HotStarTaq Plus DNA Polymerase

すべてのアプリケーションで迅速かつ特異的な増幅

この製品は2023年11月30日までに販売終了となります。

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HotStarTaq Plus DNA Polymerase (1000)

Cat. No. / ID: 203605

1000 units HotStarTaq Plus DNA Polymerase, 10x PCR Buffer, 10x CoralLoad PCR Buffer, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl₂

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HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

この製品は2023年11月30日までに販売終了となります。

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特徴

最小限の至適化で高いPCR特異性
わずか5分で迅速に酵素活性化
直接ゲルにロード可能なPCR バッファーでより迅速かつ容易な操作

製品詳細

このPolymeraseはHotStarTaq DNA Polymeraseの持つ特異性、感度、最小限の至適化と、5分の迅速な活性化時間を組み合わせています。PCRセットアップは室温で行なうことができ、2種類のマーカー色素が入った画期的なCoralLoad PCR Bufferにより、反応液を直接アガロースゲルにロードできます。スタンダードのQIAGEN PCR Bufferも入っているので簡便な操作を実現します。さらに増幅困難なテンプレート（例；GCリッチ）用に画期的なQ-Solutionも入っています。ユニークなキット構成品ならびに至適化済みのプロトコールによりPCR操作が能率的になりました。

パフォーマンス

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは全てのロットで、低コピー数のターゲットを増幅する実験によりPCR特異性の厳密さや再現性をチェックするなど、広範囲の品質管理テストを受けています。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは他社のキットに比べて高性能で、特異性と感度の高いホットスタートPCRを実現します (図“”、“”、および表)。キットに付属の画期的なPCRバッファーは、様々なPCR条件において特異性を実現し、至適化を最小限に抑えます。また、キットに付属のQ - Solutionにより、不適切なPCR条件を改善することができます(図 “”）。これらの成分により様々なアプリケーションで特異的な増幅を実現します(図 “”および “”）。

ホットスタート法の比較
	HotStarTaq Plus DNA Polymerase	HotStarTaq DNA Polymerase	ホットスタート酵素A_II社	R社	I社（抗体利用）	マニュアル	ワックスバリア
特異的な増幅	++	++	+	++	+	+/–	+/–
最小限のPCR至適化	++	++	+/–	+/–	+/–	–	–
取り扱いの簡便さ	++	++	++	+	+	–	–
活性化のスピード	++	+	++	++	++	–	–

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseｓ詳細データ

濃度：5 units/µl
組み換え酵素：Yes
基質アナログ：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、 fluorescent-dNTP/ddNTP
エクステンション速度：72℃ で2～4 kb/min　
半減期：97℃で10分、94℃で60分　
増幅効率：≥10⁵ 倍
5'–>3' エキソヌクレアーゼ活性：Yes
余分なA付加：Yes
3'–>5' エキソヌクレアーゼ活性：No
ヌクレアーゼの混入：No
RNasesの混入：No
プロテアーゼの混入：No
自己プライマー活性：なし

図参照

Highest specificity.

Higher specificity with different primer–template systems.

Amplification of difficult templates.

Effect of hot start on RT-PCR performance.

Highly sensitive single-cell PCR.

原理

HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、わずか5分間の迅速な活性化時間で、従来のHotStarTaq DNA Polymeraseの優れた性能を保持しています。

