System，NDIS）认可的 MiSeq Fgx Sequencing System 上进行测序、在 Universal Analysis Software (UAS) 中进行数据分析以及在 GEDmatch PRO 中进行远亲关系分析而设计，与 Verogen STR 检测相结合，可帮助您完成从 DNA 到确认身份的整个流程。

ForenSeq Kintelligence Kit 的端到端工作流程以成熟的 ForenSeq 流程为基础，可在单一、成熟可靠的平台上进行多种 DNA 分析。ForenSeq Kintelligence Kit 与 UAS 中的 ForenSeq Kintelligence 分析模块无缝衔接，可快速评估数据并一键生成报告。

我们为从文库制备到测序再到分析的整个工作流程提供卓越支持。我们经验丰富的团队为您的设备和软件提供全面的服务覆盖、验证计划和实施指导，使您能快速轻松地将工作流程投入运行。