QIAGEN Plasmid Plus Kits – Plasmid DNA Extraction

最高10 mgまでのトランスフェクショングレードのプラスミドDNAを最も迅速かつ簡便に精製

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QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit (25)

Cat. No. / ID: 12943

25 QIAGEN Plasmid Plus Midi Columns, Extender Tubes, Reagents, Buffers, 25 QIAfilter Midi Cartridges

キット付属品

QIAGEN Plasmid Plus Kit

QIAvac Holder

VacValves

カラムタイプ

Midi

Maxi

Mega

Giga

Trial Kit

調製

100

Inquire

QIAGEN Plasmid Plus Kitsは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

最大24サンプルを迅速に精製
迅速な吸引操作で同時調製可能
少ない溶出量で高濃度DNA
特殊な洗浄バッファーで非常に低いエンドトキシンレベル（<1 EU/µg）

製品詳細

QIAGEN Plasmid Plus Kits は最高10 mgの高純度プラスミドDNAをラージスケールで非常に迅速に精製します。吸引マニホールドを用いて最高24個のサンプルを同時に精製でき、マニュアルでの作業時間を短縮できます。溶出量が少ないので高濃度のプラスミドDNAが得られ、すぐに使用できます。エタノール沈殿は不要です。さらに QIAGEN Plasmid Plus Kits には、洗浄バッファーが含まれており、精製されたプラスミドはエンドトキシンレベルが低いという特長もあります。精製されたプラスミドは様々なアプリケーションに最適で、感受性の高い細胞株にもトランスフェクトできます。

パフォーマンス

安定した品質および性能

QIAGEN Plasmid Plus テクノロジーは、陰イオン交換テクノロジーと同等の性能および純度を実現します。QIAGEN Plasmid Plus columns のユニークな結合ケミストリーにより高純度なプラスミドDNAが安定して精製できます。高収量プロトコールおよびそれに必要な追加のバッファー量もIAGEN Plasmid Plus Kits に入っており、RNA、タンパク質、ゲノムDNAなどの夾雑物を含まない高純度のプラスミドDNAを最高10 mg（Giga）、2 mg（Mega）、1 mg（Maxi）、250 µg（Midi）まで得られます（図 " QIAGEN Plasmid Plus Kits（QPP）は高収量を実現" および " 分析クロマトグラム"）。

エンドトキシンレベルが非常に低いトランスフェクショングレードDNA

リポ多糖類またはLPSとして知られているエンドトキシンは、E. coli などのグラム陰性菌の細胞膜成分であり、プラスミド精製の溶解ステップ中に放出されます。エンドトキシンは非特異的な免疫応答の活性化を誘導するため、トランスフェクション実験のセットアップにおいてコントロールできない変動要素となり、実験結果およびその再現性に影響し、結果の比較および解釈が困難になります。

キットに添付のエンドトキシン洗浄バッファーを利用することにより、バクテリア由来のエンドトキシンレベルを通常1 EU/μg DNA 以下に減らすことができます。エンドトキシンレベルは宿主菌株、培養液、細胞密度により変動します。細胞密度が非常に高い場合には、エンドトキシンレベルが1–3 EU/μg DNA の範囲で多少高くなることがあります。このような特性により、精製したプラスミドDNAは感受性の高い細胞株へのトランスフェクションをはじめとする多くのアプリケーションに最適です（図 " QIAGEN Plasmid Plus Kits を用いた場合のエンドトキシンレベル"、" 様々なプラスミドDNA 調製法を用いた際のエンドトキシンレベル"、" 感受性の高い細胞株への効果的なトランスフェクション"）。

図参照

High yields are ensured with QIAGEN Plasmid Plus Kits (QPP).

Analytical chromatogram.

Endotoxin levels using QIAGEN Plasmid Plus Kits.

Endotoxin levels using different isolation methods.

Efficient transfection in sensitive cell lines.

