QuantiFast Pathogen +IC Kit

• 追加料金なしで事前に最適化した内部コントロール
• 病原体標的と内部コントロール両方を検出する4プレックス（RT）-PCR
• 便利な室温でのセットアップのための独自の二相ホットスタート手順
• マスターミックスに含まれる安定したRTにより、使いやすい1つのプロトコールを提供
• エラーを最小限にする視覚的ピペッティングコントロール

QuantiNova Pathogen +IC Kitは、配列特異的プローブを用いて病原体核酸を高感度かつ迅速なreal-time (RT-) PCRで検出するように設計されています。このキットには、ユーザー定義の病原体標的（ウイルス、細菌、真菌など）とQuantiNova Internal Control （IC）RNAまたはDNAの4プレックスリアルタイム検出用試薬が含まれています。ICとアッセイの両方が、抽出または増幅コントロールとして使用できるように含まれているので、陰性検出結果を正しく解釈できます。さらに、超高速ですぐに使用できるキットにより、合理化され自動化されたワークフロー用の便利な室温での反応セットアップが可能で、取り扱いと安全基準を向上させる視覚的ピペッティングコントロールも提供します。マスターミックスは2～8℃で保存でき、便利です。

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QuantiNova Pathogen +IC Kitは、マルチプレックス時に感度を損なうことなく、広い直線範囲でウイルスRNAまたはDNA標的とQuantiNova Internal Control (IC)を同時に検出することができます。このプロトコールは、多くのサイクラーで信頼性の高い超高速サイクリング実験を行えるように開発されました。病原体標的とIC RNAまたはDNAを組み合わせて増幅すると、陰性結果の正しい解釈が保証され、インプロセス安全性が増します。付属のICは核酸精製や増幅プロセスのモニターに使用でき、視覚的ピペッティングコントロールにより手動またはロボットによるピペッティング後の目視チェックが可能になります（図 内蔵ピペッティングコントロールが示す正確な反応セットアップ参照）。独自の二相ホットスタート手順により、性能を損なうことなく、室温で手動または自動の反応セッ トアップを行うことが可能です（図 新しいQuantiNova二相ホットスタートメカニズムの原理参照）。QuantiNova Pathogen +IC Kitは阻害剤存在下でも堅牢であり、変性したプライマー/プローブの使用が可能です。このキットは超高速でインプロセス制御されたマルチプレックスqPCRを提供し、ワークフローの効率と信頼性を高めます。

陰性結果の正しい解釈を通じてインプロセスの安全性を向上させることができるように、QuantiNova Pathogen +IC Kitには、ユーザーが定義する病原体標的のマルチプレックスリアルタイム検出用試薬が内部コントロールとともに含まれています。標的遺伝子とコントロール遺伝子を同じ反応で増幅すると、取り扱いエラーが最小限に抑えられ、信頼性が向上します。付属のICを使用して増幅が成功したか（PCR阻害物質の除去など）確認することや、核酸精製の前にサンプルに添加して精製プロセスの効率とPCRまたはRT-PCR増幅の両方をコントロールすることができます。real-time PCRと1ステップRT-PCRを同じプロトコールで同時に実行することができます。また、このキットは二相ホットスタート手順も使用しています（図 新しいQuantiNova二相ホットスタートメカニズムの原理参照）。これには、50°CでのHotStaRT-Script逆転写酵素と95°CでのPCRポリメラーゼ両方の熱媒介活性化が含まれます。低温では、HotStaRT-ScriptがRT-Blocker分子と複合体を形成し、不活性化につながります。50°Cではこの複合体は解離し、活性のあるHotStaRT-Script酵素が放出されます。QuantiNova DNA Polymeraseは、QuantiNova Antibodyと新しい添加剤であるQuantiNova Guardによって不活性状態に保たれ、複合体を安定化させます。これにより、ホットスタート手順の厳密性が改善され、非特異的にアニーリングされたプライマーやプライマー–ダイマーの伸長を防ぐことができます。温度を95°Cまで上げると2分以内に、QuantiNova AntibodyとQuantiNova Guardが変性し、QuantiNova DNA Polymeraseが活性化され、PCR増幅が可能になります。この独自の二相ホットスタートにより、反応セットアップは室温で少なくとも1時間は安定した状態を保つことができ、アーチファクトの発生を防ぐとともに、自動反応セットアップも容易になります。
さらに、キットに付属のマスターミックスには不活性の青色色素が含まれており、これは、逆転写やreal-time PCRを阻害しませんが、チューブやウェル内の視認性を高めます。QuantiNova Yellow Template Dilution Bufferには不活性の黄色色素が含まれています。QuantiNova Yellow Template Dilution Bufferで希釈したテンプレート核酸をマスターミックスに添加すると、溶液の色が青色から緑色に変化し、正しいピペッティングと反応のセットアップを視覚的に示します（図 内蔵ピペッティングコントロールが示す正確な反応セットアップ参照）。マスターミックスには、K⁺イオンとNH₄⁺イオンがバランスよく配合されているほか、独自の合成Factor MPが含まれており、これらがともに、プライマーとプローブの核酸テンプレートへの安定的かつ効率的なアニーリングを促進するため、マルチプレックス反応であっても高いPCR効率が得られます（図 安定的かつ効率的なアニーリングを促進する独自のマルチプレックスPCRバッファー参照）。特別に開発されたPCRバッファーにはQ-Bondが含まれており、変性、アニーリング、伸長時間を大幅に短縮します（図 アニーリング中の高速サイクリングのメカニズム参照）。キットに付属のQuantiTect Nucleic Acid Dilution Bufferは、希釈および反応セットアップ時にRNAおよびDNA標準を安定化し、チューブやピペットチップなどのプラスチック表面での核酸の損失を防ぎます。マスターミックスは2–8° Cで最長12ヶ月間保存でき、反応は室温で少なくとも1時間は安定しているため、自動化された手順には便利です。