QuantiNova RT-PCR Kits

• 실온 셋업을 위한 독자적인 2단계 hot-start 절차
• 시각적 피펫팅 대조물질로 피펫팅 오류 감소
• 성공적인 RT-PCR의 프로세스 내 양성 검증을 위한 내부 대조물질
• 템플릿의 여러 로그에 대한 정확한 정량화
• 1개 튜브에서 최대 5개 표적의 고감도 검출

QuantiNova RT-PCR Kits(real-time RT-PCR 키트)는 SYBR Green I 또는 서열 특이적 프로브를 사용하여 real-time 원스텝 PCR로 RNA 표적을 민감하게 정량화할 수 있습니다. 다양한 통합 안전 기능의 조합으로 변수를 제거하고 아티팩트를 방지하여 신뢰할 수 있는 유전자 발현 프로파일링을 보장합니다. 즉시 사용 가능한 마스터 믹스에 독자적인 2단계 hot-start 및 PCR 완충액 시스템을 결합하여 실온 셋업이 가능하며 모든 real-time 사이클러에서 고감도 qRT-PCR을 보장합니다. 선택적 QuantiNova 내부 대조물질 RNA를 사용하여 성공적인 역전사 및 증폭을 테스트할 수 있습니다. 이는 기기 또는 화학 반응 오류, 분석 셋업 오류, 억제제의 존재를 보고하기 위한 것입니다. 또한 시각적 피펫팅 대조물질을 사용하여 피펫팅이 올바르게 이루어졌는지 모니터링할 수 있습니다. QuantiNova Probe RT-PCR 절차에 통합된 gDNA 감소 단계는 유전체 DNA 캐리오버로 인한 전사체의 과다 정량화를 방지합니다.

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit를 사용하면 멀티플렉스 real-time 원스텝 RT-PCR을 통해 단일 튜브에서 최대 5개의 RNA 표적을 빠르고 안정적으로 정량화할 수 있습니다. 당사의 Q-bond 기술과 최적화된 마스터 믹스가 1시간 이내에 초고속 멀티플렉스 real-time RT-PCR을 지원합니다. 독자적인 2단계 hot-start 절차와 멀티플렉스 PCR 완충액 시스템을 결합하여 최적화 필요 없이 모든 real-time 사이클러에서 고감도 qRT-PCR을 보장하고 실온에서 자동화된 반응 셋업을 가능하게 합니다. 이 키트는 또한 배양된 세포, 심지어 하나의 세포에서 추출된 RNA를 위한 프로토콜과 이들에서 직접 증폭하는 프로토콜을 제공합니다. 선택적 QuantiNova 내부 대조물질 RNA를 사용하여 성공적인 역전사 및 증폭을 모니터링할 수 있으며 시각적 피펫팅 대조물질을 사용하여 피펫팅이 올바르게 수행되는지 모니터링할 수 있습니다.

정확한 반응 셋업을 위한 시각적 지표 내장

QuantiNova RT-PCR Kits와 함께 제공되는 마스터 믹스에는 real-time PCR을 저해하지 않으면서 튜브나 웰의 가시성을 높여주는 불활성 파란색 염료가 함유되어 있습니다. QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액에는 불활성 노란색 염료가 함유되어 있습니다. 템플릿 핵산을 QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액에 희석하여 마스터 믹스에 추가하면 용액의 색이 파란색에서 초록색으로 바뀌어(그림 “ 정확한 반응 셋업을 나타내는 내장된 피펫팅 대조물질” 참고) 각 반응이 올바르게 셋업되었음을 시각적으로 확인할 수 있습니다.

