QuantiNova RT-PCR Kit

• 独特的两阶段热启动程序，可进行室温配制
• 可减少移液错误的可视化移液对照
• 用于成功 RT-PCR 过程中阳性验证的内质控
• 对跨越多个数量级的模板进行精确定量
• 在 1 管反应中灵敏地检测多达 5 个靶标

QuantiNova RT-PCR Kit（Real-time PCR 试剂盒）使用 SYBR Green I 或序列特异性探针，通过实时一步法 PCR 对 RNA 靶标进行灵敏定量。各种集成安全功能相结合可消除变量并防止假阳性，从而确保可靠的基因表达谱分析。即用型预混液中独特的两阶段热启动和 PCR 缓冲液系统组合可在室温下进行配制，确保在任何实时定量 PCR 仪上都能进行高灵敏度的 qRT-PCR。可选的 QuantiNova Internal Control RNA 可用于测试逆转录和扩增是否成功。旨在报告仪器或试剂缺陷、检测设置错误以及存在抑制剂的情况。此外，可视化移液对照还可用于监测移液的正确性。QuantiNova Probe RT-PCR 程序中集成的 gDNA 去除步骤可防止基因组 DNA 残留污染造成的转录物过度定量。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 能通过多重实时 RT-PCR，在一管反应中快速可靠地定量多达 5 个 RNA 靶标。我们的 Q-bond 技术和经过优化的预混液可在 1 小时内实现超快的多重实时 RT-PCR。独特的两阶段热启动程序与我们的多重 PCR 缓冲液系统相结合，可确保在任何实时定量 PCR 仪上无需优化即可进行高灵敏度的 qRT-PCR，并可在室温下自动进行反应体系配制。该试剂盒还提供了提取 RNA 和从培养细胞（甚至是单细胞）直接扩增的方案。可选的 QuantiNova Internal Control RNA 可用于监测逆转录和扩增是否成功，可视化移液对照可用于监测移液是否正确。

内置可视化对照，可实现准确的反应配制

QuantiNova RT-PCR Kit 随附的预混液中包含惰性蓝色染料，该染料不会干扰 Real-time PCR，但可提高管或孔的可见性。QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 中包含惰性黄色染料。在 QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 中稀释模板核酸并加入到预混液中时，溶液的颜色会从蓝色变为绿色（请参阅图“ 内置移液对照可显示准确的反应配制”），从而直观地显示每个反应的配制是否正确。

QuantiNova SYBR Green 和 QuantiNova Probe RT-PCR Kit

QuantiNova SYBR Green 和 QuantiNova Probe RT-PCR Kit 采用两阶段热启动程序（请参阅图“ 新型 QuantiNova 两阶段热启动机制的原理”）。这包括在 50°C（SYBR Green 和多重试剂盒）或 45°C（探针试剂盒）下 HotStaRT-Script 逆转录酶和在 95°C 下 PCR 聚合酶的热介导活化。在低温下，HotStaRT-Script 与 RT-Blocker 分子形成复合物，进而导致失活。在 50°C（SYBR Green 和多重试剂盒）或 45°C（探针试剂盒）下，复合物解离，活性 HotStaRT-Script 酶释放出来。QuantiNova DNA Polymerase 在 QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard（一款具有复合物稳定化作用的新型添加剂）的作用下保持在失活状态。这提高了热启动程序的严格性并防止非特异性退火引物的延伸及引物二聚体的形成。–在温度升高到 95°C 的两分钟（SYBR Green 和多重试剂盒）或 5 分钟（探针法试剂盒）内，QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard 将发生变性，QuantiNova DNA Polymerase 将被激活，从而启动 PCR 扩增。这种独特的两阶段热启动使反应配制能够在室温下保持稳定至少 2 小时（请参阅图“ 不影响性能的方便室温反应配制”），从而防止产生假阳性并有利于自动化反应体系配制。

QuantiNova DNA Polymerase 和 RT-PCR 缓冲液的独特成分可对低拷贝 RNA 靶标进行灵敏定量，并可在任何常见定量 PCR仪上的宽线性范围内进行精确定量（请参阅图“ 投入量很高或很低也能准确定量”）。

