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miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit (50)
Cat. No. / ID: 217204
The miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit enables the isolation of total RNA, including miRNA, from a minimum of 200 µl of sample. The phenol-free protocol allows all steps to be performed on the bench and removes the need for phase separation, making the kit suitable for automation, e.g., on the QIAcube Connect. The kit includes UCP columns that go through a rigorous ultraclean production process to ensure highly pure RNA eluates.
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miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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特徴
- フェノール処理が不要：煩雑な層分離、チャンバー操作不要の簡便プロトコール
- MinEluteカラムを採用し最小の溶出量（20 μl）
- すべてのダウンストリームアプリケーションに最適な⾼純度 RNA
製品詳細
miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit は少量の⾎清および⾎漿（200 μl）から、主にmiRNAやその他のsmall RNAなどの無細胞性トータルRNA精製のためにデザインされています。フェノール処理が不要なプロトコールは、煩雑な層分離操作、チャンバー操作を行わずに簡便に行えます。キットには、高純度なRNA溶出を確実に行うためにUCP（ultraclean production）カラムが含まれています。
パフォーマンス
miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit は、従来のmiRNeasy Serum/Plasma Kit に比べ、フェノール不要で、同様のRNA収量と品質を備えています（図 フェノール不要で高収量のmiRNAが得られる）。miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit は、最少200 μl の血清および血漿サンプルからmiRNA を含むトータルRNA を効率的に分離します。フェノール不要のプロトコールは、真空ポンプを必要とせずに、簡単に自動化できるMinEluteスピンカラム技術を使用しています（図 miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit 操作手順）。更に細胞外小胞を溶解するステップを含むので、小胞内および小胞外のRNA の分析を可能にします（図 細胞外小胞 (EVs) の内外に有意に存在するmiRNA の検出）。miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit は、他の製品と異なり、RNA の品質、収量を損なうことなく、フェノール不要な簡便なプロトコールを組み合わせた製品です（図 収量と性能の競合比較）。
図参照
原理
血漿中の全てのRNA（細胞外小胞中のRNA を含む）を完全に分析するために、血漿サンプルとBuffer RPL を混合し、効率的かつ、確実に細胞外小胞を溶解します。キットには、血漿中タンパク質などの夾雑物を沈殿させるBuffer RPP が含まれています。キットはスピンカラム技術をベースにしたプロトコールを採用しています。まず初めに溶解サンプルをスピンカラムにアプライし、トータルRNA を結合させます。その後、洗浄および遠心分離ステップで不要な夾雑物質などを除去します。最終的には、遠心分離ステップでサンプルが溶出されます。
操作手順
血清または血漿（200 μl）をBuffer RPL と混合すると、血漿中タンパク質および細胞外小胞からRNAを放出させ、RNAを安定化させます。次いで、サンプルをBuffer RPP と混合し、遠心分離してタンパク質を沈殿させます。イソプロパノールを上清に添加して、約18ヌクレオチド以上のRNA分⼦の全てをシリカメンブレンに結合するための至適な条件にします。サンプルをRNeasy UCP MinEluteスピンカラムにアプライし、RNA がメンブレンに結合し、その後の他の夾雑物は洗浄ステップで除去されます。最終ステップでは、RNaseフリー水を用いてトータルRNA（> 18ヌクレオチド）を溶出させます。
アプリケーション
miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit は、以下のような様々なアプリケーションに使⽤可能な、miRNAを含む無細胞性のトータルRNA精製を実現します。
- バイオマーカーの探索発現プロファイリング
- 次世代シークエンシング
- 定量、リアルタイムRT-PCR
- マイクロアレイ解析
裏付けデータと数値
High recovery of miRNA without the need for phenol.
miRNA was isolated from 200 µl plasma from 3 different samples using the miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit (light blue bars) or the miRNeasy Serum/Plasma Kit (dark blue bars). Five microliters of recovered RNA, in a total volume of 25 µl, was used for cDNA synthesis using the miScript system, followed by PCR detection. Both kits show good recovery of miR16.
リソース
パンフレット (3)
MSDS (1)
キットハンドブック (1)
サイエンティフィック・ポスター (2)
クイックスタートプロトコール (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)