QuantiNova SYBR Green 및 QuantiNova Probe RT-PCR Kit

QuantiNova SYBR Green 및 QuantiNova Probe RT-PCR Kits는 2단계 hot-start 절차를 사용합니다(그림 “ 새로운 QuantiNova 2단계 hot-start 메커니즘의 원리” 참고). 이 절차에는 50°C(SYBR Green 및 멀티플렉스 키트) 또는 45°C(프로브 키트)에서의 HotStaRT-Script 역전사 효소 열 매개 활성화와 95°C에서의 PCR 중합효소의 열 매개 활성화가 모두 포함됩니다. 저온에서 HotStaRT-Script는 RT-Blocker 분자와 복합체를 형성하여 비활성화됩니다. 50°C(SYBR Green 및 멀티플렉스 키트) 또는 45°C(프로브 키트)에서 복합체가 해리되고 활성 HotStaRT-Script 효소가 방출됩니다. QuantiNova DNA 중합효소는 QuantiNova 항체 및 복합체를 안정화하는 새로운 첨가제인 QuantiNova Guard에 의해 비활성 상태로 유지됩니다. 이는 hot-start 절차의 엄격도를 향상시키고 비특이적으로 어닐링된 프라이머 및 프라이머–이합체의 연장을 방지합니다. 95°C까지 온도를 올린 후 2분(SYBR Green 및 멀티플렉스 키트) 또는 5분(프로브 키트) 이내에 QuantiNova 항체와 QuantiNova Guard가 변성되고 QuantiNova DNA 중합효소가 활성화되어 PCR 증폭이 가능합니다. 이 독자적인 2단계 hot-start는 반응 셋업을 실온에서 최소 2시간 동안 안정적으로 유지하여(그림 “ 성능 저하 없는 편리한 실온 반응 셋업” 참고) 아티팩트 생성을 방지하며, 또한 자동화된 반응 셋업을 용이하게 합니다.

QuantiNova DNA 중합효소와 RT-PCR 완충액의 독자적인 조성은 모든 일반 사이클러에서의 넓은 선형 범위의 정확한 정량화뿐만 아니라 저카피 RNA 표적의 민감한 정량화를 제공합니다(그림 “ 매우 많거나 매우 적은 투입량에서도 정확한 정량화” 참고).

QuantiNova Probe RT-PCR 절차의 gDNA 감소 단계는 유전체 DNA 캐리오버로 인한 잘못된 정량화를 최소화합니다. 정확한 유전자 발현 결과를 얻으려면 유전체 DNA를 줄이는 것이 중요하며, 이를 통해 RNA 특이적 프라이머나 프로브를 설계할 필요가 없어집니다. 통합된 gDNA 감소(그림 “ gDNA 감소를 사용한 유전자 발현 결과의 신뢰성 향상” 참고)를 사용하면 RNA 샘플 정제 중 또는 정제 후에 별도의 DNase 분해가 필요하지 않으므로 시간이 절약되고 비용이 절감됩니다.

새로 개발된 내부 대조물질은 샘플에 간단히 추가하여 cDNA로 전사할 수 있는 정의된 전사체(RNA 분자)입니다. 이는 기기 또는 화학 반응 오류, 분석 셋업 오류 또는 억제제의 존재를 보고하기 위한 것입니다. 내부 대조물질은 실제 전사체와 유사하게 작동하므로(그림 “ RT-PCR 억제의 안정적인 모니터링” 참고), 성공적인 역전사 및 증폭을 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 또한 듀플렉스 기능을 통해 내부 대조물질 또는 표적 유전자와 직접 비교하기 위한 참조 유전자를 포함시킬 수 있습니다.

QuantiNova DNA 중합효소와 RT-PCR 완충액의 독자적인 조성은 모든 일반 사이클러에서의 넓은 선형 범위의 정확한 정량화뿐만 아니라 저카피 RNA 표적의 민감한 정량화를 제공합니다.

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kits

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit와 함께 제공되는 특수 마스터 믹스를 사용하면 멀티플렉스 반응을 쉽게 셋업할 수 있으며 싱글플렉스 RT-PCR과 유사한 결과를 보장합니다. 고농축 4x 마스터 믹스는 최대 800ng의 템플릿 투입량을 수용할 수 있어 최대 5플렉스 반응에서도 뛰어난 민감도를 제공합니다.

