QuantiNova PCR Kits

높은 민감도, 특이도, 초고속 프로브 기반 real-time PCR 및 멀티플렉스 PCR용, SYBR Green 기반 qPCR을 사용한 탁월한 결과 제공

S_3503_ADNA_qPCR
상업적인 목적을 위해 제품이 대량으로 필요하거나 맞춤형 또는 최적화 제품이 필요하십니까? QIAGEN에서는 물류, 규정 준수 등에 대한 지원도 제공합니다. QIAGEN에 문의하여 전략적 파트너십과 OEM을 통해 협력하는 방법을 알아보세요

QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500)

Cat. No. / ID:   208054

500 x 20µL 반응용: 3 x 1.7mL 2x QuantiNova SYBR Green PCR 마스터 믹스, 500µL QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액, 1mL QN ROX 기준 염료, 1.9mL 정제수
₩538,000.00
로그인 계정 가격 보기.
검출 유형
Probe
Multiplex Probe
SYBR Green
반응
100
500
2500
7500
QuantiNova PCR Kits은/는 분자생물학 분야에 사용하기 위한 것입니다. 이 제품들은 질병의 진단, 예방, 또는 치료 목적으로 사용할 수 없습니다.
상업적인 목적을 위해 제품이 대량으로 필요하거나 맞춤형 또는 최적화 제품이 필요하십니까? QIAGEN에서는 물류, 규정 준수 등에 대한 지원도 제공합니다. QIAGEN에 문의하여 전략적 파트너십과 OEM을 통해 협력하는 방법을 알아보세요

특징

  • 내장된 시각적 지표로 정확한 반응 셋업
  • 하나의 표적 카피까지 정확하고 안정적으로 검출
  • 새로운 hot-start 메커니즘으로 인한 탁월한 특이성
  • 1개 튜브에서 최대 5개 표적의 고감도 검출
  • 30°C에서 최대 100시간의 반응 안정성으로 유연한 워크플로우 제공

제품 세부 정보

향상된 특이성, 민감도, 속도, 처리 안전성을 특징으로 하는 QuantiNova SYBR Green PCR Kit(SYBR qPCR 키트)는 SYBR Green 기반 qPCR의 새로운 표준을 제시합니다. 새로운 hot-start 메커니즘이 real-time PCR의 특이성을 크게 향상시키고 최적화된 화학 반응으로 모든 real-time PCR 사이클러에서 단일 표적 카피까지 검출하여 cDNA 또는 gDNA로부터 정확한 정량적 결과를 제공합니다. 마지막으로, 내장된 시각적 지표가 올바른 피펫팅을 보장합니다.

QuantiNova Probe PCR Kit(프로브 qPCR 키트)를 사용하면 저온에서 잘못된 프라이밍으로 인한 악영향을 피할 수 있습니다. 이 키트는 새로운 항체 매개 hot-start 메커니즘을 기반으로 프로브 기반 real-time PCR의 특이성과 효율성을 향상시켜 다양한 real-time PCR 사이클러에서 정확한 싱글플렉스 또는 듀플렉스, cDNA 또는 gDNA 분석을 제공합니다. 냉각제 없이도 실온에서 최대 100시간 동안 매우 안정적으로 사용할 수 있어 대량 샘플 처리와 자동화된 워크플로우에 이상적입니다. 정확한 피펫팅을 시각적으로 확인할 수 있는 추적 시스템이 내장되어 있어 안심하고 사용할 수 있으며, 적은 양의 표적도 매우 고감도로 검출하여 항상 신뢰할 수 있는 qPCR 결과를 보장합니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kits(멀티플렉스 qPCR 키트)는 멀티플렉스, real-time PCR 또는 투스텝 RT-PCR을 통해 단일 튜브에서 최대 5개의 cDNA 또는 gDNA 표적을 빠르고 안정적으로 정량화할 수 있습니다. Q-bond 기술과 최적화된 마스터 믹스가 1시간 이내에 초고속 멀티플렉스 real-time PCR을 지원합니다. 즉시 사용 가능한 4x 마스터 믹스 내의 독자적인 hot start 및 PCR 완충액 시스템의 조합으로 최적화할 필요 없이 모든 real-time 사이클러에서 매우 민감한 qPCR을 보장하며 실온에서의 자동화된 반응 셋업 옵션도 제공합니다. 올바른 피펫팅을 시각적으로 확인할 수 있는 추적 시스템이 내장되어 있어 인적 과실을 방지할 수 있으며, cDNA 합성을 위한 QuantiNova Reverse Transcription Kit와 함께 사용하면 QuantiNova 내부 대조물질 RNA를 포함시켜 성공적인 역전사 및 qPCR을 모니터링할 수 있습니다.

