Certal Residual DNA Detection Kit
适用于灵敏的探针法 CHO 宿主细胞残留 DNA（包含内质控）检测
Certal CHO Detection Kit (100)
Cat. No. / ID: 211822
适用于 100 次 25 µl 反应：1.25 ml Certal Residual DNA PCR Master Mix、Certal Internal Control DNA 和 Assay、CHO DNA Positive control 和 CHO-Assay、100 µl Uracil-N-Glycosylase、210 µl High-ROX Dye Solution、210 µl ROX Dye Solution、Nucleic Acid Dilution Buffer、TE Buffer
Certal Residual DNA Detection Kit 适用于药物产品测试中的分子生物学应用。这些产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。见商标。
特点
- 定量限低，可重现性出色
- 高线性范围
- 可靠而又精确的内质控
- 经过优化的方案适用于多种实时定量 PCR 仪
- 包括内质控和阳性对照的完整试剂盒
产品详情
在生物制药行业，必须对最终的治疗材料进行评估，以确保其不含污染物质，如宿主细胞中的残留 DNA。Certal Residual DNA Detection Kit 设计用于采用双标记水解（也称 TaqMan®）探针，灵敏、快速地对宿主细胞基因组 DNA 残留进行 Real-time PCR 定量。Certal CHO Detection Kit 包含用于通过双重 Real-time PCR 检测 CHO 宿主细胞残留 DNA 的试剂以及 Certal Internal Control。该试剂盒还包括 Certal Residual DNA Positive Control（用于在缺少 CHO 宿主细胞 DNA 信号的情况下验证 PCR 检测的功能）和 2 种不同浓度的 ROX 参比荧光染料，从而可在几乎任何实时定量 PCR 仪器上使用。
绩效
Certal Residual DNA Detection Kit 可灵敏可靠地检测和定量残留基因组 DNA (gDNA)，这对生产安全可靠的生物药品至关重要（请参阅图“ 高度灵敏而又可靠的检测”）。Certal CHO Detection Kit 可检测中国仓鼠卵巢 (Chinese Hamster Ovary, CHO) 细胞中的残留 gDNA，检测限低，线性范围广，从而确保能够可靠低检测低浓度的残留 gDNA（请参阅图“ 检测限低”）。Certal Residual DNA Detection Kit 与多种定量 PCR 仪兼容，可提供灵敏可靠的数据（请参阅图“ 在多种定量 PCR 仪上进行灵敏而又可靠的检测”和“ 在 Rotor-Gene Q 上对 CHO 基因组 DNA 进行灵敏而又可靠的检测”）。
为了实现高过程安全性，Certal Residual DNA Detection Kit 包括了 QIAGEN Internal Control，它是专为实现正确解读阴性结果和不干扰靶标检测而设计的。当与基因组 DNA 共扩增时，能可靠地检测到 QIAGEN Internal Control（请参阅图“ 可靠的 QIAGEN Internal Control 检测”）。
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原理
为确保最终治疗材料中不含有来自用于生产生物药品的宿主细胞系的污染物质，Certal Residual DNA Detection Kit 提供了一种预先设计的检测体系，可对 CHO 宿主细胞 DNA 进行特异性检测。每个 Certal Residual DNA Assay 都由优化过的一对引物和一个 FAM 标记的水解探针组成，用于可靠地检测残留的 CHO 基因组 DNA。人类背景 DNA 和 Certal Internal Control DNA 不会干扰 Certal Residual DNA Assay。
预混合的 Certal Residual DNA Assay 含有一组正向和反向引物和一条 MAX 标记水解探针，用于检测 Certal Internal Control DNA。它经过专门优化，可防止干扰 Certal Residual DNA Assay。Certal Residual DNA Positive Control 可通过测试扩增反应本身的功能而对阴性结果进行正确的解读。
Certal ResDNA PCR Buffer 经过优化，可提供灵敏可靠的双重 Real-time PCR 定量结果。预混液中还含有 dUTP，可在开始 PCR 之前用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 进行预处理，确保任何具有污染性的 PCR 产物都不会影响后续的 PCR 反应。
| 组分 | 特点 | 优势 |
| Certal Residual DNA Assay 和对照 DNA | ||
|---|---|---|
| 50x Certal Residual DNA Assay | 经过预先设计、优化和验证的引物-探针组合（FAM 标记） | 可靠地检测残留 CHO 宿主细胞 DNA |
| Certal Residual DNA Positive Control | 将被 Certal Residual DNA Assay 扩增的阳性对照 DNA | 验证在样本中未检测到残留宿主细胞 DNA 的情况下 Certal Residual DNA Assay 是否工作正常 |
| 50x Certal Internal Control Assay | 经过预先设计、优化和验证的引物-探针组合（MAX 标记），用于检测 Certal Internal Control DNA | 仅特异性检测 Certal Internal Control DNA。经过优化，可防止干扰 Certal Residual DNA Assay |
| Certal Internal Control DNA | 将被 Certal Internal Control Assay 扩增的内质控 DNA | 排除 PCR 抑制剂的存在，在纯化步骤中添加时也可用于对纯化和扩增进行质控 |
| Certal ResDNA PCR Master Mix | ||
| HotStarTaq DNA Polymerase | 在 95°C 下 15 分钟活化 | 在室温下配制 qPCR 反应 |
