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exoRNeasy Midi Kit (50)
Cat. No. / ID: 77144
For purification of total exosome-derived RNA; includes 50 exoEasy Midi columns and 50 RNeasy MinElute spin columns
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Kit试剂缓冲液
exoRNeasy Kit
Reagent UI
Buffer
离心柱类型
Midi
Maxi
Midi/Maxi
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit 旨在用于分子生物学应用。这些产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。
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特点
- 可处理大体积样本，可灵敏检测低丰度转录本
- 1小时内即可完成囊泡RNA的分离
- 采用离心柱纯化流程，能够平行处理多个样本
- 可从血清或血浆中分离miRNA和mRNA
产品详情
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用亲和性膜离心柱，可从exosomes和来自血清或血浆中的其他细胞外微泡中高效分离RNA。Maxi规格的分离柱可处理多达4 ml的大体积样本，因此能够可靠检测低丰度RNA。该试剂盒能够快速、便利的获得结果，十分适用于敏感的下游应用。
绩效
exoRNeasy纯化exosomes和其他细胞外微泡与超速离心法相比，不仅速度更快，并且产物纯度更高。扫描电镜显示，虽然这两种纯化技术都能够纯化预期大小的完整的囊泡，但超速离心法的产物还含有很多不符合预期的更小、或其他形状的细胞结构（参见Intact vesicles are eluted from the exoEasy membrane with higher purity compared with ultracentrifugation）。
此外，Bioanalyzer分析显示，exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似（参见exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles in plasma）。
通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞（参见exoRNeasy captures all mRNA and vesicle-specific miRNAs in plasma）。
此外，Bioanalyzer分析显示，exoRNeasy和传统超速离心方法分离得到的大RNA和小RNA长度和产量相似（参见exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles in plasma）。
通过RT-qPCR实验对exoRNeasy纯化的RNA产物和exoEasy分离柱流出液进行分析，结果显示，exoRNeasy的产物包括血浆中所有mRNA，包括细胞外囊泡的miRNA，且不含细胞（参见exoRNeasy captures all mRNA and vesicle-specific miRNAs in plasma）。
原理
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改进了传统的超速离心微泡分离方法，能够在20分钟内快速纯化得到细胞外囊泡。该试剂盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技术，通过离心柱和特制缓冲液，从多达4 ml的预过滤血浆中分离exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技术分离总RNA。整个实验流程，从血清/血浆样本到RNA产物，只需1小时。
程序
从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步：纯化exosomes和分离RNA（参见The exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit workflow — sample to microvesicles to total RNA in just 1 hour）。
在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。
在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。
在exosomes纯化步骤，预过滤的血浆（不包含大于0.8 μM的微粒）与Buffer XBP混合，加至exoEasay亲和性膜离心柱上，结合到柱上。使用Buffer XWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。
在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。
应用
exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit高度适用于从血浆或血清样本中的囊泡重分离包括mRNA和miRNA的总RNA。
辅助数据和图表
exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles present in plasma.
Bioanalyzer sizing was performed with vesicle-derived RNA purified by two methods. The plasma was pre-filtered (0.8 µm) to exclude larger particles and subjected to either ultracentrifugation, the current gold standard of vesicle isolation, or the exoRNeasy procedure. Both methods purify RNA of similar size and yield.
资源
学术海报 (2)
补充实验方案 (2)
试剂盒操作手册 (1)
快速启动实验方案 (2)
产品介绍与指南 (1)
安全数据表 (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Publications
Characterization of RNA from Exosomes and Other Extracellular Vesicles Isolated by a Novel Spin Column-Based Method.
PLoS One; 2015; 10 (8):e0136133 2015 Aug 28 PMID:26317354
miRNA contents of cerebrospinal fluid extracellular vesicles in glioblastoma patients.
J Neurooncol; 2015; 123 (2):205-16 2015 Apr 23 PMID:25903655
Urinary Exosomal miRNA Signature in Type II Diabetic Nephropathy Patients.
PLoS One; 2016; 11 (3):e0150154 2016 Mar 1 PMID:26930277
Curcumin inhibits in vitro and in vivo chronic myelogenous leukemia cells growth: a possible role for exosomal disposal of miR-21.
Oncotarget; 2015; 6 (26):21918-33 2015 Sep 8 PMID:26116834
The Swine Plasma Metabolome Chronicles "Many Days" Biological Timing and Functions Linked to Growth.
PLoS One; 2016; 11 (1):e0145919 2016 Jan 6 PMID:26735517