성능

QuantiNova SYBR Green PCR Kit를 처음으로 사용해 보고 싶으신가요? 평가판 키트의 견적을 요청해 보십시오.

QuantiNova Probe PCR Kit를 처음으로 사용해 보고 싶으신가요? 평가판 키트의 견적을 요청해 보십시오.

QuantiNova Multiplex PCR Kits를 처음으로 사용해 보고 싶으신가요? 평가판 키트의 견적을 요청해 보십시오

정확한 반응 셋업을 위한 시각적 지표 내장

QuantiNova PCR Kits와 함께 제공되는 마스터 믹스에는 real-time PCR을 저해하지 않으면서 튜브나 웰의 가시성을 높여주는 불활성 파란색 염료가 함유되어 있습니다. QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액에는 불활성 노란색 염료가 함유되어 있습니다. 템플릿 핵산을 QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액에 희석하여 마스터 믹스에 추가하면 용액의 색이 파란색에서 초록색으로 바뀌어(그림 “ 정확한 반응 셋업을 나타내는 내장된 피펫팅 대조물질” 참고) 각 반응이 올바르게 셋업되었음을 시각적으로 확인할 수 있습니다.

QuantiNova SYBR Green PCR Kit

QuantiNova SYBR Green PCR Kit는 높은 민감도로 단일 표적 카피까지도 정확하고 안정적으로 검출합니다(그림 “ 단일 카피 표적의 안정적인 고감도 검출” 참고). 이 극강의 민감도는 초고속 사이클링 조건에서도 유지됩니다.

QuantiNova SYBR Green PCR Kit는 다양한 양의 템플릿과 함께 사용할 수 있습니다. 이 SYBR real-time PCR 키트의 성능은 8자릿수에 달하는 동적 범위(100ng~10fg cDNA)에 걸쳐 테스트되었으며 사용한 기기와 관계없이 정량화가 정확하고 안정적이었습니다(그림 “ 넓은 동적 범위에 걸친 정확한 정량화” 참고).

QuantiNova 화학 반응의 엄격한 특이성과 탁월한 민감도는 QIAGEN Rotor-Gene Q에서 최적의 결과를 제공합니다. 그러나 형식, 고속 사이클링 성능, 패시브 기준 염료의 필요성과 관계없이 모든 real-time PCR 사이클러에서 사용할 수 있습니다. QuantiNova SYBR Green PCR Kit와 함께 제공되는 ROX는 필요한 경우 마스터 믹스에 추가하기만 하면 됩니다. Rotor-Gene Q, Agilent Technologies Mx3005P, Applied Biosystems 7900 HT Fast, ViiA 7, StepOnePlus 및 7500 Fast, Roche LightCycler 480, Bio-Rad CFX96을 사용한 증폭 및 정량화 결과는 항상 안정적이고 민감합니다.
QuantiNova SYBR Green PCR Kit는 다른 SYBR Green PCR 키트에 비해 우수한 결과를 제공합니다. 사이클링 조건이나 기기와 관계없이 QuantiNova 화학 반응은 낮은 CT 값, 높은 재현성, 높은 반응 효율을 보여줍니다.

QuantiNova Yellow 템플릿 희석 완충액은 반응 셋업 중에 안심하고 사용할 수 있지만, QuantiNova SYBR Green PCR Kit로 우수한 결과를 얻기 위해 반드시 필요한 것은 아닙니다. QuantiNova 화학 반응은 유연성 있게 설계되어 기존의 모든 워크플로우에 통합할 수 있습니다. 따라서 관심 있는 증폭 표적과 사용 기기, 선택한 희석 완충액에 맞춰 성능을 최적화할 수 있습니다.

QuantiNova Probe PCR Kit

이 프로브 real-time PCR 키트의 real-time PCR 혼합물은 후속 반응의 성능을 저하시키지 않고 최대 100시간 동안 30°C에서 보관할 수 있습니다. 냉각제를 사용하지 않고 실온에서 장기간 보관한 후에도 안정성이 뛰어나므로 QuantiNova Probe PCR Kit는 대용량의 실험 설정 및 플레이트 적재 처리에 이상적입니다(표 '보관이 반응 안정성에 미치는 영향' 참고.