| Certal ResDNA PCR Buffer | KCl 和 (NH4)2SO4 离子的平衡组合 | 特异性引物退火确保可靠的 PCR 结果 |
| Synthetic Factor MP | 可在一管反应中对多达 4 个基因进行可靠的多重分析 | |
| dNTP 混合物 | 包括 dUTP，可部分取代 dTTP，并可进行可选的 UNG 处理 | 用尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) 预处理反应时，可有效消除 PCR 产物的残留污染 |
| 其他组分 | ||
| 50x ROX Dye Solution | 单独的参比荧光染料管，用于在 Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System 上对荧光信号进行归一化处理。可选：可用于 Agilent 的 Stratagene 仪器 | 可在需要 ROX 染料的定量 PCR 仪上进行精确定量。不会干扰任何实时定量 PCR 仪上的 PCR |
| 50x High-ROX Dye Solution | 单独的参比荧光染料管，用于在 Applied Biosystems 7900 和 StepOne Real-Time PCR System 上对荧光信号进行归一化处理 | |
| 尿嘧啶-N-糖基化酶 (Uracil-N-Glycosylase, UNG) | 包含纯净、不含核酸酶的重组酶的独立小管 | 有效消除 PCR 产物的残留污染 |
| QuantiTect 核酸稀释缓冲液 | 用于稀释和保存核酸标准品的专有缓冲液制剂 | 在稀释和反应设置过程中稳定 RNA 和 DNA 标准品，并防止反应管或移液器吸头等塑料表面的核酸残留 |
程序
Certal Residual DNA Detection Kit 提供检测宿主细胞 DNA、Certal Internal Control 和 Certal Residual DNA Positive Control 的简单程序（请参阅图 Certal Residual DNA Detection Kit 程序）。只需将提供的预混液与 Certal Residual DNA Assay、Certal Internal Control Assay 和 Certal Internal Control DNA 混合，然后加入样本 DNA 或 Certal Residual DNA Positive Control。试剂盒手册中包含在各种定量 PCR 仪上使用的经优化方案。ROX 以 2 支不同浓度的小管形式提供，可在任何实时定量 PCR 仪器上使用（请参阅表“选择正确的 ROX 浓度”）。
| 仪器 | ROX Dye Solution | ||
| 非必需 | ROX Dye Solution | High-ROX Dye Solution | |
|---|---|---|---|
| Rotor-Gene Q | X | ||
| Rotor-Gene 6000 和 Rotor-Gene 3000 | X | ||
| Applied Biosystems 7500、ABI ViiA7 | X | ||
| Applied Biosystems 7900HT，StepOne 和 StepOne Plus，ABI PRISM 7700、7000 和 7300 | X | ||
| Mx3000P、Mx3005P、Mx4000 | X | 可选 | |
| iCycler iQ System | X | ||
| LightCycler 480 | X | ||
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应用
Certal Residual DNA Detection Kit 可使用序列特异性探针进行灵敏的实时 PCR，以检测宿主细胞 DNA（包括内部对照品）。这些试剂盒可用于多种实时定量 PCR 仪，包括 QIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche 和 Agilent 的定量 PCR 仪。
辅助数据和图表
可靠的 QIAGEN Internal Control 检测。
将目标 (CHO) 检测和内质控检测体系的引物和探针加入到 Certal ResDNA Master Mix 中。在加入内质控模板和样本模板并将反应体系完成上样后，就可立即使用各种定量 PCR 仪开始运行反应。可选择性地对 CHO 阳性对照品进行检测，并使用 UNG 来控制 PCR 产物的残留污染。
资源
快速启动实验方案 (1)
安全数据表 (1)
试剂盒操作手册 (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
Can the Certal CHO Positive Control DNA be used to create a qPCR standard for relative quantification?
How many freeze-thaw cycles can the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits tolerate?
On which cyclers can Certal Residual Detection Kits be used?
What is the label of the probe that is used in the Internal Control Assay to detect the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?
If a cycler from Applied Biosystems is used in combination with the Certal Residual DNA Detection Kit, should dye calibration for MAX be performed?
On what cyclers have Certal Residual DNA Detection Kits been validated?
Is there a risk of crosstalk from the FAM channel to the VIC channel if the residual DNA target is present in very high copy numbers?
What is the nature and target of the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?