Taq PCR Core Kit

スタンダードおよび特殊なPCR用；dNTP Mixを含む

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Taq PCR Core Kit (1000 U)

Cat. No. / ID: 201225

4 x 250 units Taq DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂, dNTP Mix

数量

1000 U

250 U

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Taq PCR Core Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

PCR条件の至適化が最小限で済むQIAGEN PCR Buffer
直接ゲルにロード可能なPCR バッファーでより迅速な操作
GC リッチなテンプレートの増幅を促進するQ-Solution
簡便で取り扱いやすいフォーマット

製品詳細

Taq PCR Core Kitは、Taq DNA Polymerase、至適化の必要性を最小限に抑えるユニークなQIAGEN PCR Buffer、およびdNTP混合物からなる完全なキットの形で提供します。例えば、GCリッチのような”難しい”テンプレートの効率的増幅を実現するQ-Solutionも同梱されています。さらに、2 種類のマーカー色素を含むCoralLoad PCR Buffer が同梱されているので、PCR 産物を即座にゲルにアプライできます。

パフォーマンス

Taq PCR Core Kitは、他メーカーの試験されたキットに比べて優れており、時間のかかる至適化を必要とせずに、様々なPCRアプリケーションで確固たるPCR性能を示します。本キットには、スタンダードなPCRから特殊なPCRまで適応できる高品質の組み換え酵素、Taq DNA Polymeraseが同梱されています（図 " T_m 値の異なるプライマーへの適応性" と" 長いPCR産物の特異的増幅"）。TaqDNA Polymeraseは、全てのロットで、低コピー数のヒトゲノムDNAをターゲットとした増幅実験により、PCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲な品質管理テストを受けています（図 " ロット間での再現性"）。同様にキットに含まれているQIAGEN PCR BufferとCoralLoad PCR Bufferのユニークな組成によって、最小限の至適化要求事項と様々なPCR条件で、特異性の高いPCRが可能となります（図" 幅広い至適アニーリング温度"と " 異なったマグネシウム濃度への適応"）。さらに、CoralLoad PCR Bufferは、PCR産物をアガロースゲルに即座にロードすることを可能にするため、比較的簡単な操作で比較的早く結果が得られます。また、キット付属のPCR 添加物、Q - Solutionを使用すれば、不適切なPCR条件を改善することができます（図 " 増幅困難なテンプレートの増幅"）。

Taq DNAポリメラーゼの詳細データ

濃縮：5 units/µl
組み換え酵素:はい
基質類似体： dNTP、ddNTP、dUTP、ビオチン-11-dUTP、DIG-11-dUTP、蛍光-dNTP/ddNTP
エクステンション率72℃ で2～4 kb/分
半減期：97℃で10分、94℃で60分
増幅効率：≥10⁵ 倍
5'->3' エキソヌクレアーゼ活性：あり
余分なA付加：あり
3'->5' エキソヌクレアーゼ活性：なし
混入しているヌクレアーゼ：なし
混入しているRNase：なし
混入しているプロテアーゼ：なし
自己プライミング活性:なし

図参照

Tolerance of different primer Tm values.

Specific amplification of long PCR products.

Lot-to-lot reproducibility.

Tolerance to variable magnesium concentration.

Amplification of difficult templates.

原理

Taq PCR Core Kitには、簡便かつ確実なPCRに必要なあらゆるもの、すなわち、Taq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、CoralLoad PCR Buffer、Q-Solution、dNTP Mix、およびMgCl₂が同梱されています。

Taq DNAポリメラーゼ

Taq DNAポリメラーゼは、スタンダードなPCRから特殊なPCRまで適応できる高品質の組み換え酵素です（図 " T_m 値の異なるプライマーへの適応性" と" 長いPCR産物の特異的増幅"）。

QIAGEN PCR Buffer

革新的なQIAGEN PCR Bufferは、PCR至適化の操作を軽減することにより、時間と労力を節約するために開発されました。QIAGEN PCR Bufferは、KCl も (NH₄)₂SO₄ も含んでいます（図" プライマーのアニーリングにおける特異性が増加"）。このユニークなバッファーによって、特異的PCRの産物を増幅しやすくなります。PCR サイクルごとのアニーリングの間、非特異的なプライマー結合に対する特異的な結合の比率が、バッファーによって高く保たれます。このPCRバッファーは、KClと (NH₄)₂SO₄ のユニークな配合比により、従来のPCR バッファーに比べ幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密なプライマーアニーリング条件を実現します。異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります（図 " 幅広い至適アニーリング温度"および" 異なったマグネシウム濃度への適応 "）。

CoralLoad PCR Buffer

CoralLoad PCR Bufferは、QIAGEN PCR Bufferの全ての特長を持っています。さらに、PCR反応液をアガロースゲルに直接ロードするために使用することができ、従って、ゲルローディングバッファーを別途加える必要はありません。CoralLoad PCR Bufferは従来のQIAGEN PCR Bufferと同程度の高いPCR特異性を持ち、反応の至適化は最小限に抑えられます。さらに、これに入っている2種類のマーカー色素（オレンジ色の色素と赤色の色素）により、DNAの移動距離の予測とアガロースゲルの泳動時間の至適化を容易に行なえます（図" CoralLoad PCR Buffer"）。本バッファーはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。

