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RAS Extension Pyro Kit (24)
Cat. No. / ID: 970590
For 24 reactions: Sequencing Primers, PCR Primers, Unmethylated Control DNA, PyroMark PCR MasterMix, CoralLoad Concentrate, and Buffers and Reagents
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RAS Extension Pyro Kit 旨在用于分子生物学应用。本产品既不旨在用于诊断、预防或治疗疾病，也不允许在未经验证的情况下单独或与其他产品联合用于此用途。
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特点
- 覆盖了KRAS第59、61、117以及146号密码子的突变检测
- 覆盖了NRAS第12、13、59、61、117以及146号密码子的突变检测
- 附带数据分析软件可用于复杂序列信息的结果解读
- 较短周期内便可获得可靠的结果报告
产品详情
RAS Extension Pyro Kit是一款用于人类KRAS基因3号、4号外显子以及NRAS基因2号、3号、4号外显子中突变鉴定的分子检测试剂盒。该试剂盒中含有用于KRAS、NRAS致癌基因扩增所需的引物和试剂，以及在PyroMark Q24平台上利用焦磷酸技术进行实时定量突变分析所需的引物及试剂。
绩效
RAS Extension Pyro Kit相应的突变检测LOD最低检测范围在1.8%至8.8%之间。
原理
RAS Extension Pyro Kit是一款利用PyroMark Q24平台焦磷酸测序技术对人类KRAS基因3号、4号外显子以及NRAS基因2号、3号、4号外显子突变位点进行定量分析的试剂盒。RAS系列基因所编码的一系列蛋白在EGFR信号转导通路中扮演了重要的作用，而这一系列基因中的发生的相关突变则会影响到相关编码蛋白对于下游通路的刺激。
可检测以下突变：
| 密码子 | 核酸置换 | 氨基酸置换 |
|---|---|---|
| KRAS codon 59 (GCA) | 175G>A | A59T |
| 176C>G | A59G | |
| KRAS codon 61 (CAA) | 183A>C | Q61H |
| 182A>T | Q61L | |
| 182A>G | Q61R | |
| 183A>T | Q61H | |
| 181C>G | Q61E | |
| KRAS codon 117 (AAA) | 351A>C | K117N |
| 351A>T | K117N | |
| KRAS codon 146 (GCA) | 436G>A | A146T |
| 436G>C | A146P | |
| 437C>T | A146V | |
| NRAS codon 12 (GGT) | 34G>A | G12S |
| 34G>T | G12C | |
| 34G>C | G12R | |
| 35G>A | G12D | |
| 35G>T | G12V | |
| 35G>C | G12A | |
| NRAS codon 13 (GGT) | 37G>A | G13S |
| 37G>T | G13C | |
| 37G>C | G13R | |
| 38G>A | G13D | |
| 38G>T | G13V | |
| 38G>C | G13A | |
| NRAS codon 59 (GGT) | 175G>A | A59T |
| 176C>G | A59G | |
| NRAS codon 61 (CAA) | 181C>A | Q61K |
| 182A>G | Q61R | |
| 182A>T | Q61L | |
| 183A>T | Q61H | |
| 183A>C | Q61H | |
| 183A>G | Q61Q | |
| NRAS codon 117 (AAG) | 351G>C | K117N |
| 351G>T | K117N | |
| NRAS codon 146 (GCC) | 436G>A | A146T |
| 436G>C | A146P | |
| 437C>T | A146V |
程序
关于焦磷酸测序技术的详细信息，请访问“焦磷酸技术资源中心”。
RAS Extension Pyro Kit由覆盖了不同目标区域的8种检测引物而组成（参见图1.RAS Extension Pyro Kit中的检测引物以及图2. 对某野生型样本使用KRAS 146检测引物并分析得到的焦磷酸测序峰图）。相关的区域在实验过程中会被单独的利用PCR进行扩增及测序，相关突变位点周围区域的测序结果可作为定量分析的对照及质控数据。
在利用针对不同区域的扩增引物进行扩增后，扩增产品将会被固定在相应的“链霉亲和琼脂糖微珠”(Streptavidin Sepharose High Performance beads)上而成为单链DNA,再利用PyroMark Q24平台结合相应的程序文件、测序引物对于上述的单链DNA进行测序分析，并使用相应的RAS Extension Plug-in Report分析报告软件对于结果进行分析。该分析报告软件可确保对于所有的突变位点都会自动使用相应正确的“最低检测限”（LOD）以及测序方法。（参见图3. RAS Extension Plug-in Report分析报告软件菜单及图4. RAS Extension Plug-in Report分析报告软件）。然而，相应的检测结果也可以使用PyroMark Q24平台自带的数据分析工具进行分析，得到的相应结果在反应结束后可针对一些罕见突变进行相应的调整。
应用
RAS Extension Pyro Kit能够进行突变定量分析，适用于癌症和表观遗传学等研究领域。该试剂盒可检测提取于FFPE样本的DNA的人类KRAS基因第59、61、117以及146号密码子突变以及NRAS基因第12、13、59、61、117以及146号密码子。
资源
试剂盒操作手册 (2)
安全数据表 (1)
软件使用指南 (1)
分析软件 (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)