PAXgene Tissue RNA/miRNA Kit – Total RNA Purification

PAXgene Tissue Containersで固定と安定化を行なった組織からのmicroRNAとトータルRNAの精製

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PAXgene Tissue RNA/miRNA Kit (50)

Cat. No. / ID:   766134

For 50 RNA preps: PAXgene RNA MinElute Spin Columns, PAXgene Shredder Spin Columns, Processing Tubes, Microcentrifuge Tubes, Carrier RNA, RNase-Free DNase, and RNase-Free Buffers; to be used in conjunction with PAXgene Tissue Containers
研究用途専用。診断用ではありません。いかなる主張または表示も、疾病の診断、予防、治療のための情報を提供することを目的としてはいません。
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特徴

  • 固定化、安定化、精製を統合したシステム
  • miRNA とトータル RNA の効率的な精製
  • 組織からの高品質miRNA精製
  • 組織形態を良好に保存

製品詳細

PAXgene Tissue Containers で固定、保存した組織サンプルは、続いてmiRNA、RNA、DNAを精製することは勿論、パラフィン包埋し、病理学研究にも使用できます。PAXgene Tissue miRNA Kit は、PAXgene Tissue Containersで固定と安定化を行なった組織から、約18ヌクレオチド以上のRNAを含むトータルRNA精製を実現します。精製は、シリカベースのRNA精製テクノロジーを用いてスピンカラムフォーマットで行なわれます。本キットはPAXgene Tissue Containersと併用して組織の採取・固定・安定化から分子解析のための高品質なmiRNAおよびトータルRNA精製までをカバーするプレアナリティカルなトータルソリューションを提供します。

最新の情報はPreAnalytixのウェブサイトよりご確認ください。

パフォーマンス

PAXgene Tissue ContainerとPAXgene Tissue Kitの組み合わせは、組織の採取、固定、安定化から分子解析のための高品質RNA(miRNAを含む)精製まで、プレアナリティカルなトータルソリューションを提供します(図 “PAXgene Tissue Containersで保存した固定組織からの効率的なmiRNA精製”)。

PAXgene Tissue miRNA Kitを用いて精製したトータルRNAは高純度です。ゲノムDNAのコンタミは最小限で、精製RNAはPCR阻害が観察されることなくダウンストリームのアプリケーションにすぐに使用できます。18ヌクレオチド以上のRNA分子はすべて精製されます。

原理

従来の組織学分野で使用されている現在の組織固定法は、分子解析に使用するには限界があります。ホルムアルデヒドを含む固定剤が生体分子にクロスリンクし、核酸およびタンパク質を変性します。組織の固定、保存、および処理中に、核酸の分解がクロスリンクにより生じます。クロスリンクを完全に除去できないために生じる化学的な変化は、定量PCRおよびRT-PCRなどの感度の高いダウンストリームアプリケーションにおいて阻害の原因になります。遺伝子解析と従来の病理学研究を同一検体から行なうためには、分子の安定化および形態保存を実現する方法が必要です。

PreAnalytiXはこのようなニーズにあったPAXgene Tissue Systemを開発しました。本システムは、組織採取用容器(ヒト組織切片の採取、安定化、保存、輸送用PAXgene Tissue Container)と、トータルRNA、DNA、miRNAの精製用キットから構成されています。PAXgene Tissue Containerは、病理組織学のための組織固定化を行ない、また同一サンプルから分子解析用の高品質核酸の精製が可能です。この組織の固定および安定化法により、組織形態は保存され、ホルマリン固定組織で見られるようなクロスリンキングや分解のない核酸が得られます。

miRNAを含むトータルRNA精製のためには、PAXgene Tissue Containers で組織の採取と安定化とPAXgene Tissue miRNA Kitを用いたRNAの分離と精製を含むシステムが必要です。

操作手順

PAXgene Tissue Containersは、2種類の試薬がそれぞれ充填された2つのchamberで構成されています。PAXgene Tissue Fixは迅速に組織に浸透し固定します。固定後にPAXgene Tissue Fixから組織を取り出し、同じ容器の2つ目のchamber に入っているPAXgene Tissue Stabilizerに組織を移します。組織をPAXgene Tissue Stabilizerで保存すると、組織サンプルの核酸と形態は室温で最低3日、最高7日間、2~8℃で最低2週間、最高8週間安定です(組織タイプに依存)。-15~-30°Cで少なくとも26ヶ月間の保存も可能で、組織形態や核酸の品質には悪影響はありません。

