遺伝子治療 –安全で効果的な治療法の開発
遺伝子治療では、様々な遺伝子疾患を治療したり、可能であれば完治させたりするために、患者の体の細胞に遺伝物質を運びます。
遺伝子治療は、アデノ随伴ウイルス（AAV）やレンチウイルスを用いたウイルス介在性遺伝子導入を用いて行われるのが最も一般的です。AAVベクターはパッケージングサイズが小さい（-5kb）ですが、非集積型ウイルスであるため、導入遺伝子の発現を長時間持続させることができます。ヘルパーウイルスなしでは増殖できないため、臨床で安全に使用できます。
dPCRはまた、汚染管理においても重要となります。汚染管理は、特にバイオ医薬品の製造において、不要物質の最小化と除去を目的とした製造環境において不可欠なプロセスです。dPCRを使えば、低いテンプレートインプット範囲で、より高い感度で検出し、より堅牢な結果を取得できます。
遺伝子治療ワークフロー
遺伝子治療アプリケーション用リソース
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汚染管理
残存する宿主細胞DNA（resDNAまたはHCD）などの汚染物質が製品の安全性や効率性に影響しないように、汚染管理は厳格な手順と基準を必要とします。残存する宿主細胞DNA（HCD）のキャリーオーバーは、タンパク質治療薬やワクチン治療薬を製造する際に、安全性に大きな懸念をもたらします。リスクとして、最終産物に起因する発がん性、感染性、免疫原性などがあります。したがって、HCDのレベルは、米国食品医薬品局や世界保健機関などの規制機関が定めたレベルを超えてはなりません。
さらに、PCR試薬のDNA汚染は、バックグラウンドや偽陽性の重大な原因となる可能性があります。Ultra Clean ProductionはプローブベースのデジタルPCRの特異性と効率性を高め、正確なシングルプレックス、または最大5プレックスの分析を提供します。マスターミックスのUltra Clean Productionを可能にするために専用のプロセスが導入され、これにより汚染DNAのバックグラウンドやGCバイアスが最小限に抑えられ、PCR試薬に絶対的な確実性が得られるので、コンタミネーションフリーの微生物アプリケーションや残留DNA検査のような品質管理アプリケーションに理想的な選択肢となります。
マイコプラズマの検出
マイコプラズマは、バイオ医薬品産業における細胞株由来の生物学的製剤によく含まれる汚染物質です。これらはしばしば、供給元の細胞株から、あるいは生産中に導入されます。製造工程におけるマイコプラズマ汚染のリスクについては、様々なガイドラインや技術論文が言及しています。
デジタルPCRは、細胞培養や関連する生物学的産物中のマイコプラズマ汚染を検出するための効果的な方法です。例えば、QIAcuity Mycoplasma Quant Kitは高感度RT-dPCRキットで、rRNAとDNAを検出し、127種のマイコプラズマに対応しています。キットには、PCR阻害剤やRNA抽出およびRT反応のエラーによる偽陰性を防ぐための内部コントロールが含まれています。
一方、QIAcuity Residual DNA Quantification Kitは、PCR汚染物質やその他の阻害試薬が存在する場合でも、抽出の有無にかかわらず、CHO、大腸菌、HEK293の残留DNA（resDNA）の正確な定量結果を提供します。このアッセイは、高度に断片化された宿主細胞の残存DNAを正確に測定するマルチコピーのターゲットアッセイです。