QuantiNova Probe RT-PCR 实验方案中的 gDNA 去除步骤可尽量减少基因组 DNA 残留污染造成的误定量。基因组 DNA 还原对获得准确的基因表达结果至关重要，而且无需设计 RNA 特异性引物或探针。由于在纯化 RNA 样本时或纯化后无需进行单独的 DNase 消化，因此通过集成式 gDNA 去除（请参阅图“ 使用 gDNA 去除提高了基因表达结果的可靠性”），可以节省时间和降低成本。

新开发的内质控是一种确定的转录物（RNA 分子），只需将其添加到样品中并转录成 cDNA 即可。它旨在报告仪器或试剂缺陷、检测设置错误或存在抑制剂的情况。由于内质控的表现与真实转录物相似（请参阅图“ 可靠的 RT-PCR 抑制监测”），因此可用于确认逆转录和扩增是否成功。双重扩增能力还能纳入内部对照或参考基因，供与靶标基因进行直接比较。

QuantiNova DNA Polymerase 和 RT-PCR 缓冲液的独特成分可对低拷贝 RNA 靶标进行灵敏定量，并可在任何常见定量 PCR 仪上的宽线性范围内进行精确定量。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 附带的专用预混液可轻松设置多重反应，并确保结果可与单重 RT-PCR 相媲美。高浓度 4 x 预混液最多可容纳 800 ng 模板投入，即使多达 5 重的反应也具有出色的灵敏度。

该试剂盒能清楚地区分模板量的微小差异，并能对丰度差异很大的靶标进行精确定量（请参阅图“ 对不同丰度的靶标进行高灵敏度的多重检测”）。此外，还提供了从培养细胞中直接扩增的简单方案，即使从单个细胞中也能进行 RNA 分析（请参阅图“ 单细胞中的多重基因表达分析”）。独特的两阶段热启动程序（请参阅图“ 新型 QuantiNova 两阶段热启动机制的原理”）确保了出色的特异性，并可在室温下进行反应配制，非常适合自动化程序。专门开发的 PCR 缓冲液含有添加剂 Q-Bond，可显著缩短退火和延伸时间，从而在大约一小时内完成多重 qRT-PCR。新增的可视化移液对照可尽量减少人为失误，从而提高过程安全性（请参阅图“ 内置移液对照可显示准确的反应配制”）。可选的 Internal Control RNA 可与靶标共同检测，可消除抑制剂或其他因素造成的变异，从而监测准确性和可重现性。总之，我们的超快、过程中受控的多重 qRT-PCR 工作流程能从有限的样本材料中获得更多见解，从而提高效率。

QuantiNova RT-PCR Kit 含有经过优化的即用型预混液，可使用荧光染料 SYBR Green I 或序列特异性探针对 RNA 靶标进行高特异性和灵敏度的实时定量。QuantiNova Probe RT‑PCR Kit 设计用于不同类型的序列特异性探针，包括水解探针（例如 TaqMan 和其他双标记探针）和 Scorpions 引物。这些试剂盒自带独特的 PCR 缓冲液，其中包含 K⁺ 和 NH₄⁺ 离子的平衡组合，可促进特异性引物退火，从而实现高特异性和灵敏度。此外，HotStaRT-Script 可从多种 RNA 模板量合成 cDNA，而 QuantiNova DNA Polymerase 可提供严格的热启动，防止形成非特异性产物。独特的两阶段热启动程序可使反应设置在室温下保持稳定长达两小时，并支持自动化反应体系配制。

内置的可视化对照可让您检查模板是否已加入反应，从而防止反应配制过程中的移液错误。

检测 cDNA 合成过程中的变化可以检查结果的可重现性。新开发的内质控是一种确定的转录物（RNA 分子），可选择将其添加到样品中并转录成 cDNA。旨在报告仪器或试剂缺陷、检测设置错误以及存在抑制剂的情况。