安定化したサンプルは、組織研究用にパラフィン包埋ができます。パラフィン包埋の前か後で、PAXgene Tissue で固定し、パラフィン包埋した組織サンプルから核酸を分離できます。

PAXgene Tissue miRNA Kit ではPAXgene Tissue Containersで固定、安定化した組織からのトータルRNA(5.8S rRNA、5S rRNA、tRNAs、miRNAなどの200塩基未満のRNAも含む)精製用に3種類のプロトコールを提供しています。至適化済みの結合条件と洗浄条件により、わずか18ヌクレオチドのRNA分子の精製も可能です。必須条件として、組織は必ずPAXgene Tissue Containersで固定、安定化しなければなりません。

組織サンプルの破砕とホモジナイゼーションは、結合バッファーBuffer TM1中で行ないます。残存している細胞破片を除去するための遠心ステップ終了後、18ヌクレオチド以上のRNA分子をすべて結合する条件を実現するためにライセートにエタノールを添加します。その後サンプルをPAXgene RNA MinElute Spin Columnにアプライすると、トータルRNAはメンブレンに結合し、コンタミは効率的に洗浄除去されます。最初の洗浄ステップ後、メンブレンをDNase Iで処理して微量の結合DNAを除去し、その後2回目の洗浄ステップを行ないます。洗浄ステップ後、miRNAを含むRNAは低塩濃度溶出バッファーで溶出され、加熱により変性します(図 “PAXgene Tissue miRNA 操作”)。

PAXgene Tissue FixおよびPAXgene Tissue Stabilizerの固定および保存条件の詳細は、動物組織を用いて決定しました。

アプリケーション

精製したmiRNAおよびトータルRNAは、以下を含む様々なダウンストリームアプリケーションに最適です:

  • ノーザンブロット解析
  • RT-PCRおよびリアルタイム定量RT-PCR
  • マイクロアレイ解析

裏付けデータと数値

Specifications

FeaturesSpecifications
Time per run70 min + 15 min incubation/8 samples (120 min for fibrous tissues)
ApplicationsNorthern blot analysis, RT-PCR and quantitative, real-time RT-PCR, microarray analysis
Sample amount4 x 15 x 15 mm
Elution volume14–40 µl
ProcessingManual (centrifugation)
Main sample typeHuman tissue
YieldDepends on tissue type and starting material (fixed or PFPE*) * PAXgene Fixed Paraffin Embedded.
TechnologySilica technology
FormatSpin column

リソース

サイエンティフィック・ポスター (12)
パンフレット (3)
Moving toward excellence and standardization in tissue collection and fixation

 

Two worlds in one sample
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
Technical Information and Important Notes (2)
This note is to inform you that the street address for PreAnalytiX GmbH has changed from “Feldbachstrasse” to “Garstligweg 8”. Please be informed that the update of the product labeling to the new address is ongoing.
In order to reduce paper consumption and oblige the growing number of customers requesting an environmentally friendly alternative to traditionally printed handbooks, we are now providing kit handbooks for Research Use Only (RUO) PreAnalytiX kits on our website only.
キットハンドブック (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

