Taq PCR Master Mix Kit

簡便な PCR セットアップ用マスターミックス

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Taq PCR Master Mix Kit (1000 U)

Cat. No. / ID: 201445

12 x 1.7 ml Taq PCR Master Mix containing 1000 units Taq DNA Polymerase, 12 x 1.7 ml Distilled water

Quantity

1000 U

250 U

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Taq PCR Master Mix Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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特徴

PCR条件の至適化が最小限で済むQIAGEN PCR Buffer
マスターミックスで容易な反応セットアップ
より少ないピペッティングステップでコンタミリスクを低減

製品詳細

Taq PCR Master Mix Kit には、Taq DNA Polymerase、至適化を最小限にするための画期的なQIAGEN PCR Buffer、およびdNTP が含まれています。簡便な2xマスターミックスによりピペッティングステップが減少し、スループット数と再現性が増大し、コンタミリスクは低減します。

パフォーマンス

Taq PCR Master Mix Kitは、他メーカーの試験されたキットに比べて優れており、時間のかかる至適化を必要とせずに、信頼性のあるPCR性能を確実に示します（図""）。 Taq DNA Polymerase は、異なるプライマー/テンプレートシステムによる特異性の高い増幅を確実にします（図"" と ""）。QIAGENのTaqDNA Polymeraseは、全てのロットで、低コピー数のヒトゲノムDNAをターゲットとした増幅実験により、PCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲な品質管理テストを受けています（図 ""）。ユニークなPCRバッファーがマスターミックスに含まれているため、異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります（図 ""および" "）。

Taq DNA Polymeraseの詳細データ

濃縮：5 units/µl
組み換え酵素:はい
基質類似体： dNTP、ddNTP、dUTP、ビオチン-11-dUTP、DIG-11-dUTP、蛍光-dNTP/ddNTP
エクステンション率72℃ で2～4 kb/分
半減期：97℃で10分、94℃で60分
増幅効率：≥10⁵ 倍
5'->3' エキソヌクレアーゼ活性：あり
余分なA付加：あり
3'->5' エキソヌクレアーゼ活性：なし
混入しているヌクレアーゼ：なし
混入しているRNase：なし
混入しているプロテアーゼ：なし
自己プライミング活性:なし

図参照

Reproducible PCR.

Tolerance of different primer Tm values.

Specific amplification of long PCR products.

Lot-to-lot reproducibility.

Tolerance to variable magnesium concentration.

原理

TaqPCR Master Mix Kitには、QIAGENのTaq DNA Polymerase が、事前に混合された形で含まれています。この溶液は、QIAGEN PCR Buffer、MgCl₂、および超高純度のdNTPを最適な濃度で含んでいるため、即使用することができます。PCRをセットアップするのに、プライマーとテンプレートDNAを加えるだけです。簡便なマスターミックスフォーマットにより、ピペットの誤操作が最小限に抑えられて、再現性の高いPCR結果が確実に得られます（図" 再現性のあるPCR"）。Taq PCR Master Mix は最長2カ月間、2～8℃で保存することもでき、使用する場合は解凍する必要がないのでPCR セットアップがより速く行なえます。

TaqDNA Polymerase

Taq DNA Polymerase は、スタンダードなPCRから特殊なPCRまで適応できる高品質の組み換え酵素です（図 " T_m 値の異なるプライマーへの適応性" と" 長いPCR産物の特異的増幅"）。

QIAGEN PCR Buffer

革新的なQIAGEN PCR Bufferは、PCR至適化の操作を軽減することにより、時間と労力を節約するために開発されました。QIAGEN PCR Bufferは、KCl も (NH₄)₂SO₄ も含んでいます（図" プライマーのアニーリングにおける特異性が増加"）。このユニークなバッファーによって、特異的PCRの産物を増幅しやすくなります。PCR サイクルごとのアニーリングの間、非特異的なプライマー結合に対する特異的な結合の比率が、バッファーによって高く保たれます。このPCRバッファーは、KClと (NH₄)₂SO₄ のユニークな配合比により、従来のPCR バッファーに比べ幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密なプライマーアニーリング条件を実現します。異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺濃度を用いて行なうPCRの至適化は、劇的に緩和され、多くの場合、不要となります（図 " 幅広い至適アニーリング温度"および" 異なったマグネシウム濃度への適応 "）。

図参照

Reproducible PCR.