 

보관이 반응 안정성에 미치는 영향
평균 CT
  QuantiNova Probe PCR Kit 공급업체 L의 프로브 PCR 키트
양(ng) 0시간 100시간 0시간 100시간
10 24.37 24.49 24.35 27.49
1 27.78 27.90 27.77 30.97
0.1 31.16 30.98 31.37 34.48
템플릿 대조군 없음 검출되지 않음 검출되지 않음 검출되지 않음 검출되지 않음

30°C에서 100시간 보관 전과 후의 CT 값 비교. 마스터 믹스, 템플릿 cDNA, 프라이머, TNF용 프로브를 포함한 real-time PCR을 30°C에서 100시간 동안 배양하고 새로 준비한 반응물과 함께 real-time PCR에서 실행했습니다. 3가지 다른 템플릿 양에 대해 세 번의 반복 반응을 테스트했습니다. 공급업체 L의 프로브 PCR 키트와 달리, QuantiNova Probe PCR Kit는 30°C에서 샘플을 장기간 보관한 후에도 CT 값이 변하지 않았습니다.

QuantiNova Probe PCR Kit는 높은 민감도로 단일 표적 카피까지도 정확하고 안정적으로 검출합니다(그림 “ 단일 표적 카피의 안정적인 고감도 검출” 참고). 이 키트와 함께 제공되는 특수 마스터 믹스를 사용하면 단일 튜브에서 서로 다양한 비율로 존재하는 2개의 표적을 정확하게 정량화할 수 있습니다. 이는 시간과 비용을 절약하고 필요한 샘플의 양을 줄입니다. 또한, 얻어진 듀플렉스 PCR 데이터는 싱글플렉스 PCR에서 얻은 데이터와 유사한 수준입니다.
QIAGEN의 독점적이고 입증된 완충액 기술과 새로운 QuantiNova DNA 중합효소, QuantiNova 항체, QuantiNova Guard의 독자적인 조합은 까다로운 real-time PCR 분석에서조차 많은 비용과 시간이 소요되는 최적화 작업 없이 한 번의 시도만으로 real-time PCR 성공을 보장합니다(그림 “ 까다로운 분석에서도 우수한 결과 도출” 참고).

QuantiNova Probe PCR Kit는 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. ROX는 별도의 튜브로 제공되며 ROX를 패시브 기준 염료로 사용하는 사이클러를 사용할 경우 추가할 수 있습니다. 이 키트는 민감도, 재현성, 효율성 측면에서 다양한 사이클러 간에 매우 일관된 결과를 제공합니다. 서로 다른 사이클러의 다양한 고속 사이클링 성능으로 인해 사이클링 프로토콜이 달라지더라도 결과의 일관성은 유지됩니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kits

QuantiNova Multiplex PCR Kits와 함께 제공되는 특수 마스터 믹스는 멀티플렉스 반응을 신속하게 셋업하고 한 번의 시도로 성공적인 결과를 제공하여 싱글플렉스 PCR 데이터와 유사한 수준의 멀티플렉스 PCR 데이터를 제공합니다. 고농축 4x 마스터 믹스는 최대 800ng의 템플릿 투입량을 수용할 수 있어 최대 5플렉스 반응에서도 뛰어난 민감도를 보장합니다. 이 키트는 템플릿 양의 작은 차이를 명확하게 구분할 수 있으며, 다양한 양의 표적을 정확하게 정량화할 수 있습니다.

새로운 항체 매개 hot-start 메커니즘은 뛰어난 특이성을 보장하고 상온에서 반응을 셋업할 수 있어 자동화된 절차에 이상적입니다. 특별히 개발된 고속 PCR 완충액에는 어닐링 및 연장 시간을 크게 줄여주는 첨가제 Q-Bond가 함유되어 있어 한 시간 이내에 멀티플렉스 qPCR을 수행할 수 있습니다. 시각적 피펫팅 대조물질은 인적 과실을 방지하고 처리 안전성을 높이는 데 도움이 되며, 특히 정량 투스텝 RT-PCR을 위한 QuantiNova Reverse Transcription Kit에서 제공하는 내부 대조물질 RNA와 함께 사용할 경우 더욱 효과적입니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kit는 초고속, 프로세스 내 대조 관리되는 멀티플렉스 qPCR을 사용하여 제한된 샘플 물질로부터 더 많은 인사이트를 도출함으로써 워크플로우 효율성을 높입니다.

