QuantiNova RT-PCR Kits

• 室温でのセットアップ用の独自の二相ホットスタート手順
• 視覚的なピペッティングコントロールにより、ピペッティングエラーが減少
• RT-PCRの成功をインプロセスで確実に検証するための内部コントロール
• テンプレートの数対数範囲にわたって正確な定量
• １本のチューブで最大5つの標的を高感度検出

QuantiNova RT-PCR Kits（real-time RT-PCRキット）は、SYBR Green Iまたは配列特異的プローブを使用するリアルタイム1ステップPCRによって、RNA標的の高感度定量を可能にします。統合されたさまざまな安全機能の組み合わせにより、バラツキを取り除き、アーチファクトを防ぐため、信頼性の高い遺伝子発現プロファイリングが保証されます。すぐに使えるマスターミックスに独自の二相ホットスタートとPCRバッファーシステムを組み合わせることで、室温でのセットアップが可能になり、あらゆるリアルタイムサイクラーで高感度qRT-PCRが保証されます。オプションのQuantiNova Internal Control RNAを使用して、逆転写と増幅が成功したかどうかテストできます。これは、装置やケミストリーの不具合、アッセイセットアップのエラー、阻害物質の存在を報告することを目的としています。さらに、視覚的ピペッティングコントロールを使用して、正しいピペッティングをモニターすることができます。QuantiNova Probe RT-PCR手順に組み込まれたgDNA削減ステップは、ゲノムDNAのキャリーオーバーに起因する転写産物の過剰定量を防ぎます。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kitは、マルチプレックスreal-time RT-PCRによって、1本のチューブで最大5つのRNA標的を迅速かつ確実に定量できます。当社のQ-Bondテクノロジーと最適化されたマスターミックスにより、1時間以内に超高速マルチプレックスreal-time RT-PCRを実現します。独自の二相ホットスタート手順と当社のマルチプレックスPCRバッファーシステムを組み合わせることで、最適化を必要とせず、あらゆるリアルタイムサイクラーで高感度qRT-PCRが保証され、室温での自動反応セットアップが可能です。また、このキットは、抽出したRNAと、培養細胞から、シングルセルまでも、直接増幅するためのプロトコールも提供しています。オプションのQuantiNova Internal Control RNAを使用して、逆転写と増幅の成功をモニターできます。また、視覚的ピペッティングコントロールを使用して、正しいピペッティングをモニターすることができます。

正確な反応セットアップ用の内蔵視覚的インディケーター

QuantiNova RT-PCR Kitsに付属のマスターミックスには、real-time PCRを阻害しませんが、チューブやウェル内の視認性を高める不活性な青色色素が含まれています。QuantiNova Yellow Template Dilution Bufferには、不活性黄色色素が含まれています。テンプレート核酸をQuantiNova Yellow Template Dilution Bufferで希釈し、マスターミックスに添加すると、溶液の色が青色から緑色に変化し（図“ 内蔵ピペッティングコントロールによって示される正確な反応セットアップ”参照）、各反応が正しくセットアップされたことを視覚的に示します。

QuantiNova SYBR GreenおよびQuantiNova Probe RT-PCR Kits

QuantiNova SYBR GreenおよびQuantiNova Probe RT-PCR Kitsは二相ホットスタート手順を使用しています（図“ 新しいQuantiNova二相ホットスタートメカニズムの原理”参照）。これには、50°C（SYBR Greenとマルチプレックスキット）または45°C（プローブキット）でのHotStaRT-Script逆転写酵素と95°CでのPCRポリメラーゼ両方の熱媒介活性化が含まれます。低温では、HotStaRT-ScriptがRT-Blocker分子と複合体を形成し、不活性化につながります。50°C（SYBR Greenとマルチプレックスキット）または45°C（プローブキット）では、この複合体は解離し、活性のあるHotStaRT-Script酵素が放出されます。QuantiNova DNA Polymeraseは、QuantiNova Antibodyと新しい添加剤であるQuantiNova Guardによって不活性状態に保たれ、複合体を安定化させます。これにより、ホットスタート手順の厳密性が改善され、非特異的にアニーリングされたプライマーやプライマー–ダイマーの伸長を防ぐことができます。温度を95°Cまで上げると、2分以内（SYBR Greenとマルチプレックスキット）または5分以内（プローブキット）に、QuantiNova AntibodyとQuantiNova Guardが変性し、QuantiNova DNA Polymeraseが活性化され、PCR増幅が可能になります。この独自の二相ホットスタートにより、反応セットアップは室温で少なくとも2時間にわたり安定した状態を保ち、（図“ 性能を損なうことのない便利な室温での反応セットアップ”参照）、アーチファクトの発生を防ぐとともに、自動反応セットアップも容易になります。