要在实时 RT-PCR 基因表达检测中获得准确的结果，必须只扩增和检测 cDNA。QuantiNova Probe RT-PCR 程序中的 gDNA 去除步骤可防止基因组 DNA 的干扰（请参阅图“ 使用 gDNA 去除提高了基因表达结果的可靠性”）。由于无需在纯化 RNA 样本时或纯化后进行单独的 DNase 消化，因此节省了时间，降低了成本。此外，无需设计 RNA 特异性引物或探针。
QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 在标准和快速定量 PCR 仪上无需优化便可在宽动态范围内快速提供高灵敏度的结果。专门开发的 PCR 缓冲液含有添加剂 Q-Bond，可显著缩短退火和延伸时间。在同一反应中扩增参考和靶标基因，可通过尽量减少孔间差异和操作错误来提高可靠性。此外，还提供了 Internal Control RNA，可同时对其进行检测，以监测逆转录和 qPCR 是否成功。

QuantiNova SYBR Green 和 Probe RT-PCR Kit 无需进行可能既繁琐又耗时的反应条件优化。只需在即用型 RT-PCR 或预混液中加入引物、RNA 模板和 RT 混合物，便可启动反应。按照《QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit 手册》或《QuantiNova Probe RT-PCR 手册》中的方案进行操作，即可在任何实时定量 PCR 仪上快速获得可靠的结果。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 包含一份即用型 4x 预混液，无需优化反应及循环条件。只需将 RT 混合物、最多 800 ng 模板 RNA 和引物-探针组合加入预混液中，然后按照手册中的方案操作，即可在任何实时定量 PCR 仪上快速获得快速可靠的结果。此外，ROX 参比染料以独立包装的小管提供，因此可以根据特定仪器调整浓度。该试剂盒还提供了一个简单快速的方案，用于直接从培养细胞进行扩增。建议的投入量从 2000 个细胞到单个细胞不等，例如通过梯度稀释或使用 QIAscout 仪器分离。QuantiNova Internal Control RNA (QN IC RNA) 是可选择用于测试逆转录/扩增是否成功的内部扩增对照品。使用 QuantiNova IC Probe Assay 时，它在 Rotor‑Gene Q 黄色通道或其他 Real-time PCR 仪器的 VIC/HEX 染料通道中检测为 200 bp 的内质控。或者，使用 QuantiNova IC Probe Assay Red 650 时，可在 Rotor‑Gene Q 红色通道或其他 Real-time PCR 仪器的 Cy5 染料通道中检测到它。

为了精简工作流程，我们建议将 QuantiNova 试剂盒与我们预先设计的 QuantiNova Real-time PCR assay 或 panel 结合使用。这些试剂盒可精确定量 mRNA 或较长非编码 RNA 转录物，无论其丰度如何。您可以从多种预先设计的人、小鼠和大鼠引物集中进行选择，也可以使用我们的高级设计工具定制您自己的 assay 和 panel。

我们的 QuantiNova LNA PCR 和 QuantiNova LNA Probe PCR Assay 利用 LNA 技术提高了灵敏度，从而实现无偏基因表达谱和更快地获得科学见解。

对于基于 SYBR Green 的检测，请通过我们的 GeneGlobe 平台订购 QuantiNova IC SYBR Green Assay（以 HS_QIC_2467742 QuantiNova LNA PCR Reference Assay 产品名进行销售，GeneGlobe ID：SBH1218551）。

提示：QuantiNova IC SYBR Green Assay 原名为 QuantiTect Primer Assay，用于基于 SYBR 的 IC RNA 检测（货号 QT02589307）。

QuantiNova SYBR Green 和 Probe RT-PCR Kit 可用于在任何实时定量 PCR 仪上对 RNA 靶标进行基因表达分析。这包括 Rotor-Gene Q 以及来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche 和 Agilent 的仪器。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit 可用于在任何实时定量 PCR 仪上对 RNA 靶标进行多重基因表达分析。为充分受益于多重分析，我们建议使用可提供高达 5 重能力的仪器，如 Rotor-Gene Q。