Publications

A Novel Approach to High-Quality Postmortem Tissue Procurement: The GTEx Project.
Carithers LJ; Ardlie K; Barcus M; Branton PA; Britton A; Buia SA; Compton CC; DeLuca DS; Peter-Demchok J; Gelfand ET; Guan P; Korzeniewski GE; Lockhart NC; Rabiner CA; Rao AK; Robinson KL; Roche NV; Sawyer SJ; Segrè AV; Shive CE; Smith AM; Sobin LH; Undale AH; Valentino KM; Vaught J; Young TR; Moore HM; GTEx Consortium;
Biopreserv Biobank; 2015; 13 (5):311-9 2015 Oct PMID:26484571
Surgical Specimens of Colorectal Cancer Fixed with PAXgene Tissue System Preserve High-Quality RNA.
Hara K; Watanabe A; Matsumoto S; Matsuda Y; Kuwata T; Kan H; Yamada T; Koizumi M; Shinji S; Yamagishi A; Ishiwata T; Naito Z; Shimada T; Uchida E;
Biopreserv Biobank; 2015; 13 (5):325-34 2015 Oct PMID:26484572
Comprehensive DNA Methylation and Extensive Mutation Analyses of HER2-Positive Breast Cancer.
Yamaguchi T; Mukai H; Yamashita S; Fujii S; Ushijima T;
Oncology; 2015; 88 (6):377-84 2015 Jan 14 PMID:25591616
Next-gen tissue: preservation of molecular and morphological fidelity in prostate tissue.
Gillard M; Tom WR; Antic T; Paner GP; Lingen MW; VanderWeele DJ;
Am J Transl Res; 2015; 7 (7):1227-35 2015 Jul 15 PMID:26328007
Assessment of PAXgene Fixation on Preservation of Morphology and Nucleic Acids in Microdissected Retina Tissue.
Liu Y; Edward DP;
Curr Eye Res; 2016; 42 (1):104-110 2016 Jul 13 PMID:27409982

FAQ

Where can I find additional information for PreAnalytiX PAXgene products?
You can find additional information relating to the PreAnalytiX PAXgene products on the PreAnalytiX website .
FAQ ID - 3515
What can I use to isolate RNA smaller than 200 nucleotides?

For the isolation of microRNA (miRNA) specifically, we have developed the miRNeasy Mini Kit and the miRNeasy 96 Kit for isolation from cells and tissues.   We also have the PAXgene Blood miRNA and Tissue miRNA kits for isolation from blood stored in PAXgene Blood RNA tubes and PAXgene Tissue Containers, respectively.  Other miRNA isolation supplementary protocols can also be found by searching our comprehensive protocols at http://www.qiagen.com/literature/default.aspx?WT.svl=m.

FAQ ID -115
Is a special processing protocol needed?

To prevent biomolecule degradation during processing, dehydration must begin with at least 70–100% ethanol. We recommend using low-melting paraffin (melting point ≤56°C) and do not incubate samples in liquid paraffin for more than 3 hours.

Processing protocols for the PAXgene Tissue System are listed in the appendices of the PAXgene Tissue Container Product Circular and PAXgene Tissue FIX Container (50 ml) Product Circular.
FAQ ID -2523
What is the RT-PCR performance of RNA purified from PAXgene Tissue fixed, paraffin-embedded (PFPE) and PAXgene Tissue fixed, cryo-embedded (PFCE) tissue compared to RNA from snap frozen or formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue?
The PAXgene Tissue fixation and stabilization chemistry is free of cross-linking reagents. RNA purified from PFPE and PFCE is free of chemical modifications and performs similarly or identically to RNA isolated from frozen tissue. For examples of the correlation of gene expression levels in snap frozen tissue, FFPE, and PFPE, see Figure 4 in Groelz et al., Exp Mol Pathol. 2013 Feb; 94(1) and Figure 3 in Viertler et al., J Mol Diagn. 2012 Sep; 14(5).
FAQ ID -2538
What is the purity of nucleic acids extracted with the PAXgene Tissue kits?

The PAXgene Tissue DNA, RNA, and miRNA Kits are based on proven QIAGEN technologies. Nucleic acids isolated with these kits are generally of high purity.

On average, measurements of the A260/A280 ratio for DNA purified with the PAXgene Tissue DNA Kit are >1.7, and ratios for RNA and miRNA purified with the PAXgene Tissue RNA or miRNA Kits are both >1.8.

For examples of RNA purity see Technical Note "Yield, purity, and integrity of RNA purified from PAXgene Tissue fixed, paraffin-embedded (PFPE) rat tissue" under the Product Resources tab.

FAQ ID -2533
Is it possible to microdissect PAXgene Tissue fixed, paraffin-embedded (PFPE) and PAXgene Tissue fixed, cryo-embedded (PFCE) tissues?
Yes. Supplementary protocols for generating sections from PAXgene Tissue fixed, Paraffin-embedded (PFPE) and PAXgene Tissue fixed, cryo-embedded (PFCE) tissue blocks for manual and laser microdissection are available under the Product Resources tab.
FAQ ID -2531