原理

QIAGEN Plasmid Plus Kitsはラージスケールのプラスミドを簡単に調製するため方法です。QIAGEN Plasmid Plus columnsのデザインおよびユニークな結合ケミストリーにより、結合、洗浄、溶出ステップが簡便に行なえます。この操作によりQIAGEN Plasmid Plus Kits は超高速なラージスケールのプラスミド調製を実現し、MaxiおよびMidi調製にかかる時間は20 分です。得られた高濃度なプラスミドDNAは、続くアプリケーションにすぐに使用できます。エタノール沈殿は不要です。このように、本キットで得られるプラスミドDNAは、微量の反応容量を必要とするアプリケーションに最適です。

LyseBlueを用いて最大のプラスミド収量を実現

バッファーの混和が最適に行なわれているかを簡単に目視で判断できる、オプションの色素指示薬LyseBlueもキットに含まれています。この試薬により、非効率的な溶菌操作およびSDS、ゲノムDNA、細胞残渣の不完全な沈殿を引き起こす一般的な操作ミスを防ぐことができます。このユニークなバッファー添加剤は、溶液の色変化だけで最適な溶菌操作および溶液の中和を確認でき、収量の増大を実現します。

製品仕様
特徴	Plasmid Plus Giga Kit	Plasmid Plus Mega Kit	Plasmid Plus Maxi Kit	Plasmid Plus Midi Kit
Applications	Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing	Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing	Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing	Transfection of most cell lines, cloning, enzymatic restriction, in-vitro translation/transcription, sequencing
Culture volume/starting material	2500 ml culture volume	500 ml culture volume	50–200 ml culture volume	25–50 ml culture volume
Final DNA concentration	≥1 µg/µl	≥1 µg/µl	≥1 µg/µl	≥1 µg/µl
Plasmid type	Plasmids, cosmids	Plasmids, cosmids	Plasmids, cosmids	Plasmids, cosmids
Processing	Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing	Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing	Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing	Manual (centrifugation and vacuum), parallel processing
Samples per run; throughput	1–12 samples per run	1–12 samples per run	1–24 samples per run	1–24 samples per run
Technology	Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction	Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction	Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction	Advanced silica technology (non-chaotrophic), endotoxin reduction
Time per run	50 min	40 min	20 min	20 min
Yield	up to 10 mg	up to 2.5 mg	up to 1 mg	up to 250 µg

操作手順

QIAGEN Plasmid Plus Kits に添付のQIAfilter Cartridges によりライセートを迅速に清澄化できます。1ステップで清澄化ライセートをカラムにアプライできるので時間の節約に繋がります。QIAGEN Plasmid Plus columnにアプライした清澄化ライセートおよび続いて行なう洗浄バッファーの吸引には吸引マニホールド（QIAvac 24 Plus）を使用します。メンブレンの洗浄および乾燥後、遠心操作により高濃度DNAが少量で溶出されます（図 ""）。

図参照

QIAGEN Plasmid Plus procedure.

アプリケーション

QIAGEN Plasmid Plus Kitsは以下のようなアプリケーションに最適なトランスフェクショングレードのプラスミドDNA を調製します。

Huh-7のような感受性の高い細胞株を含むほとんどの細胞株へのトランスフェクション
制限酵素分解
クローニング
In vitro 転写／トランスレーション
シークエンシング

裏付けデータと数値

Efficient transfection in sensitive cell lines.

Plasmid pCMVβ DNA was prepared using the indicated preparation method with standard and high-yield (HY) protocol for QIAGEN Plasmid Plus Kits. Huh-7 cells were transfected using 200 ng plasmid DNA and 0.5 μl Attractene Transfection Reagent or 300 ng plasmid DNA and 0.75 μl Attractene Transfection Reagent.

リソース

Technical Information

Since QIAGEN launched the world’s first kit for purification of plasmid DNA, technologies have been developed to make plasmid DNA preparation even more convenient and reduce endotoxin levels in line with scientists’ needs in the laboratory. A lot of well-known companies have developed kits, and the choice of solutions available has never been greater. We compared popular advanced-technology kits to see their relative performance in speed, convenience of handling, yield and endotoxin levels.

