QuantiFast SYBR® Green PCR Kit

SYBR Greenを用いた高速リアルタイムPCRおよび2ステップqRT-PCR用

  • 低コピーターゲットでも、特異的で高感度な検出
  • 至適化済みマスターミックスで至適化せずに正確な結果を実現
  • 5分間の酵素活性化と高速サイクリング条件
  • 幅広いテンプレート量を正確に検出
  • 標準的および高速サイクラーに対応する共通プロトコール
QuantiFast SYBR Green PCR Kitは、SYBR Green I検出を用いたリアルタイムPCRまたは2ステップRT-PCRで迅速かつ特異的にgDNAまたはcDNAターゲットを定量します。Q-bondテクノロジーと至適化済みで即使用可能なマスターミックスにより、短いRamping Time機能を持つ高速サイクラーだけではなく標準的なサイクラーでも、より短時間でリアルタイムPCRを実現します。ホットスタートと即使用可能なマスターミックス中の独自のPCRバッファーシステムの組み合わせは、至適化の必要はなく、全てのリアルタイムサイクラーで高感度な定量PCRを実現します。マスターミックスは2~8 ℃で保存でき、簡便に取り扱えます。
製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 2 x 2 ml RNase-Free Water
204054
¥52,500
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204056
¥219,000
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (4000)
For 4000 x 25 µl reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water
204057
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QuantiFast SYBR® Green PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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PCR時間を顕著に短縮|わずかなコピー数の差異を解析|感度を損なわずにより迅速な結果を実現|高感度な2ステップRT-PCR|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast SYBR® Green PCR Kitは、標準的なサイクラーで2ステップリアルタイムRT-PCRのトータルPCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。|男性ドナーのゲノムDNA中に存在するY染色体に特異的なシングルコピー遺伝子SRYをMastercycler ep realplexを用い、QuantiFast SYBR® Green PCR Kitで検出した。[A] 1000コピーから1.5コピーまでの増幅曲線はそれぞれ明確に判別できる。[B] コピー数(対数)に対するCT値のプロットは高い直線性を示している。|ヒト白血球中のMYC(プロトオンコジーン)の発現をApplied Biosystems 7500 Fast Systemにおいて2ステップリアルタイムRT-PCRで解析した。cDNAの10倍段階希釈液(10 ng~10 pg)を用いてduplicateで反応を行なった。[A] QuantiFast Kitを用いたFastサイクリングモードでは、CT値が[B] QuantiTect Kitを用いた標準的サイクリングモードと同等になった。一方、Supplier AIIの標準的なサイクリング用キットでは、[C] Fastサイクリングモードだけでなく[D] 推奨されている標準的サイクリングモードでも良好なCT値が得られなかった。|ヒト白血球のMYC(プロトオンコジーン)発現は、 iCycler iQと[A] QuantiFast SYBR® Green PCR Kitまたは[B] Supplier BVのキットを用いて解析した。cDNAの10倍段階希釈液(100 ng~0.1 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。Supplier BVの機器専用キットを高速サイクリングプロトコールに従って使用した。QuantiFast KitでCT値が低いことは、感度が高いことを示している。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

Fastサイクリングモードで使用した他のリアルタイムPCRキットに比較して、QuantiFast SYBR Green PCR Kitでは卓越した特異性と感度の高い結果が得られます(図"高感度な2ステップRT-PCR")。PCR時間が最大60%短縮され(図"PCR時間を顕著に短縮")、PCRの性能を妥協しなくても結果をより速く得られます(図"感度を損なわずにより迅速な結果を実現")。従って、サンプル処理数を大幅に増やしたり、他の実験者と1 台のサイクラーを効率的に共有できます。 

QuantiFast SYBR Green PCR Kit は、数段階に対数希釈したテンプレート液で正確な定量を実現します。低コピー数のターゲットのわずかな差異も明確に区別することができます(図"わずかなコピー数の差異を解析")。

原理

QuantiFast SYBR Green PCR Kitでは、標準的なサイクラー、高速サイクラーともに、広範なダイナミックレンジで非常に高感度かつ特異的な結果が得られます。マスターミックスの蛍光色素SYBR Green Iでは多種類のターゲットの解析が可能で、ターゲット特異的な標識プローブを合成する必要もありません。新規PCR添加剤のQ-Bondを含有する特別に開発された高速PCR用バッファーにより、変性、アニーリングおよびエクステンション時間も顕著に短縮されます(図"プライマーの高速なアニーリング")。PCRバッファー中のK+およびNH4+のイオン配合比により、プライマーの特異的なアニーリングが促進され、高いPCR効率と感度を実現します(図"特異的なプライマーアニーリング")。さらに、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseで活性化に必要な時間は95℃ではわずか5分で、厳密なホットスタートを行なえるため、非特異的な産物の形成を抑えます。  

2x QuantiFast SYBR Green PCR Kitの成分*
成分 特長 利点
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 95℃、5分間の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
QuantiFast SYBR Green PCR Buffer NH4+/K+イオンの配合バランス 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
ユニークなQ-Bondを含む PCR反応時間が短縮されるため、迅速に結果が得られ、1日あたりの反応数を増やせる
SYBR Green I色素 ニ本鎖DNAに結合して強い蛍光シグナルを発生 高感度な定量
ROX色素 Applied Biosystems社およびオプションのAgilent社の装置で蛍光シグナルを補正 ROXが必要なサイクラーで正確な定量。他のリアルタイムサイクラーでの反応を妨害しない
* dNTP Mix(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)も含む。
操作手順

QuantiFast SYBR Green PCR Kitは反応条件やサイクリング条件の至適化が不要で即使用可能なマスターミックスです。プライマーおよびDNAテンプレートを即使用可能なPCRマスターミックスに添加するだけで、反応を開始することができます。ハンドブックに記載されているプロトコールに従うだけで、全てのリアルタイムサイクラーで迅速で正確な結果が得られます。

2ステップリアルタイムRT-PCRで最適な結果を得るためには、QuantiTect Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを合成することをお薦めします。本キットは、ゲノムDNAコンタミの除去を組み合わせたcDNA合成をわずか20分で行ないます。

SYBR Greenを用いた遺伝子発現解析にはQuantiTect Primer Assayをお薦めします。QuantiTect Primer Assayは、ヒト、マウス、ラット、その他の生物種の全ての遺伝子に対応するバイオインフォマティックスで検証済みのプライマーセットです。アッセイはGeneGlobe Webポータルサイトで簡単にオーダーできます。

アプリケーション

QuantiFast SYBR Green PCR KitはcDNAターゲットの遺伝子発現解析および定量gDNA解析に使用できます。QuantiFast SYBR Green PCR KitはApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、RocheおよびAgilent社製などの市販されている全てのリアルタイムサイクラーに対応します。Rotor-Gene Qおよび他のRotor-Geneサイクラーを使用する場合は、これらの高速サイクリング用に特別に開発されたRotor-Gene SYBR Green PCR Kitの使用をお勧めします。

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FAQ
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キットハンドブック
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For fast, quantitative, real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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SYBR Green I を用いた高速リアルタイム定量PCRおよび2ステップRT-PCR 用
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クイックスタートプロトコール
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MSDS
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