그림 참조

원리

QuantiNova PCR Kits는 새로운 항체 매개 hot-start 메커니즘을 통해 매우 높은 특이성의 cDNA 또는 gDNA 분석을 제공합니다(그림 “ 새로운 QuantiNova hot-start 메커니즘의 원리” 참고). 저온에서 QuantiNova DNA 중합효소는 QuantiNova 항체와 복합체를 안정화하는 새로운 첨가제인 QuantiNova Guard에 의해 비활성 상태로 유지됩니다. 이는 hot-start의 엄격도를 향상시키고 비특이적으로 어닐링된 프라이머 및 프라이머 다이머의 연장을 방지합니다. 95°C까지 온도를 올린 후 2분 이내에 QuantiNova 항체와 QuantiNova Guard가 변성되고 QuantiNova DNA 중합효소가 활성화되어 증폭이 가능합니다.

또한 QuantiNova 화학 반응은 PCR 민감도와 효율성의 손실 없이 워크플로우를 간소화하는 기능을 포함하고 있습니다. 마스터 믹스과 QuantiNova Yellow 희석 완충액의 불활성 염료는 각 반응이 올바르게 셋업되었는지 시각적으로 확인할 수 있는 지표 역할을 합니다. 파란색 마스터 믹스는 반응 용기 내 내용물의 가시성을 높여주며 QuantiNova Yellow 희석 완충액에 희석된 템플릿 핵산을 추가하면 초록색으로 변합니다(그림 “ 정확한 반응 셋업을 나타내는 내장된 피펫팅 대조물질” 참고). QuantiNova SYBR PCR Kits에 포함된 PCR 완충액의 독자적인 배합은 hot-start 메커니즘의 엄격도를 향상시키고 사이클 단계를 단축하여 PCR을 더 빠르게 수행하고 처리량을 늘릴 수 있습니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kits는 최적화 없이 표준 및 고속 사이클러 모두에서 사용했을 때 넓은 동적 범위에서 매우 민감하고 신속한 결과를 제공합니다. 특별히 개발된 고속 PCR 완충액에는 어닐링 및 연장 시간을 크게 줄여주는 첨가제 Q-Bond가 함유되어 있습니다(그림 ' 고속 프라이머 어닐링' 참고).

참조 유전자와 표적 유전자를 개별 반응이 아닌 같은 반응에서 증폭하면 조작 오류를 최소화하여 유전자 정량화의 신뢰성을 높일 수 있습니다. 또한 정량적 투스텝 RT-PCR을 위한 QuantiNova Reverse Transcription Kit에서 제공되는 내부 대조군 RNA를 활용하여 성공적인 역전사 및 qPCR을 모니터링할 수 있습니다.

QuantiNova Multiplex PCR 완충액에는 균형 잡힌 조합의 K+ 및 NH4+ 이온과 고유한 합성 인자 MP가 포함되어 있어 프라이머와 프로브를 핵산 템플릿에 안정적이고 효율적으로 어닐링하여 높은 PCR 효율을 가능하게 합니다(그림 ' 안정적이고 효율적인 어닐링을 촉진하는 고유한 멀티플렉스 PCR 완충액' 참고).
QuantiNova Multiplex PCR Kit 마스터 믹스는 2~8°C에서 최대 12개월까지 편리하게 보관할 수 있으며, 실온에서도 반응 셋업이 매우 안정적이어서 자동화된 절차를 통해 효율성과 정확성을 높일 수 있습니다.