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

FAQ

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction using the QIAamp 96 DNA Blood Kit because:

Viscosity of the lysates varies from sample to sample. Therefore, the wells of the QIAamp 96 plate are at great risk of clogging.
Use of vacuum manifold would result in incomplete removal of ethanol and salts after washing with Buffer AW2. This will affect the purity and yield of samples.

FAQ ID -9158

Please contact Nalgene for ordering. Part numbers from Nalgene:

- 10 liter waste container (Nalgene Heavy Duty Vacuum Carboy [PP], cat. no. 2226-0020)

- 20 liter waste container (Nalgene Heavy Duty Vacuum Carboy [PP], cat. no. 2226-0050)

- Quick filling/venting closure (Nalgene, cat. no. 2158-0021) [lid]

- Vacuum tubing (e.g., Nalgene 180 clear plastic vacuum tubing, cat. no.8000-0065)

FAQ ID -9156

LyseBlue reagent is provided in the following QIAGEN plasmid kits:

QIAGEN Plasmid Kits (Mini-, Midi-, Maxi-, Mega and Giga)
QIAfilter Plasmid Kits (Midi-, Maxi-, Mega and Giga)
HiSpeed Plasmid Kits (Midi- and Maxi)
EndoFree Plasmid Kit (Maxi-, Mega and Giga)
QIAprep Spin Miniprep Kit
QIAGEN Plasmid Plus Kits (Midi, Maxi, Mega and Giga)

FAQ ID -865

Endotoxin level of QIAGEN Plasmid Plus kits is in the range of 1 EU/µg DNA.

The composition of Buffer S3 is confidential. This buffer is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and is an plays and important role in the alkaline lysis procedure. Buffer S3 can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits.

FAQ ID -2788

VacConnectors prevent cross-contamination and are meant to be disposed after single use.

FAQ ID -9152

Yes, the waste bottles of the QIAvac Connecting System can be autoclaved. However, please be aware that the plastic may change in color.

FAQ ID -9153

No, the two buffers cannot be interchanged. The QIAGEN Plasmid Plus chemistry is not compatible with Buffer ER from the Endofree Plasmid kits.

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction of tissues using the DNeasy Blood & Tissue Kit. Viscosity of the lysates varies from sample to sample; therefore, the DNeasy mini spin columns are at great risk of clogging.

FAQ ID -9154

We do not recommend to autoclave the QIAvac 24 Plus manifold. Doing so can result in damage to the device.

FAQ ID -9151

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction with the DNeasy 96 Blood & Tissue Kit because:

Viscosity of the lysates varies from sample to sample. Therefore, the wells of the DNeasy 96 plate are at great risk of clogging.
Use of vacuum manifold would result in incomplete removal of ethanol and salts after washing with Buffer AW2. This will affect the purity and yield of samples.

FAQ ID -9157

QIAvac Multiwell can hold plates that conform to SBS plate standards, whereas the QIAvac 96 does not. Therefore, the waste tray for QIAvac Multiwell is not the same as for our QIAvac 96.

However, the waste tray from QIAvac Multiwell will fit the QIAvac 96, but not vice versa.

FAQ ID -9159

We do not have this part available for replacement. You will need to replace your vacuum manifold. Please contact your Sales representative for a price quote.

FAQ ID -9161

FAQ ID -9160

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction of tissues using the QIAamp Blood & Tissue Kit. Viscosity of the lysates varies from sample to sample; therefore, the DNeasy mini spin columns are at great risk of clogging.

FAQ ID -9155

The composition of Buffer BB is confidential. Buffer BB is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and functions as a binding buffer, adjusting the correct binding conditions after alkaline lysis, when performing the QIAGEN Plasmid Plus procedure. Buffer BB can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits and is not available separately.

FAQ ID -2790

The composition of Buffer ETR is confidential. Buffer ETR is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and functions as an endotoxin removal buffer. Buffer ETR can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits.

FAQ ID -2789

The filter for QIAvac Connecting System is from Pall (part no. 4400). This is the Acro 50 filter, 0.2 µm PTFE, 1/8 inch MNPT connection. Please visit www.pall.com.

FAQ ID -9150