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exoRNeasy Midi Kit (50)
Cat. No. / ID: 77144
For purification of total exosome-derived RNA; includes 50 exoEasy Midi columns and 50 RNeasy MinElute spin columns
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キット試薬バッファー
exoRNeasy Kit
Reagent UI
Buffer
カラムタイプ
Midi
Maxi
Midi/Maxi
exoRNeasy Serum/Plasma Kitsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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特徴
- Maxi Kit は大量サンプル中の希少な転写産物を検出可能なレベルにまで濃縮可
- Starter Kit はMaxi とMidi カラムの両方を含み初期検討に最適
- わずか１時間以内に、サンプルからEVs 中のRNA 精製を実現
- スピンカラムステップにより並行で複数サンプル処理が可能
- 血清／血漿からのEVs 中のmiRNA とmRNA の両方を精製可能
製品詳細
exoRNeasy Serum/Plasma Kits は血清、血漿、細胞培養上清、その他の体液からのエクソソームや細胞外小胞（EVs）を効果的な単離をアフィニティーメンブレンを用いたスピンカラムを行ない、EVs 中のRNAをダイレクトに精製します。Midi カラムのフォーマットは少容量のサンプル処理が可能です（血清／血漿なら最大で1 ml）。Maxi カラムのフォーマットは大容量のサンプル処理が可能です（血清／血漿なら最大で4 ml、細胞培養上清なら最大で32 ml）。それぞれ低存在量のEVs 中のRNA を高純度で精製し、信頼性高い検出が可能です。exoRNeasy Serum/Plasma Kits は、精製操作は迅速で再現性が高く、高感度ダウンストリームに最適な結果をもたらします。
パフォーマンス
exoRNeasy プロトコールは超遠心に比べて迅速であることに加え、より高純度な分離が可能です。期待されるサイズのインタクトな細胞外小胞（EVs）がexoEasy と超遠心の両方で得られるものの、超遠心操作においては予想されるEVs のサイズや形体とは異なる小さな構造物も同時に回収されていることを走査電子顕微鏡の結果が示しています。（図 超遠心操作の場合と比べ、exoEasy メンブレンからの溶出液はインタクトな細胞外小胞（EVs）が高純度で含まれていることが示される）。
さらに、exoRNeasy と従来の超遠心で得られた大小それぞれのRNA はBioAnalyzer での解析において、類似したサイズを示しています（図 exoRNeasyにより血漿中の細胞外小胞（EVs）からRNA を単離し、サイズ解析を行った）。
exoRNeasy プロトコールで精製したRNA およびexoEasy カラムからのフロースルーでのRT-qPCR実験によって、最終的にexoRNeasy で得られるRNA が、血漿中のmRNA や、EVs 中のmiRNA で有る事が確認されました（図 exoRNeasy による血漿中の細胞外小胞（EVs）特異的なmRNA とmiRNA の回収）。
原理
exoRNeasy Serum/Plasma Kits は従来の超遠心による細胞外小胞（EVs）分離法に比べ、わずか20分で細胞外小胞（EVs）を単離します。Exosome Diagnostics, Inc. によって開発されたこの技術は、スピンカラムフォーマットと専用のバッファーで構成され、フィルトレーションされた生体体液からのEVs を精製できます。血清／血漿はMaxi Kit では最大4 ml を処理が可能で、Midi Kit では最大1 ml を処理が可能です。その後、ダイレクトにQIAGEN のmiRNeasy テクノロジーを用いてトータルRNA を精製します。血清／血漿からRNA 精製するまでの全ステップは、わずか１時間で終了します。
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit は、Midi とMaxi のexoEasy カラムを含み、様々な量の血漿から解析が可能なため初期検討に最適です。
exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit は、Midi とMaxi のexoEasy カラムを含み、様々な量の血漿から解析が可能なため初期検討に最適です。
操作手順
細胞外小胞（EVs）からRNAを単離するための全操作手順は、細胞外小胞（EVs）単離とRNA精製の2つのステップで構成されています（図 わずか1 時間で細胞外小胞（EVs ）中のトータルRNA を精製 ― exoRNeasy Kits）。
細胞外小胞（EVs）単離ステップは、プレフィルトレーションした血漿（0.8 µm 以上の粒子を除去済み）をBuffer XBPと混合し、exoEasy メンブレンアフィニティースピンカラムに通液し、EVs を結合させます。EVs が結合された状態でBuffer XWP で洗浄し、QIAzolで溶解します。
RNA精製ステップでは、QIAzol溶出液にクロロホルムを添加し、水相を回収し、エタノールと混合します。 miRNAを含むトータルRNAをスピンカラムに結合し、3回洗浄の後、溶出させます。
細胞外小胞（EVs）単離ステップは、プレフィルトレーションした血漿（0.8 µm 以上の粒子を除去済み）をBuffer XBPと混合し、exoEasy メンブレンアフィニティースピンカラムに通液し、EVs を結合させます。EVs が結合された状態でBuffer XWP で洗浄し、QIAzolで溶解します。
RNA精製ステップでは、QIAzol溶出液にクロロホルムを添加し、水相を回収し、エタノールと混合します。 miRNAを含むトータルRNAをスピンカラムに結合し、3回洗浄の後、溶出させます。
アプリケーション
exoRNeasy Serum/Plasma Kitsは、血清／血漿に含まれる細胞外小胞（EVs）中のmRNA、miRNAを含むトータルRNAの精製に至適な製品です。
裏付けデータと数値
exoRNeasy isolates small and large RNAs from extracellular vesicles present in plasma.
Bioanalyzer sizing was performed with vesicle-derived RNA purified by two methods. The plasma was pre-filtered (0.8 µm) to exclude larger particles and subjected to either ultracentrifugation, the current gold standard of vesicle isolation, or the exoRNeasy procedure. Both methods purify RNA of similar size and yield.
リソース
サイエンティフィック・ポスター (2)
Supplementary Protocols (2)
キットハンドブック (1)
クイックスタートプロトコール (2)
パンフレット (1)
MSDS (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Publications
Characterization of RNA from Exosomes and Other Extracellular Vesicles Isolated by a Novel Spin Column-Based Method.
PLoS One; 2015; 10 (8):e0136133 2015 Aug 28 PMID:26317354
miRNA contents of cerebrospinal fluid extracellular vesicles in glioblastoma patients.
J Neurooncol; 2015; 123 (2):205-16 2015 Apr 23 PMID:25903655
Urinary Exosomal miRNA Signature in Type II Diabetic Nephropathy Patients.
PLoS One; 2016; 11 (3):e0150154 2016 Mar 1 PMID:26930277
Curcumin inhibits in vitro and in vivo chronic myelogenous leukemia cells growth: a possible role for exosomal disposal of miR-21.
Oncotarget; 2015; 6 (26):21918-33 2015 Sep 8 PMID:26116834
The Swine Plasma Metabolome Chronicles "Many Days" Biological Timing and Functions Linked to Growth.
PLoS One; 2016; 11 (1):e0145919 2016 Jan 6 PMID:26735517