QuantiNova Pathogen +IC Kit

• 预先优化的内质控，无需额外费用
• 用于同时检测病原体靶标和内质控的 4 重 (RT)-PCR
• 独特的两阶段热启动程序，便于进行室温配制
• 预混液中包含稳定的 RT 组分，提供了一种易用的实验方案
• 可视化移液对照可尽量减少错误

QuantiNova Pathogen +IC Kit 设计用于使用序列特异性探针对病原体核酸进行灵敏而又快速的 Real-time (RT-) PCR 检测。该试剂盒包含用于对用户目标病原体靶标（例如病毒、细菌、真菌等）进行 4 重实时检测的试剂以及 QuantiNova Internal Control (IC) RNA 或 DNA。IC 和 assay 都包括在内，可用作提取或扩增对照，从而能够正确解读阴性检测结果。此外，该超快速、即用型试剂盒还提供方便的室温反应配制，以实现精简的自动化工作流程以及可视化移液对照，从而提高操作和安全标准。为方便起见，预混液可存放在 2-8°C 环境下。

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在进行多重检测时，QuantiNova Pathogen + IC Kit 能够在宽线性范围内同时检测病毒 RNA 或 DNA 靶标以及 QuantiNova Internal Control (IC) 而不会损失灵敏度。该方案的开发宗旨是在大多数定量 PCR 仪上以超高可靠性运行超快循环反应实验。病原体靶标和 IC RNA 或 DNA 的联合扩增可确保对阴性结果的正确解读，从而提高过程安全性。内含 IC 可用于监测核酸纯化和扩增过程，而可视化移液对照允许在手动或自动移液后进行目视检查（请参阅图 内置移液对照可显示准确的反应配制）。通过独特的两阶段热启动程序，可以在室温下执行手动或自动反应配制，而不会影响性能（请参阅图 新型 QuantiNova 两阶段热启动机制的原理）。即使在存在抑制剂的情况下 QuantiNova Pathogen +IC Kit 依然保持稳定，并且允许使用简并引物/探针。该试剂盒提供超快速、过程中受控的多重 qPCR，从而提高工作流程效率和可靠性。

为了能够通过正确解读阴性结果实现更高过程安全性，每个 QuantiTect Pathogen +IC Kit 都包含用于多重实时检测用户目标病原体靶标以及内质控的试剂。在同一反应中扩增靶标和对照基因，可通过尽量减少操作错误来提高可靠性。随附 IC 可用于测试是否成功扩增（例如，排除 PCR 抑制剂），或在核酸纯化之前添加到样本中，以同时对纯化过程以及 PCR 或 RT-PCR 扩增的效率进行质控。Real-time PCR 和一步法 RT-PCR 可以使用相同的方案同时运行。该试剂盒还采用两阶段热启动程序（请参阅图 新型 QuantiNova 两阶段热启动机制的原理）。这包括 50°C 下 HotStaRT-Script 逆转录酶和 95°C 下 PCR 聚合酶的热介导活化。在低温下，HotStaRT-Script 与 RT-Blocker 分子形成复合物，进而导致失活。在 50°C 下，复合物解离并释放活性 HotStaRT-Script 酶。QuantiNova DNA Polymerase 在 QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard（一款具有复合物稳定化作用的新型添加剂）的作用下保持在失活状态。这提高了热启动程序的严格性并防止非特异性退火引物的延伸及引物二聚体的形成。–在温度升高到 95°C 的两分钟内，QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard 将发生变性，QuantiNova DNA Polymerase 将被激活，从而启动 PCR 扩增。这种独特的两阶段热启动使反应设置能够在室温下保持稳定至少 1 小时，从而防止产生假阳性并有利于自动化反应配制。
此外，试剂盒随附的预混液含有惰性蓝色染料，不会干扰逆转录或 Real-time PCR，但可提高反应管或孔的可见性。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 中包含惰性黄色染料。当用 QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 稀释的模板核酸添加到预混液中时，溶液的颜色从蓝色变为绿色，从而为正确移液和反应配制提供视觉指示（请参阅图 内置移液质控可显示准确的反应配制）。预混液包含 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合以及独特的 Synthetic Factor MP，它们共同促进引物和探针稳定且高效地退火到核酸模板，即使在多重反应中也能实现高 PCR 效率（请参阅图 独特的多重 PCR 缓冲液可促进稳定高效的退火）。专门开发的 PCR 缓冲液含有 Q-Bond，可显著减少变性、退火和延伸时间（请参阅图 退火过程中的快速循环机制。试剂盒附带的 QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 可在稀释和反应配制过程中稳定 RNA 和 DNA 标准品，并防止反应或移液器吸头等塑料表面的核酸残留。预混液在 2–8° C 下可存放长达 12 个月，并且反应在室温下可稳定至少 1 小时，便于进行自动化实验流程。