Tolerance of different primer Tm values.

Specific amplification of long PCR products.

Increased specificity of primer annealing.

Tolerance to variable magnesium concentration.

操作手順

TaqPCR Master Mixは、Taq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl₂、および超高純度のdNTPを最適な濃度で含んでいます。即使用可能な2xマスターミックスは、ピペットの誤操作を最小限に抑えるとともに、利便性を高めます。PCRのセットアップは迅速、容易、かつ単純ですが、プライマーとテンプレートDNAを加えるだけです。理解しやすいプロトコールがキットに付属しているため、特異的な増幅とPCRが、最初の試みから確実に成功します。

アプリケーション

TaqPCR Master Mix Kitは、以下のようなスタンダードな用途にも特殊な用途にも使用できます。

スタンダードな PCR
RT-PCR
スクリーニング
PCRによるDNAフィンガープリンティング（VNTR、STR、RAPD）

裏付けデータと数値

Reproducible PCR.

A fragment of the hepatitis B surface antigen gene (gene S) was amplified from 10, 20, and 50 copies of target template, using the Taq PCR Master Mix Kit. Five parallel amplifications were performed for each amount of starting template DNA. Equal volumes of the PCR products were analyzed on a 2% agarose gel. C: negative control; M: markers.

Specifications

Features	Specifications
Applications	PCR, RT-PCR, DNA fingerprinting
dNTP's included	Yes (in Master Mix)
Mastermix	Yes
Reaction type	PCR amplification
Enzyme activity	5' -> 3' exonuclease activity
Real-time or endpoint	Endpoint
Sample/target type	Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex	Single
With/without hotstart	Without hotstart

リソース

Second edition — innovative tools

PCR 実験における重要項目と新技術

Addressing critical factors and new solutions

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

For standard and specialized PCR applications with minimal optimization

Second edition — innovative tools

Addressing critical factors and new solutions

PCR 実験における重要項目と新技術

For standard and specialized PCR applications with minimal optimization

Publications

Isolation and identification of Rickettsia massiliae from Rhipicephalus sanguineus ticks collected in Arizona.

Eremeeva ME; Bosserman EA; Demma LJ; Zambrano ML; Blau DM; Dasch GA;

Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (8):5569-77 2006 Aug PMID:16885311

Population dynamics within a microbial consortium during growth on diesel fuel in saline environments.

Kleinsteuber S; Riis V; Fetzer I; Harms H; Müller S;

Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (5):3531-42 2006 May PMID:16672500

PCR-based tandem epitope tagging system for Escherichia coli genome engineering.

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Biotechniques; 2006; 40 (1):67-72 2006 Jan PMID:16454042

Genetic analysis of RpL38 and RpL5, two minute genes located in the centric heterochromatin of chromosome 2 of Drosophila melanogaster.

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Cyclin C/cdk3 promotes Rb-dependent G0 exit.

Ren S; Rollins BJ;

Cell; 2004; 117 (2):239-51 2004 Apr 16 PMID:15084261

FAQ

Both the quality and quantity of nucleic acid starting template affect PCR, in particular the sensitivity and efficiency of amplification. PCR sensitivity and efficiency can be reduced by the presence of impurities in nucleic acid preparations or in biological samples. These PCR inhibitors are completely removed when template is prepared using QIAGEN Kits for nucleic acid purification. Please refer to the Brochure "Maximizing PCR and RT-PCR success" for additional information.

The optimal primer–template ratio has to be determined empirically. If too little template is used, primers may not be able to find their complementary sequences. Too much template may lead to an increase in mispriming events. Generally, no more than 1 ug of template DNA should be used per PCR reaction. As an initial guide, spectrophotometric and molar conversion values for different nucleic acid templates are listed below.

