QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit

• 困難なアプリケーションでも良好なマルチプレックスPCRを実現
• 確実で一定したPCR 結果
• 至適化不要でルーチン化できるマルチプレックスPCR アッセイ
• 短い反応時間と簡便な操作手順

QIAGEN Multiplex PCR Plus KitはQIAGEN独自のマルチプレックスPCRテクノロジーを基本にしており、初めてのPCRでも良好な結果が得られます。至適化済みのマスターミックスは、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseと、マルチプレックスPCR用に特別に開発された画期的なPCRバッファーシステムで構成されています。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseの特長である厳密なホットスタートにより、非特異的にアニーリングしたプライマーやプライマーダイマーからのエクステンションを回避できるので、マルチプレックスPCR 反応の特異性が増加します。

至適化なしで高い特異性と感度を実現

QIAGEN Multiplex PCR Plus KitはマルチプレックスPCRアプリケーションで高い特異性と感度を実現し、他社のキットよりも良好な結果が得られ、至適化は不要です（“ 効率的な19-plex PCR" および" 幅広いテンプレート量での16-plex PCR成功例”）。GCリッチなテンプレートを増幅するために添加されているQ - Solutionにより、不適切なPCR条件を改善することができます。 

信頼性の高い結果により困難なアプリケーションでも時間と試薬量を効率化

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kitは困難を伴う様々なアプリケーションに最適です（表参照）。本キットを用いた簡単な反応セットアップ、迅速な操作手順、高い操作性により、再現性の高い結果が短時間で得られ、PCR パラメーターの至適化は不要です。マルチプレックスPCR アッセイのセットアップは判りやすく容易なので、ルーチン的な研究における時間と試薬を効率的に使用できます。

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseｓ詳細データ

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit はQIAGEN が誇るマルチプレックスPCR テクノロジーを基本にしており、使いやすいマスターミックスとして即使用できます。キット成分は全て簡便性と迅速性を最大にするために特別に開発され、信頼性の高い安定した結果が得られます（表参照）。Multiplex PCR Master Mix は、至適化された濃度のHotStarTaq Plus DNA Polymerase、MgCl₂、dNTPs および画期的なPCR バッファーで構成されています。

マルチプレックスPCR を成功させる重要なファクター ― 様々なアプリケーションで安定した信頼性の高い結果

多数のPCR反応を行なう場合、マルチプレックスPCRにより、時間および試薬量を節約でき、基礎研究、法医学研究、分子解析ラボにおけるジェノタイピング、DNAやcDNAテストで幅広く使用されています。アプリケーションには、トランスジェニック生物および病原体のタイピングと解析、マイクロサテライト座の増幅と解析、SNP あるいは変異領域の検出、メタゲノム研究が含まれます 。マルチプレックスPCR には一般に非常に高度な至適化が必要であり、成功を左右する要因は主にPCR パラメーターの最適化にあります。その際直面する最大の問題は、プライマーペアごとにテンプレートDNA とのハイブリダイゼーション速度が異なるために増幅の偏りが生じることです。高い効率で結合するプライマーは増幅反応成分をより多く利用するため、他のプライマーから増幅されるPCR産物の収量が低下します。マルチプレックスPCR では、プライマーの種類が多いためにプライマーダイマーの形成や非特異的プライミングなどのリスクも大きくなります。これらの問題を解決しなければ、感度や特異性の低い増幅および偏りのある増幅を引き起こし、安定せず不満足な結果しか得られません。上記の問題を解決するには労力と時間のかかる至適化プロセスが必要であり、結果として多くの時間と試薬が費やされます。QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit はこれらの問題を克服し、至適化なしで容易に結果が得られます。Multiplex PCR Master Mix のユニークな成分は増幅困難なターゲットでも特異性と感度の高い増幅を実現します。またマルチプレックスPCRアッセイすべてを迅速かつ良好に実現するので、時間と試薬量を大幅に抑えることができます (図 “ 至適化なしで良好なマルチプレックスPCR”）。

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

HotStarTaq Plus DNA Polymerase はTaq DNA polymeraseを化学的に修飾したもので、常温では活性がありません。これにより、PCRセットアップ中や最初のサイクル中に低温で形成される非特異的にアニーリングしたプライマーやプライマーダイマーのエクステンションを防ぎます。反応条件の至適化は不要です。マルチプレックスアッセイはまた容易に室温でセットアップできます。HotStarTaq DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーション・ステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

Multiplex PCR Buffer

この特殊なバッファーは最適な配合比のK⁺とNH₄⁺、ならびに革新的なPCR添加物であるFactor MPが入っています。 これはテンプレート周辺でのプライマー濃度を高めます（図“ 安定かつ効率的なアニーリング”）。非特異的アニーリングは最小限に抑えられ、全ターゲットの同時増幅が微量のテンプレートでも良好に行なわれます（図“ 幅広いテンプレート量での16-plex PCR成功例”）。K⁺や他の陽イオンとともに、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にします。画期的なバッファーは、各PCR ステップのアニーリングステップ中でプライマーの特異的結合の割合を非特異的結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を実現します。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH₄)₂SO₄を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密で特異的なプライマーアニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。

本キットにはまた、GC リッチな領域あるいは複雑な二次構造を持つテンプレートDNA など困難な増幅の効率を向上させるQSolution が入っています。またキットに入っているCoralLoad Dye によりピペッティング操作、ゲルロード、DNA 泳動の可視化が改善され、操作がさらに簡単になります（図“ 容易なPCRセットアップと簡単なDNAの可視化”）。

時間のかかる至適化の後でさえ失敗することのある従来法と比べて、QIAGEN Multiplex PCR Plus Kitは、初めての実験でも簡単なプロトコールを用いて良好なマルチプレックスPCR結果が得られます（図 “ 至適化実験なしに良好なマルチプレックスPCR”）。

簡便で迅速なダウンストリーム解析

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kitを用いて得られるマルチプレックスPCR 産物は、様々な手法を用いて簡便かつ迅速に解析できます。アガロースゲル、キャピラリーシークエンサー、QIAxcel Advanced Systemのどれを用いた解析においても、全ての増幅産物は容易に可視化され、各々のPCR 断片を高い信頼性で判別できます（図“ 19plex PCR の成功例”）。

簡便なキットフォーマット

QIAGEN Multiplex PCR Plus Kitには即使用可能な至適化済みのマスターミックスが入っており、さらに使いやすくなっています。マスターミックスを使用すると、時間の節約、反応セットアップの簡略化、ピペッティングエラーやコンタミの発生源排除による再現性向上を実現します — ピペッティング操作は最小限に抑えられ、時間のかかる計算は不要です。プライマーとテンプレートのみを添加して最終の増幅ミックスを調製します。マスターミックスは2～8℃で保存できるので、マルチプレックスPCRアッセイのセットアップをさらに迅速に行なえます。反応は室温でセットアップできるので、使いやすく便利です。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、95℃、5分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。本キットに入っているCoralLoad Dyeは、PCRセットアップ中のピペッティングが見やすく、ゲルでのDNAの泳動の様子を簡単に目視できるので、操作がさらに簡便になります。