Q-Solution

Q-Solution は、DNAの溶解挙動を変えることで、GCリッチなテンプレート、または二次構造が複雑なテンプレートを増幅しやすくします。この試薬の添加により、しばしば最適条件ではないPCRが改善されたり、今まで得られなかったPCR産物の増幅が可能になったりします（図 " 増幅困難なテンプレートをQ-Solutionにより増幅"）。DMSO や他のPCR添加物と異なり、本溶液はどのようなプライマー／テンプレートシステムでも一定の濃度で作用し、毒性もありません。

図参照

Tolerance of different primer Tm values.

Specific amplification of long PCR products.

Increased specificity of primer annealing.

Tolerance to variable magnesium concentration.

CoralLoad PCR Buffer.

Amplification of difficult templates.

操作手順

Taq PCR Core Kitは、PCRのセットアップに必要な全てのコンポーネントを提供し、PCRに基づく多様なアプリケーションに使用することができます。キット付属のプロトコールが至適化されて、理解しやすく、簡潔ですから、PCRは確実に成功します。まだ最適化されていないPCRはキットに同様に添付されているユニークなPCR添加物Q-Solutionで簡便に最適化ができます。

アプリケーション

Taq DNA Polymeraseは以下のようなスタンダードな用途にも特殊な用途にも使用できます。

スタンダードな PCR
RT-PCR
スクリーニング
PCRによるDNAフィンガープリンティング（VNTR、STR、RAPD）

裏付けデータと数値

CoralLoad PCR Buffer.

Specifications

Features	Specifications
Applications	PCR, RT-PCR, DNA fingerprinting
Sample/target type	Genomic DNA and cDNA
Real-time or endpoint	Endpoint
dNTP's included	Yes
Single or multiplex	Single
Reaction type	PCR amplification
Mastermix	No
With/without hotstart	Without hotstart
Enzyme activity	5' -> 3' exonuclease activity

リソース

Second edition — innovative tools

Addressing critical factors and new solutions

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

For standard and specialized PCR applications with minimal optimization

Publications

Nonhematopoietic/endothelial SSEA-1+ cells define the most primitive progenitors in the adult murine bone marrow mesenchymal compartment.

Anjos-Afonso F; Bonnet D;

Blood; 2006; 109 (3):1298-306 2006 Sep 26 PMID:17003364

Combined real-time PCR and rpoB gene pyrosequencing for rapid identification of Mycobacterium tuberculosis and determination of rifampin resistance directly in clinical specimens.

Halse TA; Edwards J; Cunningham PL; Wolfgang WJ; Dumas NB; Escuyer VE; Musser KA;

J Clin Microbiol; 2010; 48 (4):1182-8 2010 Jan 27 PMID:20107097

Expression of calcium channels along the differentiation of cultured trophoblast cells from human term placenta.

Moreau R; Hamel A; Daoud G; Simoneau L; Lafond J;

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An immune evasion mechanism for spirochetal persistence in Lyme borreliosis.

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J Exp Med; 2002; 195 (4):415-22 2002 Feb 18 PMID:11854355

FAQ

Both the quality and quantity of nucleic acid starting template affect PCR, in particular the sensitivity and efficiency of amplification. PCR sensitivity and efficiency can be reduced by the presence of impurities in nucleic acid preparations or in biological samples. These PCR inhibitors are completely removed when template is prepared using QIAGEN Kits for nucleic acid purification. Please refer to the Brochure "Maximizing PCR and RT-PCR success" for additional information.

The optimal primer–template ratio has to be determined empirically. If too little template is used, primers may not be able to find their complementary sequences. Too much template may lead to an increase in mispriming events. Generally, no more than 1 ug of template DNA should be used per PCR reaction. As an initial guide, spectrophotometric and molar conversion values for different nucleic acid templates are listed below.

Spectrophotometric conversions for nucleic acid templates

1 A₂₆₀ unit*	Concentration (ug/ml)
Double-stranded DNA	50
Single-stranded DNA	33
Single-stranded RNA	40

*Absorbance at 260 nm = 1

Molar conversions for nucleic acid templates

Nucleic Acid	Size	pmol/ug	Molecules/ug
1 kb DNA	1000 bp	1.52	9.1 x 10¹¹
pUC 19 DNA	2686 bp	0.57	3.4 x 10¹¹
pTZ18R DNA	2870 bp	0.54	3.2 x 10¹¹
pBluescript II DNA	2961 bp	0.52	3.1 x 10¹¹
Lambda DNA	48,502 bp	0.03	1.8 x 10¹⁰
Average mRNA	1930 nt	1.67	1.0 x 10¹²
Genomic DNA
Escherichia coli	4.7 x 10⁶*	3.0 x 10^-4	1.8 x 10⁸**
Drosophila melanogaster	1.4 x 10⁸*	1.1 x 10^-5	6.6 x 10⁵**
Mus musculus (mouse)	2.7 x 10⁹*	5.7 x 10^-7	3.4 x 10⁵**
Homo sapiens (human)	3.3 x 10⁹*	4.7 x 10^-7	2.8 x 10⁵**