Spectrophotometric conversions for nucleic acid templates

1 A₂₆₀ unit*	Concentration (ug/ml)
Double-stranded DNA	50
Single-stranded DNA	33
Single-stranded RNA	40

*Absorbance at 260 nm = 1

Molar conversions for nucleic acid templates

Nucleic Acid	Size	pmol/ug	Molecules/ug
1 kb DNA	1000 bp	1.52	9.1 x 10¹¹
pUC 19 DNA	2686 bp	0.57	3.4 x 10¹¹
pTZ18R DNA	2870 bp	0.54	3.2 x 10¹¹
pBluescript II DNA	2961 bp	0.52	3.1 x 10¹¹
Lambda DNA	48,502 bp	0.03	1.8 x 10¹⁰
Average mRNA	1930 nt	1.67	1.0 x 10¹²
Genomic DNA
Escherichia coli	4.7 x 10⁶*	3.0 x 10^-4	1.8 x 10⁸**
Drosophila melanogaster	1.4 x 10⁸*	1.1 x 10^-5	6.6 x 10⁵**
Mus musculus (mouse)	2.7 x 10⁹*	5.7 x 10^-7	3.4 x 10⁵**
Homo sapiens (human)	3.3 x 10⁹*	4.7 x 10^-7	2.8 x 10⁵**

* Base pairs per haploid genome

** For single-copy genes

FAQ ID -74

PCR products that will be cloned using the QIAGEN PCR Cloning Kit should be generated using a thermostable DNA Polymerase without proofreading activity, such as Taq DNA Polymerase. Such polymerases attach a single A overhang to their reaction products, which can hybridize to the U overhang of the pDrive Cloning Vector. For efficient addition of an A overhang during the PCR procedure, we recommend a final extension step for 10 min at 72°C as described in the standard protocols of the Taq PCR- and HotStarTaq PCR handbook.

FAQ ID -165

Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Polyacrylamide_gel_analysis_of_oligonucleotides' (PCR03).

FAQ ID -961

The QIAGEN 10x Taq and HotStarTaq DNA Polymerase PCR buffer contains a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4. It provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers.

FAQ ID -566

CoralLoad gel tracking dye contained in Taq, HotStarTaq, TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits separates into 2 fragment-size dependent colors (orange and red) when loaded onto an agarose gel. Sigma Red buffer only has one color which is harder to visualize.

FAQ ID -1644

Yes. Please see Table 3 in our brochure Maximizing PCR and RT-PCR success. We tested the effects of different inhibitory substances in a number of PCR systems. We also analyzed the effect of including different volumes of reverse transcription (RT) reaction mixtures in PCR. Please see the table below for a list of commonly encountered template impurities and their inhibitory effects on PCR.

Impurities showing inhibitory effects on PCR

Substance	Inhibitory concentration
SDS	>0.005% (w/v)
Phenol	>0.2% (v/v)
Ethanol	>1% (v/v)
Isopropanol	>1% (v/v)
Sodium Acetate	≥5 mM
Sodium Chloride	≥25 nM
EDTA	≥0.5 mM
Hemoglobin	≥1 mg/ml
Heparin	≥0.15 i.U./ml
Urea	>20 mM
RT reaction mixture	≥15%

FAQ ID -818

Taq DNA Polymerase and HotStarTaq DNA Polymerase are compatible with cycle sequencing. However, our buffer system is not optimized for this purpose. Optimization of reaction conditions is therefore required when using these Polymerases for cycle sequencing. Unfortunately, we do not have any protocols for this application. An initial activation of the enzyme is necessary if HotStarTaq DNA Polymerase is used.

FAQ ID -741

To determine the optimal annealing temperature for a PCR assay, a Temperature Gradient experiment should be performed. To do this, you will set up several PCR reactions in duplicate for the same primer/template combination, using the same PCR chemistry, and subject each of the reactions to a slightly different annealing temperature within a specified range. If a thermal cycler with a temperature gradient function can be used, you can simply program a temperature range for adjacent wells in the cycling block. If no cycler with a gradient function exists in your lab, you will either have to perform duplicate reactions at different temperatures in different machines (if available), or back to back in the same machine.

FAQ ID -288