이 키트는 템플릿 양의 작은 차이를 명확하게 구분할 수 있으며 다양한 농도의 표적을 정확하게 정량화할 수 있습니다(그림 “ 다양한 양의 표적에 대한 고감도 멀티플렉스 검출” 참고). 또한 배양된 세포로부터 직접 증폭하는 간단한 프로토콜이 제공되므로 단 하나의 세포에서도 RNA 분석이 가능합니다(그림 “ 하나의 세포에서 멀티플렉스 유전자 발현 분석” 참고). 독자적인 2단계 hot-start 절차(그림 “ 새로운 QuantiNova 2단계 hot-start 메커니즘의 원리” 참고)는 뛰어난 특이성을 보장하고 상온 반응 셋업이 가능하여 자동화된 절차에 편리하게 사용할 수 있습니다. 특별히 개발된 PCR 완충액에는 어닐링 및 연장 시간을 크게 줄여주는 첨가제 Q-Bond가 함유되어 있어 약 한 시간 만에 멀티플렉스 qRT-PCR을 수행할 수 있습니다. 시각적 피펫팅 대조물질을 추가하면 인적 과실을 최소화할 수 있어 프로세스 내 안전성이 향상됩니다(그림 “ 정확한 반응 셋업을 나타내는 내장된 피펫팅 대조물질” 참고). 표적과 함께 검출할 수 있는 내부 대조물질 RNA(선택적)이 억제제나 기타 요인으로 인한 변이를 제거하므로 정확도와 재현성을 모니터링할 수 있습니다. 전반적으로 당사의 초고속 및 프로세스 내 대조 관리되는 멀티플렉스 qRT-PCR 워크플로우는 제한된 샘플 물질로부터 더 많은 인사이트를 도출하여 효율성을 높입니다.

QuantiNova RT-PCR Kits에는 형광 염료 SYBR Green I 또는 서열 특이적 프로브를 사용하여 RNA 표적을 매우 특이적이고 민감하게 실시간 정량화하는 최적화된 마스터 믹스가 즉시 사용 가능한 상태로 포함되어 있습니다. QuantiNova Probe RT-PCR Kit는 가수분해 프로브(예: TaqMan 및 기타 이중 라벨링된 프로브) 및 Scorpions 프라이머를 포함한 다양한 유형의 서열 특이적 프로브와 함께 사용하도록 고안되었습니다. 이 키트에는 특이적 프라이머 어닐링을 촉진하는 K⁺ 및 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조성이 함유된 독자적인 PCR 완충액이 포함되어 있어 높은 특이성과 민감도를 가능하게 합니다. 또한 HotStaRT-Script를 통해 광범위한 RNA 템플릿 양으로부터 cDNA 합성이 가능하며, QuantiNova DNA 중합효소는 엄격한 hot-start를 제공하여 비특이적 생성물이 형성되는 것을 방지합니다. 독자적인 2단계 hot-start 절차로 상온에서 최대 2시간 동안 반응 셋업이 안정적으로 유지되어 자동화된 반응 셋업을 지원합니다.

내장된 시각적 대조물질을 통해 반응에 템플릿이 추가되었는지 확인할 수 있으므로 반응 셋업 중 피펫팅 오류를 방지할 수 있습니다.

cDNA 합성에서 변이를 검출하면 결과의 재현성을 확인할 수 있습니다. 새로 개발된 내부 대조물질은 샘플에 선택적으로 추가하여 cDNA로 전사할 수 있는 정의된 전사체(RNA 분자)입니다. 이는 기기 또는 화학 반응 오류, 분석 셋업 오류, 억제제의 존재를 보고하기 위한 것입니다.

Real-time RT-PCR 유전자 발현 분석에서 정확한 결과를 얻으려면 cDNA만 증폭하여 검출하는 것이 중요합니다. 유전체 DNA에 의한 간섭은 QuantiNova Probe RT-PCR 절차에서 gDNA 감소 단계를 사용하여 방지됩니다(그림 “ gDNA 감소를 사용한 유전자 발현 결과의 신뢰성 향상” 참고). RNA 샘플을 정제하는 동안 또는 정제 후에 별도의 DNase 분해가 필요하지 않으므로 시간이 절약되고 비용이 절감됩니다. 또한 RNA 특이적인 프라이머나 프로브를 설계할 필요가 없습니다.
QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit는 최적화 없이 표준 및 고속 사이클러 모두에서 사용했을 때 넓은 동적 범위에서 매우 민감하고 신속한 결과를 제공합니다. 특별히 개발된 PCR 완충액에는 어닐링 및 연장 시간을 크게 줄여주는 첨가제 Q-Bond가 함유되어 있습니다. 동일한 반응에서 참조 유전자와 표적 유전자를 증폭하면 웰 간 변이와 처리 오류를 최소화하여 신뢰성을 높일 수 있습니다. 또한 내부 대조물질 RNA가 제공되며 이는 성공적인 역전사 및 qPCR을 모니터링하기 위해 동시에 검출할 수 있습니다.