* Base pairs per haploid genome

** For single-copy genes

FAQ ID -74

PCR products that will be cloned using the QIAGEN PCR Cloning Kit should be generated using a thermostable DNA Polymerase without proofreading activity, such as Taq DNA Polymerase. Such polymerases attach a single A overhang to their reaction products, which can hybridize to the U overhang of the pDrive Cloning Vector. For efficient addition of an A overhang during the PCR procedure, we recommend a final extension step for 10 min at 72°C as described in the standard protocols of the Taq PCR- and HotStarTaq PCR handbook.

FAQ ID -165

No, we do not sell Q-Solution separately. It is available only as a component of the Taq DNA Polymerase, Taq PCR Core, HotStarTaq DNA Polymerase, QIAGEN Multiplex PCR-, and the QIAGEN OneStep RT-PCR Kits.

FAQ ID -204

Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Polyacrylamide_gel_analysis_of_oligonucleotides' (PCR03).

FAQ ID -961

Taq DNA Polymerase has an intrinsic RNA-dependent DNA polymerase activity (reverse transcriptase activity). However, this activity is very low and is only present under buffer conditions that are completely different from those present during PCR. Therefore, "no-RT" controls would not give false positive results due to reverse transcription activity of the Taq polymerase.

FAQ ID -523

Not necessarily. In a lot of cases, the uniquely formulated PCR Buffer provided in the HotStarTag Plus DNA Polymerase, HotStar HiFidelity Polymerase, Taq DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and QIAGEN Multiplex PCR Kits provides optimal amplification of specific PCR products. The usefulness of Q-Solution needs to be determined empirically for each primer/template setup, by running parallel PCR reactions with and without Q-Solution under the same cycling conditions.

Q-Solution changes the melting behavior of DNA and will often improve a suboptimal PCR caused by templates that have a high degree of secondary structure or high GC-contents. For more details on the effects of Q-Solution on PCR amplification, please see the Q-Solution sections of the HotStarTaq Plus DNA Polymerase, HotStar HiFidelity Polymerase, Taq DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and the QIAGEN Multiplex PCR Handbooks.

FAQ ID -380

CoralLoad gel tracking dye contained in Taq, HotStarTaq, TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits separates into 2 fragment-size dependent colors (orange and red) when loaded onto an agarose gel. Sigma Red buffer only has one color which is harder to visualize.

FAQ ID -1644

Yes. Please see Table 3 in our brochure Maximizing PCR and RT-PCR success. We tested the effects of different inhibitory substances in a number of PCR systems. We also analyzed the effect of including different volumes of reverse transcription (RT) reaction mixtures in PCR. Please see the table below for a list of commonly encountered template impurities and their inhibitory effects on PCR.

Impurities showing inhibitory effects on PCR

Substance	Inhibitory concentration
SDS	>0.005% (w/v)
Phenol	>0.2% (v/v)
Ethanol	>1% (v/v)
Isopropanol	>1% (v/v)
Sodium Acetate	≥5 mM
Sodium Chloride	≥25 nM
EDTA	≥0.5 mM
Hemoglobin	≥1 mg/ml
Heparin	≥0.15 i.U./ml
Urea	>20 mM
RT reaction mixture	≥15%

FAQ ID -818

QIAGEN's 10x PCR Buffer provided in the Taq DNA Polymerase, Taq PCR Core, and HotStarTaq DNA Polymerase Kits contains:

Tris-Cl
KCl
(NH₄)₂SO₄
15 mM MgCl₂ ; at pH 8.7 (20°C).

Note that further details on the composition of the 10x PCR Buffer are proprietary.

FAQ ID -606

The DNA yield obtained in a PCR reaction depends on the size of the amplicon, design of the primers, starting amount of template and primers, amplification efficiency, reaction volume, numbers of PCR cycles etc. Therefore it is really difficult to predict what yield to expect. Nevertheless, in our experience, approximately 1 µg is a good guess for most cases.

FAQ ID -750

Taq DNA Polymerase and HotStarTaq DNA Polymerase are compatible with cycle sequencing. However, our buffer system is not optimized for this purpose. Optimization of reaction conditions is therefore required when using these Polymerases for cycle sequencing. Unfortunately, we do not have any protocols for this application. An initial activation of the enzyme is necessary if HotStarTaq DNA Polymerase is used.

FAQ ID -741

To determine the optimal annealing temperature for a PCR assay, a Temperature Gradient experiment should be performed. To do this, you will set up several PCR reactions in duplicate for the same primer/template combination, using the same PCR chemistry, and subject each of the reactions to a slightly different annealing temperature within a specified range. If a thermal cycler with a temperature gradient function can be used, you can simply program a temperature range for adjacent wells in the cycling block. If no cycler with a gradient function exists in your lab, you will either have to perform duplicate reactions at different temperatures in different machines (if available), or back to back in the same machine.

FAQ ID -288