数字 PCR 用 QuantiNova LNA PCR Custom Assays

• 高性能检测，使用便利的设计工具和与预设计检测相同的算法创建
• 定制检测，以便匹配您的确切靶标和需求，包括新转录物或特定异构体或剪接变体检测
• 可提交最多 10 个序列并设计相关检测以区分或检测所有序列
• 短片段、LNA 增强的引物，具有很高的特异性和更高的检测定位灵活性
• 基于QIAcuity 仪器和 QIAcuity EG PCR Kit 对基因表达进行dPCR绝对定量

基于 LNA 增强和 EvaGreen 染料法的数字 PCR技术，QuantiNova LNA PCR Custom Assays 可针对任何 RNA 靶标提供准确和灵敏的基因表达分析。我们稳健的设计算法可就人类、小鼠和大鼠靶标提供全面的 Ensembl 数据库支持，并可精简检测创建流程。定制检测非常适用于无预设计检测可用的靶标，适用于区分剪接变体以及确认新 mRNA 或 lncRNA。对于数字 PCR，我们使用 QIAcuity EG PCR Kit 和 QIAcuity 仪器对这些检测进行了优化，创建了一个简单快速的仅需 2 小时的绝对定量工作流。

您打算使用 QuantiNova LNA PCR Custom Assays 进行 qPCR 分析吗？请在专门的 qPCR 目录网页上了解 qPCR 专用产品及性能详细信息。

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基于QIAcuity EG PCR Kit 和 QIAcuity 仪器完成优化的数字 PCR 分析

QuantiNova LNA PCR Assays 专为高特异性靶标扩增而设计。定量可通过两种 PCR 方法进行：使用常规qPCR 和使用 QIAcuity 仪器及 QIAcuity EG PCR Kit 的数字 PCR（请参见图示“将 QuantiNova LNA PCR Assays 用于数字 PCR”）。使用 QuantiTect Reverse Transcription Kit 完成 cDNA 后，数字 PCR 可提供高度精确的靶标定量，可在最低浓度水平检测到甚至是最微小的表达差异。主要检测中的一部分检测在 QIAcuity 仪器上经过实验验证。

高灵敏度和特异性 LNA 增强检测

QuantiNova LNA PCR Custom Assays 在创建中采用了严格的设计标准和经实验室验证的算法，可实现最高的特异性及效率，可让您获得可靠和准确的基因表达分析结果。

LNA 碱基的高结合亲和力可增强引物在转录物上的定位灵活性，从而使我们能够对难以分析的靶标通过智慧地定位设计检测。这可带来更好的靶标区分力和稳健且可靠的定量，甚至对于富含 AU 的靶标、低丰度转录物、二级结构含量高的靶标以及高度复杂的样本也是如此。

这些检测具有高灵敏度，可确保低至 1 个 RNA 分子的优异扩增效率，使您能够更轻松地检测低丰度靶标，比如从较少的起始材料中获得的 lncRNA。因巧妙的 LNA 定位而获得的更高特异性可带来较高的信噪比，从而可区分仅有单个核苷酸不同的序列并消除非特异性扩增和引物二聚体形成。

采用精密的 LNA 设计算法创建

二十年的 LNA 设计经验使我们能够开发和优化最精密的 LNA 设计算法，其中整合了 50 多个不同的参数——所有参数都根据最严苛的性能标准经过全面的实验验证——以确保成功的为靶标检测设计出最优检测。该专有算法已被用于设计 130 万以上的检测，现可供在 GeneGlobe 中通过我们便利的定制检测创建器用于您的专门请求。

基于 EvaGreen 染料法的数字 PCR

通过 dPCR 进行绝对定量，推荐QuantiNova LNA PCR Assays 与 QIAcuity EG PCR Kit（采用基于 EvaGreen 的荧光检测）搭配使用。EvaGreen 是一种嵌合染料，可结合到双链 DNA（与 SYBR^® Green 相似）上并在与 DNA 结合后发出荧光。使用基于 EvaGreen 染料法的 dPCR 既方便又可节省花费，因为您仅需要引物组来扩增和检测产物。它还可在 dPCR 反应中提供更高的分辨率，dPCR 反应在 dPCR 纳米板中被微分化成数千个反应分区，因此，dPCR 反应中所需的引物浓度仅为 qPCR 中所需浓度的一半。

