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miRCURY LNA RT Kit를 사용하면 단일 반응 단계에서 miRNA 아데닐중합체형성 및 역전사를 빠르고 편리하게 수행할 수 있습니다. 하나의 범용 RT 반응을 후속 PCR 증폭을 위한 템플릿으로 사용하면 miRNA 특이적인 최초 가닥 합성이 필요한 시스템에 비해 절차가 크게 간소화되어 편의성이 향상되고 시간이 절약됩니다. 이 키트는 SYBR Green 또는 LNA 강화 가수분해 프로브를 검출 방법으로 사용하여 두 개의 miRCURY LNA miRNA PCR Systems와 함께 사용하도록 설계되었습니다. 키트에는 각 PCR 검출 방법을 위해 별도의 반응 완충액 튜브 두 개가 포함되어 있습니다.
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RNA 샘플마다 범용 역전사 반응을 사용하면 시약과 귀중한 샘플뿐만 아니라 시간도 절약됩니다. miRCURY LNA RT Kit는 두 miRCURY LNA miRNA PCR System(검출용 SYBR Green(miRCURY LNA miRNA PCR System 개요 참조) 또는 LNA 강화 miRNA 특이적 가수분해 프로브(miRCURY LNA miRNA Probe PCR System 개요 참조) 사용) 모두의 최초 가닥 cDNA 합성에 사용됩니다. 키트에는 시스템별로 고유한 반응 완충액이 포함되어 있습니다. miRNA 분석 및 패널은 시스템에 따라 다릅니다.
LNA 강화 및 Tm 정규화 PCR 구성 요소와 결합된 범용 역전사를 사용하면 단 1pg의 총RNA만으로 개별 miRNA를 정확하고 안정적으로 정량화할 수 있습니다(그림 총RNA 시재료 1pg부터 정확한 정량화 가능 참조). 또한 탁월한 민감도와 매우 낮은 배경으로 사전 증폭 없이 매우 낮은 수준의 miRNA를 정확하게 정량화할 수 있습니다. 따라서 miRCURY LNA miRNA PCR System과 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System은 모든 유형의 샘플, 특히 혈청, 혈장 및 기타 생체유체와 같이 RNA 함량이 낮은 샘플에 적합합니다.
miRCURY LNA RT Kit는 miRCURY LNA miRNA PCR Systems의 첫 번째 단계로, 검출에 SYBR Green 또는 가수분해 프로브를 사용합니다. 쉽게 따라할 수 있는 2시간 프로토콜을 통해 시간과 노력을 절약할 수 있습니다. 범용 역전사 및 최적화된 RT-PCR 프로토콜을 사용하면 다른 솔루션에 비해 절차가 크게 간소화됩니다. 또한 RT 단계에서 생성된 cDNA를 선택한 시스템 전체에서 사용할 수 있어 연구 요구 사항에 따라 패널에서 분석으로 원활하게 전환하고 샘플 물질과 시간을 절약할 수 있습니다. 피펫팅 단계의 수가 최소한으로 줄어들어 기술적 변동도 최소화됩니다. 또한 이처럼 간소화된 워크플로우가 ISO 준수 분석 제조 기술과 결합되어 매우 높은 수준의 일별 및 현장 간 재현성을 달성할 수 있습니다.
miRCURY LNA RT Kit는 두 miRCURY LNA miRNA PCR Systems(SYBR Green 또는 가수분해 프로브 검출 방법) 모두에 사용됩니다. 이 키트에는 시스템별 반응 완충액 두 개와 단일 반응 단계에서 빠르고 편리한 miRNA 아데닐중합체형성 및 역전사를 수행하는 데 필요한 모든 시약이 포함되어 있습니다. 후속 PCR 증폭을 위한 템플릿으로 단일 범용 RT 반응을 사용하면 miRNA 특이적인 최초 가닥 합성이 필요한 시스템에 비해 절차가 크게 간소화됩니다(그림 범용 역전사 단계의 이점 참조). 또한 RT 단계에서 생성된 cDNA를 선택한 시스템 전체에서 사용할 수 있어 연구 요구 사항에 따라 패널에서 분석으로 원활하게 전환하고 샘플 물질과 시간을 절약할 수 있습니다. 키트에 포함된 UniSp6 RNA 스파이크인은 대조 분석 – UniSp6 miRCURY LNA miRNA PCR Assay – 과 함께 역전사 양성 대조물질 및/또는 miRNA PCR 패널의 플레이트 간 캘리브레이터로 사용할 수 있습니다.
이 시스템의 아키텍처는 타의 추종을 불허하는 성능을 위해 LNA 강화 및 miRNA 특이적 프라이머 2개가 포함된 SYBR Green 검출로 구성됩니다(miRCURY LNA miRNA PCR System 개요 참조).
매우 특이적이고 민감한 실제 신호를 제공하기 위해 고유의 LNA 강화 miRNA 특이적 가수분해 프로브를 LNA 강화 miRNA 특이적 정방향 프라이머와 결합했습니다(miRCURY LNA miRNA Probe PCR System 개요 참조).
역전사 반응은 단일 튜브 반응으로 수행하기 쉽습니다. miRNA를 포함하여 총RNA가 시재료로 사용되고, 해당 절차에는 40–42°C에서 1시간 동안 반응 물질을 배양한 후 95°C에서 짧은 배양을 통해 비활성화하는 단계가 포함됩니다.
miRCURY LNA RT Kit는 miRCURY LNA miRNA PCR 및 Probe PCR Systems의 일부로 다음 용도에 사용됩니다.