QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit

• QIAcuity Four 및 Eight에 대한 동시 나노플레이트 설정을 지원하는 HotStart RT 기능
• HotStart RT 기능으로 실온에서 반응 설정
• 싱글플렉스 및 멀티플렉스 반응용
• 4배 농축된 PCR 마스터 믹스로 더 많은 샘플 로딩 가능
• 억제제에 대해 향상된 견고성

QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR Kit를 사용하면 하나로 통합된 RT-PCR 반응으로 QIAcuity 디지털 PCR 기기에서 RNA 또는 RNA+DNA 표적을 민감하게 정량화할 수 있습니다. 여기에는 QIAcuity Nanoplate에서 미세 유체(microfluidic) 사용에 최적화된 4배 농축 마스터 믹스와 100배 농축 RT 믹스가 포함되어 있습니다. 이 키트는 프로브 기반 디지털 PCR의 특이성과 효율성을 향상시켜, 정확한 싱글플렉스 또는 최대 5-plex 분석을 제공합니다.

새로운 키트에는 HotStart 역전사(Reverse Transcription, RT) 효소가 포함되어 있어 실온에서 반응 설정 및 QIAcuity Four 또는 Eight 기기에 로딩하기 위한 나노플레이트 동시 설정이 가능합니다.

이 키트는 QIAcuity Digital PCR System 및 QIAcuity Nanoplate와 함께 사용할 수 있습니다.

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진보한 역전사 성능

새로운 QIAcuity Advanced Reverse Transcription Mix에는 특허 출원 중인 QIAGEN의 새로운 HotStart 역전사 기술이 들어가 있습니다. 새로운 HotStart RT 효소는 실온에서 반응을 일으키지 않으며 37°C에서 수 시간 배양해도 표적을 벗어난(off-target) cDNA의 생성을 방지합니다(그림  새로운 HotStart RT의 용융 곡선 분석 참고). 따라서 실온에서 반응 설정이 가능합니다. HotStart RT 효소를 사용하면 사용자가 실온에서 반응을 조작할 수 있습니다. 또한, 더욱 중요한 것은 HotStart RT 효소를 사용하면 플레이트가 대기 하는 동안 주변 온도에 의해 원치 않은 잠재적 비특이적 RT 반응에 대해 걱정할 필요 없이 여러 나노플레이트를 동시에 조작하고 로드할 수 있다는 것입니다. HotStart RT 효소는 나노플레이트가 프로토콜의 RT 단계가 시작되는 열 순환기(thermal cycler)로 이동될 때까지 QIAcuity 기기 내부에서 기다리는 동안 활성화되지 않습니다.

특정 분석 성능을 향상시키는 Enhancer GC

dPCR 분석 성능은 프라이머와 프로브의 서열과 디자인에 따라 다릅니다. GC 함량과 앰플리콘 길이는 상용화된 분석 혹은 맞춤 설계된 분석에 따라 다릅니다. PCR 화학물질은 보편적인 사용과 최고의 성능에 최적화되어 있습니다. 그러나 때로는 특정 인핸서(enhancer)를 추가하는 것이 좋은 경우도 있습니다. 새로운 Enhancer GC는 앰플리콘이 GC가 풍부하거나 150nt보다 긴 경우 dPCR 반응에 추가할 수 있는 선택적 구성요소(별도의 바이알)입니다. 또한 TaqMan(Thermo Fisher) 유전자 발현 분석과 함께 사용하는 것이 좋습니다.

표: Enhancer GC 사용 유무에 따른 RT 효율성

우수한 증폭 성능

우수한 성능 가수 분해 프로브 기반 dPCR용 QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit는 최신 버전의 QIAGEN 고품질 DNA 중합효소를 사용합니다. 새로운 QuantiNova DNA 중합효소와 나노플레이트 미세 유체(microfluidic)에 최적화된 QIAGEN의 독점적이고 입증된 완충액 기술의 고유한 조합은 민감도, 재현성 및 효율성 측면에서 매우 일관된 결과를 제공합니다.

내부 대조물질 RNA

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit는 필요에 따라 역전사 및 증폭 대조물질으로 사용할 수 있는 QN IC RNA(QuantiNova Internal Control RNA)와 함께 제공됩니다.  QuantiNova IC Probe Assay (200)(카탈로그 번호 205813)는 별도로 구매 가능하며, QIAcuity 기기의 노란색 채널에서 200bp 앰플리콘 형태의 QuantiNova Internal Control RNA를 검출합니다. QuantiNova IC RNA 검출을 위한 프라이머 및 프로브 염기서열은 수백 종의 진핵생물 및 원핵생물에 대한 비상동성에 대해 생물정보학적으로 검증되었습니다. 또한 여러 조직 및 세포주에서 추출한 인간, 마우스 및 래트 등 다수의 RNA 샘플에 대해 실험적으로 테스트되었습니다.

참고: QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500)(카탈로그 번호 205824)은 QIAcuity와 함께 사용하도록 최적화되지 않았으므로 사용자는 이를 구매해서는 안 됩니다.

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit에는 바로 사용 가능한 4x PCR 마스터 믹스가 포함되어 있어 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없습니다. OneStep 화학은 해당 바이러스 RNA의 RT 및 증폭을 한 스텝으로 할 수 있게 합니다. OneStep 반응으로 RNA 및 DNA 표적을 함께 검출할 수 있습니다.(예: 바이러스 RNA와 박테리아 DNA).

나노플레이트에서의 dPCR 반응 원리는 여기에 설명되어 있습니다.

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit에는 바로 사용 가능한 4x PCR 마스터 믹스가 포함되어 있어 반응 및 사이클링 조건을 최적화할 필요가 없습니다. 100배 농축 RT 믹스, 템플릿 RNA 및 프라이머-프로브 세트를 마스터 믹스에 추가하고 Quick-Start 프로토콜에 설명된 절차에 따라 진행하면, QIAcuity에서 빠르고 안정적인 결과를 얻을 수 있습니다. 새로운 HotStart RT 효소를 사용하면 QIAcuity Four 및 Eight 기기에 여러 나노플레이트의 병렬 설정 및 동시 로딩이 가능합니다(그림  나노플레이트 설정 및 로딩 참조).

QIAcuity Digital PCR System 및 QIAcuity Nanoplate와 QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit를 함께 사용하면 바이러스 RNA 또는 mRNA 검출을 비롯한 다양한 애플리케이션 분야에서 RNA 표적의 정량 분석이 가능합니다. 예를 들어 폐수 테스트와 같이 RNA 및 DNA 표적의 동시 검출이 필요한 애플리케이션 분야에도 적용 가능합니다.