QuantiNova DNA PolymeraseとRT-PCRバッファーの独自の組成は、低コピーRNA標的の高感度定量と、一般的なサイクラーでの広い直線範囲にわたる正確な定量を提供します（図“ 非常に高いまたは非常に低いインプット量での正確な定量”参照）。

QuantiNova Probe RT-PCR手順のgDNA削減ステップは、ゲノムDNAのキャリーオーバーに起因する誤定量を最小限に抑えます。ゲノムDNAの削減は正確な遺伝子発現結果を得るために非常に重要であり、RNA特異的プライマーやプローブを設計する必要がなくなります。統合されたgDNA削減（図“ gDNA削減を使用した遺伝子発現結果の信頼性の向上”参照）により、RNAサンプルの精製中または精製後に、別途DNase消化を行う必要がないため、時間が節約され、コストが削減されます。

新しく開発された内部コントロールは、サンプルに加えるだけでcDNAに転写できる定義済みの転写産物（RNA分子）です。これは、装置やケミストリーの不具合、アッセイセットアップのエラー、阻害物質の存在を報告することを目的としています。内部コントロールは実際の転写産物と同じ挙動を示すため（図“ RT-PCR阻害の信頼性の高いモニタリング”参照）、逆転写と増幅の成功を確認するために使用できます。デュプレックス機能により、内部コントロールまたは参照遺伝子を組み込んで、標的遺伝子と直接比較することもできます。

QuantiNova DNA PolymeraseとRT-PCRバッファーの独自の組成により、低コピーRNA標的を高感度で定量し、一般的なサイクラーで広い直線範囲にわたって正確に定量できます。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kits

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kitに付属の特別なマスターミックスは、マルチプレックス反応のセットアップを容易にし、シングルプレックスRT-PCRと同等の結果を保証します。高濃度の4xマスターミックスは、最大800 ngのテンプレートインプットに対応し、最大5プレックス反応でも卓越した感度をもたらします。

このキットはテンプレート量のわずかな違いを明確に区別することができ、存在量が大きく異なる標的を正確に定量します（図“ 存在量が異なる標的の高感度マルチプレックス検出”参照）。さらに、培養細胞から直接増幅するためのシンプルなプロトコールが提供されており、シングルセルからでもRNA分析が可能です（図“ シングルセルのマルチプレックス遺伝子発現分析”参照）。独自の二相ホットスタート手順（図“ 新しいQuantiNova二相ホットスタートメカニズムの原理”参照）により、卓越した特異性が保証され、室温での反応セットアップが可能であるため、自動化手順にも便利です。特別に開発されたPCRバッファーには添加剤Q-Bondが含まれており、アニーリングと伸長時間を大幅に短縮するので、マルチプレックスqRT-PCRが約1時間で可能です。視覚的ピペッティングコントロールを追加したことにより、ヒューマンエラーが最小限に抑えられ、インプロセス安全性が向上します（図“ 内蔵ピペッティングコントロールによって示される正確な反応セットアップ”参照）。オプションのInternal Control RNAは、標的と同時に検出することができ、阻害物質やその他の要因に起因するバラツキを除去し、精度と再現性のモニターを可能にします。全体として、当社の超高速のインプロセスコントロールしたマルチプレックスqRT-PCRワークフローは、限られたサンプル材料からより多くの洞察を得ることで効率を高めます。

QuantiNova RT-PCR Kitsには、蛍光色素SYBR Green Iまたは配列特異的プローブを使用してRNA標的を高い特異性と感度でリアルタイム定量するための、最適化されたすぐに使えるマスターミックスが含まれています。QuantiNova Probe RT-PCR Kitは、加水分解プローブ（たとえば、TaqManやその他の二重標識プローブ）やScorpionsプライマーなど、さまざまなタイプの配列特異的プローブと使用できるように設計されています。キットには、K⁺イオンとNH₄⁺イオンのバランスのとれた組み合わせを含む独自のPCRバッファーが付属しており、特異的プライマーのアニーリングを促進し、高い特異性と感度を可能にします。さらに、HotStaRT-Scriptは広範囲のRNAテンプレート量からのcDNA合成を可能にし、QuantiNova DNA Polymeraseは厳密なホットスタート手順を提供し、非特異的産物の形成を防ぎます。独自の二相ホットスタート手順によって、反応セットアップを室温で最大2時間、安定に保つことができ、自動反応セットアップをサポートします。

