miRCURY LNA miRNA Inhibitors and Power Inhibitors

LNA 強化されたアンチセンスmiRNA インヒビターでmiRNA の機能解析

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miRCURY LNA miRNA Inhibitors (5 nmol)

Cat. No. / ID:  339121

5 nmol miRCURY LNA miRNA Inhibitors with normal phosphodiester nucleotide bonds and option of FAM label, provided in tube format
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Type
Inhibitors
Power Inhibitors
Inhibitor Control
miRCURY LNA miRNA Inhibitors and Power Inhibitorsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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特徴

  • GC 含有量にかかわらず、あらゆるmiRNA に対して比類のない効力を持つTm標準化済み阻害剤
  • Power Inhibotors は、トランスフェクション試薬無し使用可能
  • 優れた特異性と生物学的安定性を保ちながら、長期間のアンチセンス活性を維持
  • 1 nmol、5 nmol および15 nmol が利用可能
  • トランスフェクション効率のモニタリングに便利な蛍光標識も可能

製品詳細

miRCURY LNA miRNA Inhibitors およびPower Inhibitors は非常に強力で、トランスフェクトが困難な細胞株でも、miRNA 機能を喪失させる実験において細胞表現型による評価を可能にします。 miRCURY LNA miRNA Inhibitor Controls およびPower Inhibitor Controls は、Inhibitor と鎖長やLNA デザインが似ていますが、既知のマウス、ラットまたはヒトのmiRNA またはmRNA の配列と相同性はありません。

パフォーマンス

Tm 値が標準化されたmiRCURY LNA miRNA Inhibitors は、GC 含有量に関係なく、すべてのmiRNA に対して比類のない効果があります(Examples of miRNA silencing with miRCURY LNA miRNA Inhibitors 参照)。Power Inhibitor は非常に強力であるため、トランスフェクション試薬を必要とせずに細胞培養に直接添加できます(miRNA silencing via direct uptake (gymnosis) of Power Inhibitors 参照)。さらに、LNA 修飾されたin vivo グレードのmiRNA Inhibitors は、動物モデルにおけるmiRNA 機能の分析を可能にします。

原理

miRCURY LNA miRNA Inhibitors は、ターゲットのmiRNA と相補的な配列を持つアンチセンスオリゴヌクレオチドです。 細胞に導入されると、それらはターゲットのmiRNA と強固に結合して二本鎖を形成し、miRNA 自身が細胞内で相互作用するのを効果的に防止します。

miRNA antisense inhibitors の性能は、それらのmiRNA 標的に対する親和性や生物学的安定性によって決定されます。 通常の阻害剤と従来のヌクレオチドとの親和性は、miRNA 配列のGC 含有量に相関します。 miRNA のGC 含有量は5〜95%の範囲で変化するため、そのような阻害剤の性能はmiRNA の配列によって大きく異なりますが、AT リッチなmiRNA では本質的ではありません。

デザイン

我々は、したmiRCURY LNA miRNA Inhibitors およびmiRCURY LNA miRNA Power Inhibitors のTm 値を様々な配列間でそろえるため、LNA の高い親和性という特長を利用しました。 これらのDNA / LNA 混合配列の最適化には、LNAヌクレオチドの数や位置を変えたり、配列を熟考することで、経験的に決定され、できる限り高いTm 値でオリゴヌクレオチドを標準化しました。(Overall features of the third-generation miRNA inhibitor design 参照)。これら設計の工夫により、miRNA ターゲットのGC 含有量にかかわらず、miRCURY LNA miRNA Inhibitor は優れた効果を発揮できるようになりました。

以下の2種類のmiRNA inhibitors を提供しています。

  • miRCURY LNA miRNA Inhibitors:これらは通常のホスホジエステルヌクレオチド結合の骨格を持ち、ほとんどの標準実験で非常に利用できます。
  • miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors:これらはホスホロチオエート(PS)修飾の骨格を持ち、トランスフェクトが困難な細胞株などの困難なアプリケーションに役立ちます。
トランスフェクション試薬無しでmiRNA のサイレンシング

miRCURY LNA miRNA Power Inhibitor はLNA とホスホロチオエートを組み合わせて修飾することで、生体内の核酸分解酵素によるオリゴヌクレオチドの分解に高い抵抗性を示します。そのためPower Inhibitorの有効性は通常のInhibitorよりもはるかに優れています(Enhanced potency of miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors 参照)。実際、それらは非常に安定で強力であるため、血清含有培地に直接添加することができ、gymnosis と呼ばれる細胞自身が持つ核酸を細胞内に取り込む機能によりトランスフェクション試薬を必要とせずに効率的なmiRNA の機能阻害を行うことができます。 これにより、トランスフェクション試薬による副作用を心配することなく、miRNA サイレンシングの結果を評価ができます。

