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Q-Solution Kitは、困難なリアルタイムPCRおよびdPCR反応の条件を最適化するように設計されています。キットの箱には5x Q-Solutionと25 mM MgCll2が含まれており、単独または組み合わせて使用できます。必要に応じて、両方の溶液の濃度を調整できます。
PCR阻害剤の影響を最小限に抑える
Q-Solutionは革新的で汎用性の高いPCR添加剤で、どのQIAcuityマスターミックスでも使用できます。残留アルコール、ヘパリン、フミン酸、またはPCR反応を阻害する可能性があるその他の重要な薬剤などの阻害剤のキャリーオーバーは、Q-Solutionの特殊な特性によって軽減されます(図1)。
プライマー結合親和性を高める
プライマーやプローブの結合が弱いため、PCRのパフォーマンスが悪いと思われる場合は、PCR反応にMgCl2を加えてみてください。
複数のdPCRおよびリアルタイムPCRマスターミックスに適合
困難なPCR条件は、dPCR、エンドポイントPCR、リアルタイムPCR反応のいずれにも存在する可能性があり、 スループット、再現性、感度において、アプリケーションに関わらず、Q-Solution KitはdPCR、エンドポイントPCR、リアルタイムPCR反応を、向上させることができるというデータがあります。
DNAの融解温度を下げることで、Q-Solutionはアデノ随伴ウイルス(AAV)ゲノムに見られるような、GC含有量が高いDNAや複雑な二次構造を持つDNAに起因する困難を克服できる可能性があります。このキットは阻害剤存在下でのPCR効率も改善します。MgCl2の添加はオプションであり、EDTAのようなキレート剤によるPCRの失敗を防ぎます。DNAポリメラーゼの必須補因子として、MgCl2は、プライマーとテンプレート間および二本鎖DNA構造を安定化します。ナノプレートでのdPCR反応の原理については、ここで説明しています。
プロトコールはシンプルで、QIAcuity デジタル PCR システムを使用するどの研究室でも実施できます。ユーザーマニュアルの指示に従い、ユーザーは通常通り反応ミックスを調製し、Quick Start Protocolに記載されているようにQ-SolutionとMgCl2を添加できます。反応液をナノプレートに添加します。特定の反応セットアップに最適な濃度を見つけるため、初めて使用する前にQ-SolutionとMgCl2の濃度を検討することをお勧めします。
Q-Solution Kitは、QIAcuityでのさまざまなdPCR反応だけでなく、エンドポイントPCRやqPCR反応にも非常に適しています。その他のアプリケーション例については、“リソース”セクションのアプリケーションノートをご覧ください。
dPCR Mutation Assay BRAF 476 Humanを用いて野生型BRAF遺伝子座を定量するQIAacuity Probe PCR Kit反応は、反応中に3.5%または5%のエタノールが存在すると阻害されました。これは、1D スキャッタープロットのU字型と、エタノールを含まないコントロール反応と比較する定量で示されました。