QIAGEN OneStep RT-PCR Kit
高感度で特異的な1ステップRT-PCR
Products
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (100)
Cat. No. / ID: 210212
For 100 x 50 µl reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (1 x 200 µl), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 1 ml), dNTP Mix (1 x 200 µl, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (2 x 1.9 ml)
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit (25)
Cat. No. / ID: 210210
For 25 x 50 µl reactions: QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix (1 x 50 µl), 5x QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer (1 x 250 µl), dNTP Mix (1 x 50 µl, 10 mM each), 5x Q-Solution (1 x 400 µl), RNase-Free Water (1 x 1.9 ml)
特徴
- 迅速で簡便な1チューブセットアップ
- どのようなRNAテンプレートでも至適化なしに効率的な1ステップRT-PCRが可能
- ユニークな酵素のブレンドで高い特異性と感度を実現
- 至適化された逆転写バッファーとバランスの取れた酵素ミックス
製品詳細
QIAGEN One-Step RT-PCR Kitには、SensiscriptとOmniscript Reverse Transcriptaseのミックス、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTPミックス、増幅困難なテンプレート（GCリッチなど）の効率的な増幅を実現する画期的な添加剤Q-Solutionが含まれています。簡便な1チューブセットアップと至適化済みの反応試薬により高感度で良好な結果が得られます。
パフォーマンス
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitは、どのようなRNAテンプレートでも高感度で特異的なRT-PCRができるように簡単なフォーマットになっています。本キットには至適化済みの反応試薬が含まれ、"1ステップ"反応で同じ反応ミックスに逆転写とPCR増幅を起こすことができます。ユニークな酵素の組み合わせと特別に開発された反応バッファーにより、効率的で高い特異性を持つ逆転写と1チューブでのPCRが実現し、至適化の必要がありません（図" 微量のテンプレートを使用した特異性の高いRT-PCR"および" ウイルスRNAの効率的な検出"）。本キットに添付の画期的な2価の陽イオンのPCRバッファーでは、広範なアニーリング温度にわたり、特異的PCR産物を高収量で得られます（図" 特異性に対するアニーリング温度の影響"）。不適切なRT-PCRはQ-Solutionにより改善され、このユニークな添加物はGCリッチなテンプレートや複雑な二次構造を持つテンプレートでも逆転写および増幅を容易にします（図" GCリッチなテンプレートのRT-PCR"）。
図参照
原理
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitは、どのようなRNAテンプレートでも簡単で高感度の1ステップRT-PCRができるようにデザインされています。
QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mixは逆転写およびPCRのために特別に配合された酵素ブレンドです。RNAテンプレートに対して高いアフィニティーを有するOmniscriptおよびSensiscript Reverse Transcriptasesとのユニークな組み合わせにより、わずか1 pgから最高2 µgまでのRNA量が高い効率と高感度で確実に転写されます。逆転写後、HotStarTaq DNA Polymeraseの活性化、そして同時に逆転写酵素の不活性化のために反応液を95℃で15分間加熱します。このホットスタートステップは、プライマーダイマーのような非特異的な増幅を排除し、バックグラウンドのスメアを抑制するので、高感度で再現性のあるRT-PCRを確実にします（図" 微量のテンプレートを使用した特異性の高いRT-PCR"および" ウイルスRNAの効率的な検出"）。
様々なアニーリング温度に対応
最適なプライマーのアニーリング温度は塩基成分（A、T、G、Cヌクレオチドの割合）、プライマー濃度、イオン反応環境に依存しています。QIAGEN PCR BufferにはK+およびNH4+イオンの両方が含まれ、広範なアニーリング温度にわたり、特異的PCR産物を高収量で得られます（図" 特異的プライマーアニーリングの促進"）。この特異性は非特異的なプライマー結合の不安定化と、より適応性の高い反応環境によって得られ、それにより時間のかかるアニーリング温度の至適化実験の必要がなくなります。一方、図に示すとおり、K+だけを含むPCRバッファーあるいは1ステップRT-PCRバッファーを用いた場合、最適なPCRアニーリング温度の範囲は狭く、特異性も低くなっています（図" 特異性に対するアニーリング温度の影響"）。
QIAGEN OneStep RT-PCR Bufferは逆転写およびPCR増幅を効率的に行なうために特別に開発されました。逆転写酵素によるPCR増幅の阻害は1ステップRT-PCRによく起きる問題ですが、これを抑制するために新たな添加物が本キットのバッファーに含まれています。さらにこのバッファーは、幅広い温度やMg2+濃度の条件下で特異的なプライマーアニーリングを可能にすることで、どのようなRNAテンプレートからでも適応性が高い効率的なRT-PCRを実現します。QIAGEN OneStep RT-PCR Kitには核酸の融解挙動を改善する画期的な添加剤Q-Solutionが添付されています。Q-Solutionにより、GCリッチなテンプレートや複雑な二次構造を持つテンプレートでも逆転写および増幅が容易になります（図" Q-Solutionを用いたGCリッチなテンプレートのRT-PCR"）。Q-Solutionを使用することによって増幅困難なテンプレートを用いたRT-PCRの至適化を簡便化できます。QIAGEN OneStep RT-PCR Kitには、最も感度の高いアプリケーションにも対応できる、迅速で簡便なRT-PCRに必要な全てが含まれています（表参照）。
| QIAGEN OneStep RT-PCR Kit内容 | 内容 |
