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Q-Solution Kit는 까다로운 qPCR 및 dPCR 반응에서 조건을 최적화하도록 제작되었습니다. 이 키트 박스에는 따로 또는 함께 사용할 수 있는 5x Q-Solution 및 25mM MgCl2가 포함되어 있습니다. 두 용액 모두 필요에 따라 농도 범위를 적정할 수 있습니다.
PCR 억제제가 미치는 영향 최소화
Q-Solution은 혁신적인 다용도 PCR 첨가제로, 모든 QIAcuity 마스터 혼합물에 사용할 수 있습니다. Q-Solution의 특수한 속성을 이용하여 PCR 반응을 방해할 수 있는 억제제(예: 잔여 알코올, 헤파린, 부식산, 기타 중요 물질)의 캐리오버를 완화합니다(그림 1).
프라이머의 결합 친화성 강화
프라이머 또는 프로브 결합이 약해 PCR 성능이 저하된다고 의심되는 경우 PCR 반응에 MgCl2 를 첨가해 보세요.
dPCR 및 qPCR 마스터 혼합물과 호환 가능
모든 dPCR, end-point PCR 또는 qPCR 반응에는 처리량, 재현성, 민감도를 제공하는 어려운 PCR 조건이 존재할 수 있습니다. 데이터에 따르면 Q-Solution Kit는 응용 분야에 관계없이 일부 사례에서 두 구성 요소를 간단히 적정한 후 dPCR, end-point PCR, qPCR의 반응을 개선할 수 있습니다.
Q-Solution은 DNA의 녹는점을 낮춰 GC 함량이 높거나 아데노 연관 바이러스(Adeno-Associated Virus, AAV) 유전체에서 발견되는 것과 같이 이차 구조가 복잡한 DNA로 인해 발생하는 어려움을 극복할 수 있습니다. 이 키트는 또한 억제제가 있는 경우 PCR 효율을 높입니다. MgCl2 추가는 선택 사항이며, 추가하면 EDTA와 같은 킬레이트제로 인해 PCR에 오류가 발생하는 것을 방지할 수 있습니다. MgCl2 는 DNA 중합효소의 필수 보조 인자로서 프라이머와 템플릿 간에 형성된 것을 포함하여 이중 가닥 DNA 구조를 안정화할 수 있습니다. 나노플레이트에서의 dPCR 반응 원리는 여기에 설명되어 있습니다.
프로토콜은 단순하고 QIAcuity Digital PCR System을 갖춘 모든 실험실에서 수행할 수 있습니다. 사용자는 사용 설명서의 지침에 평소대로 반응 혼합물을 준비하거나 퀵 스타트 프로토콜에 설명된 대로 Q-Solution 및 MgCl2 를 첨가하면 됩니다. 혼합물은 나노플레이트에 피펫팅됩니다. 특정 반응 설정에서 최적의 농도를 찾기 위해 처음 사용할 때는 사용하기 전에 Q-Solution 및 MgCl2를 적정하는 것이 좋습니다.
Q-Solution Kit는 end-point PCR 및 qPCR은 물론 QIAcuity에 대한 다양한 dPCR 반응에 매우 적합합니다. 다양한 용도 예는 “리소스” 섹션의 응용 참고 사항을 확인하시기 바랍니다.
QIAcuity Probe PCR 키트를 사용하여 dPCR Mutation Assay BRAF 476 Human으로 야생형 BRAF 유전자좌를 정량화하는 반응에서, 반응 혼합물에 3.5% 또는 5% 에탄올이 존재하면 1D 스캐터플롯에서 U자형 패턴이 나타나고, 에탄올이 없는 대조 반응과 비교하여 정량화가 저해되었습니다.