定制设计流程

QuantiNova LNA PCR Custom Assay 设计工具可让您针对任何不可作为预设计检测提供的 mRNA 或 lncRNA 轻松设计高度灵敏和特异的、经 LNA 增强的 PCR 检测。使用先进的 QuantiNova PCR 检测设计算法，您可在几分钟内基于 50 多个不同的标准对众多检测组合进行评估以找到对您的靶标而言最佳的检测。该工具专为有至少 55 个核苷酸的人类、小鼠和大鼠 mRNA 和 lncRNA 靶标而设计，可使用物种相关数据库（包括 Ensembl 和 RefSeq）进行序列比对搜索。对于已知基因靶标，与预设计检测相似，定制检测在默认设置下被设计为内含子跨越，以防范 gDNA 扩增风险。

独特的高级检测设计选项

该定制检测设计工具中包含创建转录物特异性设计以区分剪接变体、SNP 或异构体的选项。或者，您还可以创建对所有转录物变体通用的检测。您一次最多可提交 10 个不同的靶标序列并设计 10 个不同的检测，或对于相关转录物，您可设计一个对所有序列通用的检测。

参比基因检测可轻松地与定制检测组合起来

我们提供范围广大的经过功能验证的人类、小鼠和大鼠参比基因检测试剂盒，以供用于确保高品质的数据归一化并确保获得可靠的结果。这些分析的目标是内源性编码RNA、长链非编码RNA和小核仁RNA分子，它们通常在各种组织中组成性表达。

mRNA/lncRNA qPCR 结果的归一化

归一化可去除与所研究的生物学改变无关的技术性和生物性样本间差异。恰当的归一化对于正确的分析和结果解读至关重要。最为常见的做法是使用表达稳定的参比基因进行归一化。

一般而言，建议在设置您的实际 mRNA/lncRNA 表达分析之前测试数个候选的内源性对照参比基因。这些候选基因应该从被研究的全部样本中被期望稳定表达的基因中选择。它们可以是根据文献或现有数据（例如，NGS 或 qPCR panel筛查）选出的表达稳定的 mRNA 或 lncRNA。QuantiNova LNA PCR 系统为倾向于稳定表达的rna提供了有效的内参基因分析，因此是作为内参基因的很好的候选基因。

每项研究的所有候选参考基因都应经过经验验证。对大量 mRNA/lncRNA 进行图谱分析时的一项 PCR 检测板归一化方案是针对全体均值（所有有表达的 mRNA/lncRNA 的平均值）进行归一化。在高调率(表达基因)的样本中，这可能是一个很好的选择，但在低调率的样本中应谨慎使用。在一般基因表达水平发生变化的样本中，这也不是一个好的选择。有关归一化的更进一步指导可在 GeneGlobe Data Analysis Center 中找到。

数字 PCR 数据分析

QIAcuity Software Suite 是用于分析 dPCR 数据的软件，其中含有一项基因表达测试，可向您提供倍数改变和倍数调控结果及可供发表的图表。

两步 RT-dPCR

在进行逆转录反应时使用 QuantiTect Reverse Transcription Kit（目录编号：205311、205313、205314）可使您获得最佳结果。不建议使用 QuantiNova Reverse Transcription Kit。随后通过 dPCR 使用 QIAcuity EG PCR Kit 的预混液结合您选择的 QuantiNova LNA PCR Assay 对获得的 cDNA 进行定量。

重要提示：在检测产品名称后括号内的反应次数与qPCR的使用有关。数字 PCR 仅需要一半的引物浓度，但反应体积不同。使用 QIAcuity Nanoplate 26K，您可构建所示数目的反应次数；使用 Nanoplate 8.5K，您可构建 3.3 倍于所示数目的反应次数。请参阅 QIAcuity 使用手册了解 dPCR 说明。

装运与交付

QuantiNova LNA PCR Assays 在常温下装运。现货检测可在 1-5 天内交付。在早期获取期间，预计交货时间会较长。

开始使用 QuantiNova LNA PCR 系统进行数字 PCR 时需要些什么

逆转录：QuantiTect Reverse Transcription Kit（目录编号：205311、205313、205314）

dPCR 预混液：QIAcuity EG PCR Kit

检测：

QuantiNova LNA PCR Custom Assays 非常适合的应用包括：

• mRNA 和 lncRNA 表达分析、图谱分析及定量
• 验证 RNA-seq 基因表达分析数据
• 基因表达图谱分析
• 信号和通路分析
• 通过 LNA GapmeRs 或 siRNA 确认基因表达敲低
• 生物标记物开发，包括筛查、识别和验证疾病生物标记物
• 监测与基因表达相关的表型变化

还可使用多个 QuantiNova LNA PCR Assays 检查某个重点基因组合。