그림 참조

절차

QuantiNova PCR Kits에는 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없는 즉시 사용 가능한 마스터 믹스가 포함되어 있습니다. 간단히 마스터 믹스에 템플릿 gDNA 또는 cDNA와 프라이머(SYBR Green 기반 검출) 또는 템플릿 gDNA 또는 cDNA, 프라이머와 프로브(프로브 기반 검출)를 추가하기만 하면 안내서의 프로토콜에 따라 모든 real-time 사이클러에서 빠르고 안정적인 결과를 얻을 수 있습니다. ROX 패시브 기준 염료는 별도의 튜브로 제공되며 사용하는 사이클러의 유형에 따라 염료의 농도를 조절할 수 있습니다. 따라서 QuantiNova PCR Kits는 형식이나 사이클링 조건과 관계없이 거의 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. ROX 농도가 최적화되어 있어 자동 데이터 분석을 통해 적은 복제수까지도 검출할 수 있습니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kits에는 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없는 즉시 사용 가능한 4x 마스터 믹스가 포함되어 있습니다. 마스터 믹스에 최대 800ng의 템플릿 DNA와 프라이머-프로브 세트를 추가하고 안내서의 프로토콜에 따라 진행하면 모든 real-time 사이클러에서 빠르고 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다. 키트에는 별도의 튜브 안에 ROX 패시브 기준 염료가 포함되어 있어 기기에서 필요로 하는 경우 적절한 ROX 농도를 조정할 수 있습니다.

Real-time 투스텝 RT-PCR에서 최적의 결과를 얻으려면 유전체 DNA 오염을 통합 제거하여 단 20분 만에 빠르게 cDNA를 합성할 수 있는 QuantiNova Reverse Transcription Kit를 사용한 cDNA 합성을 권장합니다. 추가로 QuantiNova 내부 대조물질 RNA를 제공하여 성공적인 역전사 및 qPCR의 프로세스 내 모니터링이 가능합니다.

간소화된 워크플로우를 위해 QuantiNova Kits와 사전 설계된 QuantiNova real-time PCR 분석 또는 패널을 함께 사용할 것을 권장합니다. 이 솔루션은 함량과 관계없이 mRNA 또는 긴 non-coding RNA 전사를 정확하게 정량화할 수 있습니다. 사전 설계된 다양한 사람, 마우스, rat 프라이머 세트 중에서 선택하거나 고급 설계 도구를 사용하여 자신만의 분석 및 패널을 맞춤 설계할 수 있습니다. 

QuantiNova LNA PCR 및 QuantiNova LNA Probe PCR Assays는 LNA 기술을 활용하여 민감도를 향상시켜 편향되지 않은 유전자 발현 프로파일과 더 신속한 과학적 인사이트를 제공합니다.

응용 분야

QuantiNova SYBR Green PCR Kit는 cDNA 표적의 SYBR Green 기반 유전자 발현 분석 및 정량적 gDNA 분석을 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 여기에는 Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, LIFE Technologies, Roche, Agilent의 기기와 Rotor-Gene Q가 포함됩니다.

QuantiNova Probe PCR Kits는 cDNA 표적의 프로브 기반 유전자 발현 분석 및 정량적 gDNA 분석을 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 여기에는 Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, Agilent의 기기가 포함됩니다.

QuantiNova Multiplex PCR Kits는 cDNA 또는 gDNA 표적의 멀티플렉스 유전자 발현 분석을 위해 모든 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다. 멀티플렉스의 이점을 최대한 활용하려면 Rotor-Gene Q와 같이 최대 5플렉스 성능을 지원하는 기기를 권장합니다.

지원되는 데이터 및 수치

리소스

Selection Guides (1)
Scientific Posters (1)
Poster for download
Quick-Start Protocols (3)
For highly sensitive and specific real-time qPCR and two-step RT-PCR using SYBR Green
Kit Handbooks (4)
QuantiNova LNA Probe PCR Handbook
For highly sensitive, ultrafast, quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

How do I setup and validate a multiplex PCR assay with QIAGEN PCR kits?

Ensure PCR amplicons are as short as possible, ideally 60–150 bp. Always use the same algorithm or software to design the primers and probes. For optimal results, only combine assays that have been designed using the same parameters.

 

Check the functionality of each set of primers and probes in individual assays before combining the different sets in the multiplex assay. Choose compatible reporters and quenchers based on a specific instrument. See How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR.

 

FAQ ID -9093
Can I use uracil-N-glycosylase (UNG) with the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits?

No. UNG treatment does not provide any advantage for the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits because the mastermixes do not contain dUTP. Use the QuantiTect kits if you intend to use the UNG treatment.

FAQ ID -9092
Why do I see multiple high-intensity peaks in my qPCR dissociation curve at temperatures less than 70ºC?

If the extra peaks seem irregular or noisy, do not occur in all samples, and occur at temperatures less than 70 ºC, then these peaks may not represent real PCR products and instead may represent artifacts caused by instrument settings.