トランスフェクション試薬なしの細胞内導入には非常に高いインヒビター濃度が必要で、その取り込みの速度は一般にトランスフェクション試薬を使用する場合より遅くなります(miRNA silencing via direct uptake (gymnosis) of Power Inhibitors 参照)。また、培地中からオリゴヌクレオチドを直接取り込む能力は、細胞株によって大きく異なります。

Power Inhibitor は、トランスフェクションが困難な細胞、高度に発現されたmiRNA ターゲット、長期間の実験、および通常のトランスフェクション手順で許容できない表現型の結果が生じる場合など、複雑なアプリケーションに特に役立ちます。

細胞毒性とオフターゲット効果を最小化

miRCURY LNA miRNA Inhibitors およびmiRCURY LNA miRNA Power Inhibitors の高い効力により、それらを低濃度で使用することが可能になります。そして、アンチセンス活性とは無関係の望ましくない二次的効果のリスクを最小限に抑えます。

DNA / RNA 二本鎖は、RNA 鎖を分解するRNase H の基質であり、私たちはGapmeR でこの触媒活性をRNAサイレンシングに使用しています。 私たちのmiRNA 阻害剤がmRNA や相補配列を含む長いノンコーディングRNAを分解しないようにするために、LNA ヌクレオチドが数塩基以上離れていないようにLNA ヌクレオチドを配置しました。 LNAはRNase H 活性を効果的に抑制し、LNA 阻害剤/ RNA 二本鎖がRNase H による基質として認識されないようにします。 最後に、リボソームは強力なヘリカーゼ活性を有し、それはLNA 増強された高親和性の短いオリゴヌクレオチドでさえも効果的に除去することができる。 したがって、我々の阻害剤はまた、オープンリーディングフレーム内に相補的配列を有するmRNA の翻訳に対する影響を最小限にする。

幅広いmiRNA を網羅

デザイン済みのmiRCURY LNA miRNA Inhibitors とmiRCURY LNA miRNA Power Inhibitors は、すべての既知のヒト、マウス、ラットのmiRNA 用に設計されています。 多くのmiRNA は遺伝的に保存されているため、これら阻害剤は、多くの脊椎動物および無脊椎動物のmiRNA を網羅しています。 これらの阻害剤は蛍光標識(6-FAM)しての利用も可能です。 すべてのmiRNA阻害剤は脱塩され、1 nmol、5 nmol および15 nmol の量でチューブ内で乾燥させてお届けします。

ネガティブコントロールも設計済み

現在、miRCURY LNA miRNA Inhibitors 用に2つ、miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors 用に2つの、デザイン済みのネガティブコントロールを4種類ご用意しています。 miRCURY LNAのmiRNA Power Inhibitor コントロールには、miRCURY LNA のmiRNA Power Inhibitor と一致するホスホロチオエート修飾骨格があります。

阻害剤の各カテゴリに対して、次の2つのコントロールを提供しています。

  • ネガティブコントロールA:NCBI およびmiRBase データベースのいずれの生物においても、あらゆる配列と相同性が70%を超えるヒットはありません。
  • 陰性対照B:NCBI およびmiRBase データベースにおいて、任意のヒト、マウスまたはラットの配列に対して>70% の相同性のヒットはない。 植物での使用にはお勧めできません。

操作手順

miRCURY LNA miRNA Inhibitor は脱塩され、チューブ内で乾燥状態で配送されます。 再懸濁後、通常の阻害剤をトランスフェクション試薬またはエレクトロポレーションによって細胞に送達することができます。 あるいは、Power Inhibitor は、体操による補助なしの摂取のために細胞培地に直接添加することができます。 miRNA 阻害剤の表現型への影響は通常、分娩後24〜72時間で評価されます。 細胞分化アッセイなどの一部のアプリケーションでは、表現型の読み取りはトランスフェクションの7〜10日後に行われることがあります。

アプリケーション

miRCURY LNA miRNA 阻害剤は、主にmiRNA 活性を阻害することによる生物学的影響を評価することにより、miRNA 機能喪失試験に使用されます。 これらの効果は、細胞増殖、細胞分化またはアポトーシスをモニターするための細胞アッセイの使用を含む、さまざまな方法で観察することができます。 推定miRNA 標的の遺伝子発現に対する変化もまた、mRNA またはタンパク質レベルで測定することができる。

裏付けデータと数値

リソース

MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
サイエンティフィック・ポスター (1)
Poster for download
キットハンドブック (1)
パンフレット (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)