|---|---|
| HotStarTaq DNAポリメラーゼ | 特異性の高い増幅産物 |
| SensiscriptおよびOmniscript Reverse Transcriptases | 幅広いRNA量（1 pg～2 µg）を使用 高感度 |
| OneStep RT-PCR Buffer | 必要な至適化は最小限、 逆転写酵素によるPCRの阻害なし、 RNアーゼの抑制 |
| Q-Solution | GCリッチなテンプレートの増幅促進 |
図参照
操作手順
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitにより迅速で簡単なRT-PCRセットアップが可能です。ウイルスの検出、分子診断研究、遺伝子発現解析など、どのようなアプリケーションでも、全ての成分を1本のチューブ中で混和し、サーマルサイクルプログラムをスタートするだけで完了です（フローチャート" OneStep RT-PCR操作手順"）。反応液は逆転写およびPCRに必要な全ての試薬を含んでいるので、反応開始後は何も添加する必要がありません（表参照）。
図参照
アプリケーション
QIAGEN OneStep RT-PCR Kitは次のようなRT-PCRアプリケーションに最適です。
- ウイルス検出
- シングルセルRT-PCR
- 遺伝子発現解析
裏付けデータと数値
OneStep RT-PCR procedure.
The QIAGEN OneStep RT-PCR Kit allows fast and easy RT-PCR setup. Whatever the application — virus detection, molecular diagnostics research, or gene expression analysis— just mix all components together in one tube and start the thermal-cycler program. The reaction mixture contains all of the reagents required for both reverse transcription and PCR; nothing needs to be added once the reaction has been started.
Specifications
| Features | Specifications |
|---|---|
| Applications | Gene-expression analysis, virus detection |
| Mastermix | No |
| Enzyme activity | Reverse transcription, 5' -> 3' exonuclease activity |
| Reaction type | One-step RT-PCR |
| Real-time or endpoint | Endpoint |
| Sample/target type | RNA template |
| Single or multiplex | Single |
| With/without hotstart | With hotstart |
リソース
Supplementary Protocols (6)
パンフレット (3)
キットハンドブック (1)
クイックスタートプロトコール (1)
MSDS (1)
テクニカルインフォメーション (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Brochures & Guides (3)
Kit Handbooks (1)
Technical Information (1)
Quick-Start Protocols (1)
Publications
Up-regulation of cyclooxygenase-2 expression is involved in R(+)-methanandamide-induced apoptotic death of human neuroglioma cells.
Mol Pharmacol; 2004; 66 (6):1643-51 2004 Sep 10 PMID:15361550
Drosophila crinkled, mutations of which disrupt morphogenesis and cause lethality, encodes fly myosin VIIA.
Genetics; 2004; 168 (3):1337-52 2004 Nov PMID:15579689
Instability of the restriction fragment length polymorphism pattern of open reading frame 5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus during sequential pig-to-pig passages.
J Clin Microbiol; 2004; 42 (10):4462-7 2004 Oct PMID:15472294
Expression of growth differentiation factor 9 messenger RNA in porcine growing and preovulatory ovarian follicles.
Biol Reprod; 2004; 71 (4):1290-5 2004 Jun 9 PMID:15189836
Effect of vaccine use in the evolution of Mexican lineage H5N2 avian influenza virus.
J Virol; 2004; 78 (15):8372-81 2004 Aug PMID:15254209
FAQ
Are there specific recommendations for performing RT-PCR on RNA isolated from paraffin-embedded samples?
Do I need to use an RNase inhibitor in my RT reaction?
Is mRNA isolation necessary for sensitive RT-PCR?
Does QIAGEN sell Q-Solution separately?
Do you have a protocol for polyacrylamide gel analysis of oligonucleotides?
Does the 5x OneStep RT-PCR Buffer contain BSA?
Can I shorten the activation time for the HotStarTaq DNA Polymerase?