RNA 的一切:扩增、测序、连接和标记
通过扩增检测和操纵 RNA
逆转录酶是能够聚合与原始 RNA 模板互补的 DNA 链 (cDNA) 的酶。RNA 易被 RNase 降解,使用逆转录酶生产 cDNA 能够克服使用 mRNA 时面临的问题。cDNA 成为 RNA 研究(例如基因表达分析)的各种下游应用中的稳定模板。可以使用常规 PCR、qPCR、一步式 RT-qPCR 或等温方法进行 cDNA 模板的扩增。扩增后,可以使用常规酶方案进行克隆,或利用 T4 DNA 聚合酶的 3’→5’ 核酸外切酶活性进行不依赖于连接反应的克隆。
所有逆转录酶(RNA 依赖性 DNA 聚合酶)均可用于:
逆转录酶
根据您的 RNA 模板或应用的要求,选择逆转录酶或试剂盒。
RNA 聚合酶和连接酶
RNA 聚合酶,或更具体地说是 DNA 导向的 RNA 聚合酶,是利用 DNA 模板合成 RNA 的酶。Poly(A) 聚合酶使用单链 RNA 作为引物,通过催化腺嘌呤残基掺入 RNA 的 3’ 末端,将 poly(A) 尾部添加到 RNA 中。
T4 RNA 连接酶在 RNA 分析中特别有用,尤其是高通量 RNA 测序和微阵列分析等上游程序。T4 RNA 连接酶 1 和 2 能够通过连接相邻的 3'-OH 和 5'-PO4 多核苷酸来标记、环化 RNA 或执行 RNA 分子间连接。使用 T4 RNA 连接酶 1 将接头连接至 RNA 3’ 端是通过 RT-PCR 和高通量测序进行 RNA 定量和发现的第一步。
利用这些聚合酶和连接酶可以很容易地操纵 RNA。
RNA 消化和保护
核糖核酸酶保护实验 (RPA) 是一种使用 RNase A 测定相对或绝对转录物丰度以及绘制 mRNA 末端和内含子/外显子边界的技术。
单碱基置换可以通过一种涉及对 RNA:DNA 异源双链中的单碱基错配进行 RNase A 剪切的简单酶方法进行检测和定位。
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RNA 分析常见问答
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