QuantiNova SYBR Green 및 Probe PCR Kits는 지루하고 시간이 많이 소요될 수 있는 반응 조건 최적화의 필요성을 없애줍니다. 즉시 사용 가능한 RT-PCR 또는 마스터 믹스에 프라이머, RNA 템플릿, RT 혼합물을 추가하고 반응을 시작하기만 하면 됩니다. 모든 real-time 사이클러에서 빠르고 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면 QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit 안내서 또는 QuantiNova Probe RT-PCR 안내서에 있는 프로토콜을 따르십시오.

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit에는 즉시 사용 가능한 4x 마스터 믹스가 포함되어 있어 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없습니다. 마스터 믹스에 RT 혼합물, 최대 800 ng의 템플릿 RNA와 프라이머-프로브 세트를 추가하고 안내서의 프로토콜에 따라 진행하면 모든 real-time 사이클러에서 빠르고 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다. ROX 기준 염료도 별도의 튜브로 제공되므로 사용하는 기기에 맞게 농도를 조절할 수 있습니다. 또한 이 키트는 배양된 세포에서 직접 증폭할 수 있는 간단하고 빠른 프로토콜을 제공합니다. 권장 투입량은 2000개 세포에서 하나의 세포까지이며, 예를 들어 순차 희석으로 분리하거나 QIAscout 기기를 사용할 수 있습니다. QuantiNova 내부 대조물질 RNA(QN IC RNA)는 성공적인 역전사 및 증폭을 테스트하기 위해 선택적으로 사용할 수 있는 내부 증폭 대조물질입니다. 이는 QuantiNova IC Probe Assay를 사용할 때 Rotor-Gene Q의 노란색 채널 또는 다른 real-time PCR 기기의 VIC/HEX 염료 채널에서 200bp 내부 대조물질로 검출됩니다. 또는 QuantiNova IC Probe Assay Red 650을 사용하는 경우 Rotor-Gene Q의 빨간색 채널 또는 다른 real-time PCR 기기의 Cy5 염료 채널에서 검출할 수 있습니다.

간소화된 워크플로우를 위해 QuantiNova Kits와 사전 설계된 QuantiNova real-time PCR 분석 또는 패널을 함께 사용할 것을 권장합니다. 이 솔루션은 함량과 관계없이 mRNA 또는 긴 비코딩 RNA 전사를 정확하게 정량화할 수 있습니다. 사전 설계된 다양한 사람, 마우스, 래트 프라이머 세트 중에서 선택하거나 고급 설계 도구를 사용하여 자신만의 분석 및 패널을 맞춤 설계할 수 있습니다.
 
QuantiNova LNA PCR 및 QuantiNova LNA Probe PCR Assays는 LNA 기술을 활용하여 민감도를 향상시켜 편향되지 않은 유전자 발현 프로파일과 더 신속한 과학적 인사이트를 제공합니다.

SYBR Green 기반 검출의 경우, QuantiNova IC SYBR Green Assay(HS_QIC_2467742 QuantiNova LNA PCR Reference Assay라는 이름 아래에 있음, GeneGlobe ID: SBH1218551)를 GeneGlobe 플랫폼에서 주문해 주십시오.

참고: QuantiNova IC SYBR Green Assay는 이전에는 IC RNA의 SYBR 기반 검출을 위한 QuantiTect Primer Assay(카탈로그 번호 QT02589307)로 제공되었습니다.

QuantiNova SYBR Green 및 Probe RT-PCR Kits는 RNA 표적의 유전자 발현 분석을 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 여기에는 Rotor-Gene Q와 Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, Agilent의 기기가 포함됩니다.

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kit는 RNA 표적의 멀티플렉스 유전자 발현 분석을 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 멀티플렉싱의 이점을 최대한 활용하려면 Rotor-Gene Q와 같이 최대 5플렉스 성능을 지원하는 기기의 사용을 권장합니다.