 

Usually extra peaks caused by secondary products are smooth and regular, occur reproducibly in most samples, and occur at temperatures greater than 70 ºC. Characterization of the product by agarose gel electrophoresis is the best way to distinguish between these cases. If only one band appears by agarose gel then the extra peaks in the dissociation curve are instrument artifacts and not real products. If this is the case, refer to the thermal cycler user manual, and confirm that all instrument settings (smooth factor, etc.) are set to their optimal values.

 

FAQ ID -90990
How do I quantify gene expression levels if the amplification efficiencies are different between the genes of interest and endogenous reference gene?

The REST 2009 (Relative Expression Software Tool) software applies mathematic models that compensate for the different PCR efficiencies of the gene of interest and reference genes. In addition, the software can use multiple reference gene normalization to improve the reliability of result, as well as provides statistical information suitable for robust comparison of expression in groups of treated and untreated. QIAGEN offers the REST 2009 software free of charge.

FAQ ID -9095
What do I do if no fluorescent signal is detected in a real-time PCR assay?

Check the template quality and integrity by amplifying an endogenous control gene. Check the amplicon by QIAxcel Advanced system or agarose gel electrophoresis to show that amplification was successful.

 

Determine whether the gene of interest is expressed in your sample. See How can I find out if my gene of interest is express in a specific tissue type or cell line.  Ensure the assay setup and cycling conditions are correct, and that the data collection channel matches the emission wavelength of the fluorescent dye used. Use a control sample in which the gene of interest is definitely expressed.

 

If the issue persists, please send the original run file to QIAGEN Technical Services.

FAQ ID -9091
How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR?

For duplex analysis, using non-fluorescent quenchers (e.g., Black Hole Quencher®) is preferred over fluorescent quenchers (e.g., TAMRA fluorescent dye). For triplex and 4-plex analysis, QIAGEN strongly recommends using non-fluorescent quenchers. Generally, use the green channel, the yellow channel, and the orange and crimson channels to detect the least abundant target, the second least abundant target, and the two most abundant targets, respectively. For instrument-specific recommendations, please see the handbooks for the QuantiTect Multiplex PCR kit, QuantiFast Multiplex kit or Rotor-Gene Multiplex kit.

 

FAQ ID -9094
Can I skip the gDNA wipeout buffer treatment step for the QuantiTect Reverse Transcription Kit?

The gDNA wipeout buffer incubation step can be skipped when the total RNA is free from genomic DNA. However, the gDNA wipeout buffer is still required to be added because the reverse transcription step is optimized in the presence of components in the gDNA wipeout buffer.

FAQ ID -9098
How should I handle and store absolute quantitation standards for real-time experiments?
Store the standards at a high concentration in aliquots at -20oC to -70oC. If using low concentrations, stabilize standards with carrier nucleic acid. It is always best to use freshly diluted standards for each experiment. If possible, use siliconized tubes for standard (and target) dilutions. This will prevent any unspecific binding of nucleic acids to the plastic.
FAQ ID -9099
How do I ensure reliable results for High Resolution Melting (HRM) assays?

Reliable HRM analysis results depend on template quality, highly specific HRM PCR kit with a saturation dye, a real-time instrument with HRM capability, and powerful software package. Factors critical for successful HRM analysis are:

 

  • Use the same genomic DNA purification procedure for all samples being analyzed by HRM. This avoids variation due to differing composition of elution buffers.
  • DNA template concentrations should be normalized using the same dilution buffer. Ensure the CT values are below 30 and differ no more than 3 CT values across individual samples.
  • Design assays with amplicon length 70–350 bp. For SNP analysis, use amplicon length 70–150 bp.
  • Always start with 0.7 µM primer concentration

 

For more details, please refer to the HRM Technology – FAQs and the Critical Success Factor for HRM performance.

FAQ ID -9097
How do I avoid collecting a fluorescence reading from primer-dimer with the QuantiTect SYBR Green PCR Kit?

Depending on primer design and copy number of target, primer-dimer may occur and its signal might be detected. Typical strategies against this are to optimize PCR conditions and/or redesign the assay.

 

Alternatively, an additional data-acquisition step can be added to the 3-step cycling protocol. First, determine the melting temperatures (Tm) for both the amplicon and the primer-dimer. Then, add a 15 second data-acquisition step with a temperature that is higher than the primer-dimer Tm, but approximately 3ºC lower than the specific amplicon Tm.

FAQ ID -9096