内蔵の視覚的コントロールにより、テンプレートが反応に加えられているかどうか確認できるため、反応セットアップ中のピペッティングエラーを防ぐことができます。

cDNA合成のバラツキを検出することで、結果の再現性を確認できます。新しく開発された内部コントロールは、オプションでサンプルに追加し、cDNAに転写することができる定義済みの転写産物（RNA分子）です。これは、装置やケミストリーの不具合、アッセイセットアップのエラー、阻害物質の存在を報告することを目的としています。

real-time RT-PCR遺伝子発現アッセイで正確な結果を得るには、cDNAのみを増幅し、検出することが重要です。QuantiNova Probe RT-PCR手順のgDNA削減ステップを使用すると、ゲノムDNAによる干渉を防ぐことができます（図“ gDNA削減を使用する遺伝子発現結果の信頼性向上”参照）。RNAサンプル精製中や精製後に別途DNase消化を行う必要がないため、時間の節約とコストの削減になります。また、RNA特異的プライマーやプローブを設計する必要もありません。
QuantiNova Multiplex RT-PCR Kitは、標準サイクラーと高速サイクラーの両方で、最適化することなく、幅広いダイナミックレンジにわたって高感度で迅速な結果を提供します。特別に開発されたPCRバッファーには添加剤Q-Bondが含まれており、アニーリングと伸長時間を大幅に短縮します。リファレンス遺伝子と標的遺伝子を同じ反応で増幅すると、ウェル間のバラツキや取り扱いエラーが最小限に抑えられ、信頼性が向上します。さらに、Internal Control RNAが提供され、同時に検出して、逆転写とqPCRの成功をモニターすることができます。

QuantiNova SYBR GreenおよびProbe RT-PCR Kitsは、面倒で時間がかかる可能性がある反応条件の最適化を必要としません。すぐに使えるRT-PCRまたはマスターミックスに、プライマー、RNAテンプレート、RTミックスを加えて反応を開始させるだけです。QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit HandbookまたはQuantiNova Probe RT-PCR Handbookのプロトコールに従って、あらゆるリアルタイムサイクラーで迅速に信頼性の高い結果が得られます。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kitにはすぐに使える4xマスターミックスが含まれており、反応条件やサイクリング条件を最適化する必要がありません。RTミックス、最大800 ngのテンプレートRNA、プライマー・プローブセットをマスターミックスに加え、ハンドブックのプロトコールに従うだけで、あらゆるリアルタイムサイクラーで迅速に信頼性の高い結果が得られます。ROXリファレンス色素も別のチューブで提供されるので、特定の装置に合わせて濃度を調整することができます。このキットには、培養細胞から直接増幅するためのシンプルで迅速なプロトコールも用意されています。推奨インプット量は、たとえば、連続希釈やQIAscout装置を用いて分離した2000細胞からシングルセルまでの範囲です。QuantiNova Internal Control RNA (QN IC RNA)は、逆転写と増幅が正常に行われたかどうかをテストするためにオプションで使用できる内部増幅コントロールです。QuantiNova IC Probe Assayを使用する場合、200 bpの内部コントロールとしてRotor-Gene Qの黄色チャンネルで、または他のreal-time PCR装置のVIC/HEX色素チャンネルで検出されます。また、QuantiNova IC Probe Assay Red 650を使用する場合は、Rotor-Gene Qの赤色チャンネルで、または他のreal-time PCR装置のCy5色素チャンネルで検出することもできます。

効率的なワークフローにするには、QuantiNova Kitsを当社の設計済みのQuantiNova real-time PCRアッセイやパネルと組み合わせることをお勧めします。これは、存在量に関係なく、mRNAや長鎖ノンコーディングRNA転写産物を正確に定量します。幅広い設計済みのヒト、マウス、ラットのプライマーセットから選択するか、当社の高度な設計ツールを使用してご自身のアッセイやパネルをカスタマイズすることができます。
 
当社のQuantiNova LNA PCRおよびQuantiNova LNA Probe PCR Assaysは、LNAテクノロジーを利用して感度を向上させ、偏りのない遺伝子発現プロファイルとより迅速な科学的洞察を可能にします。

SYBR Greenベースの検出には、当社のGeneGlobeプラットフォームから、QuantiNova IC SYBR Green Assay（HS_QIC_2467742 QuantiNova LNA PCR Reference Assayという名前で入手可能、GeneGlobe ID: SBH1218551）を注文してください。

注：QuantiNova IC SYBR Green Assayは、以前は、IC RNAのSYBRベースの検出用QuantiTect Primer Assay（カタログ番号QT02589307）として提供されていました。

QuantiNova SYBR GreenおよびProbe RT-PCR Kitsは、あらゆるリアルタイムサイクラーで、RNA標的の遺伝子発現分析に使用できます。これには、Rotor-Gene QやApplied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche、Agilentの装置が含まれます。

QuantiNova Multiplex RT-PCR Kitは、あらゆるリアルタイムサイクラーで、RNA標的のマルチプレックス遺伝子発現分析に使用できます。マルチプレックスの利点を最大限に活用するには、Rotor-Gene Qのような最大5プレックスキャパシティを提供する装置をお勧めします。