QIAGEN Taq DNA Polymerase を改良したHotStarTaq Plus Plus DNA Polymerase は、常温では不活性状態でポリメラーゼ活性はありません。この特性により、PCR セットアップや最初のPCR サイクル中の低温での非特異的なプライマーのアニーリングやプライマーダイマーの形成を回避できます（図“ 最高の特異性”および“ 異なるプライマー／テンプレートシステムにおける高特異性”）。HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは、95℃、5 分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer は、各PCRサイクルでアニーリングステップ中にプライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めることにより、各PCRサイクルの特異的な増幅を維持します（図“ プライマーのアニーリングにおける特異性が増加”）。このバッファーはユニークな配合比のKClと (NH₄)₂SO₄を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広いアニーリング温度やMg²⁺濃度の範囲で厳密で特異的なプライマー・アニーリングを実現します。従って、異なるアニーリング温度あるいはMg²⁺ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに付属のCoralLoad PCR BufferはQIAGEN PCR Bufferの特長をすべて備え、さらにPCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。ゲルローディング用バッファーを前もって添加する必要がありません。CoralLoad PCR Bufferは従来のQIAGEN PCR Bufferと同様の高いPCR特異性をもち、反応の至適化は最小限に抑えられます。さらに、これに入っている2種類のマーカー色素（オレンジ色の色素と赤色の色素）により、DNAの移動距離の予測とアガロースゲルの泳動時間の至適化を容易に行なえます（図“ CoralLoad PCR Buffer”）。本バッファーはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。

Q-Solution

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに添付されている画期的なPCR添加剤であるQ-Solution は、DNA の変性環境を改善し、増幅困難なテンプレートの増幅を可能にします。このユニークな試薬により、高度な二次構造をもつテンプレートやGC リッチなテンプレートなどにより生じる不適切なPCR 条件が改善されることがあります（図“ 増幅困難なテンプレートの増幅”）。DMSOのような汎用されているPCR添加物と異なり、Q-Solutionは一定の濃度で作用し、毒性もなく、PCR純度は保証されています。Q-Solution の添加により、PCR の信頼性は損なわれません。

図参照

Highest specificity.

Higher specificity with different primer–template systems.

Increased specificity of primer annealing.

CoralLoad PCR Buffer.

Amplification of difficult templates.

操作手順

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseに付属の至適化済みのプロトコールにより、PCRセットアップを迅速かつ容易に行なえます。HotStarTaq Plus DNA Polymerase は、95℃、5分間のインキュベーションステップで活性化され、このステップは既存のサーマルサイクリングのプログラムに容易に導入できます。反応は室温で設定することができるので、使いやすく便利です（図“”）。また、本キットに付属のCoralLoad PCR Bufferはピペッティングの目視化を改良し、PCR産物をゲルに直接ロードすることが可能なので、簡便性が増加します。

図参照

HotStarTaq Plus procedure.

アプリケーション

HotStarTaq Plus DNA Polymeraseは以下のような増幅を含めた高度なアプリケーションをはじめ様々なアプリケーションに最適です。

複雑なゲノムテンプレート
複雑なcDNAテンプレート（例；RT-PCR）
低コピーのターゲット（例；シングルセルPCR）
マルチプレックスPCR

裏付けデータと数値

CoralLoad PCR Buffer.

Specifications

Features	Specifications
Applications	PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
With/without hotstart	With hotstart
Sample/target type	Genomic DNA and cDNA
Enzyme activity	5' -> 3' exonuclease activity
Reaction type	PCR amplification
Single or multiplex	Single
Mastermix	No
Real-time or endpoint	Endpoint

リソース

Second edition — innovative tools

PCR 実験における重要項目と新技術

Addressing critical factors and new solutions

For highly specific hot-start PCR without optimization

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

Second edition — innovative tools

Addressing critical factors and new solutions

PCR 実験における重要項目と新技術

For highly specific hot-start PCR without optimization

Publications

The putatively functional Mkrn1-p1 pseudogene is neither expressed nor imprinted, nor does it regulate its source gene in trans.

Gray TA; Wilson A; Fortin PJ; Nicholls RD;

Proc Natl Acad Sci U S A; 2006; 103 (32):12039-44 2006 Aug 1 PMID:16882727

Use of a short fragment of the C-terminal E gene for detection and characterization of two new lineages of dengue virus 1 in India.

Domingo C; Palacios G; Jabado O; Reyes N; Niedrig M; Gascón J; Cabrerizo M; Lipkin WI; Tenorio A;

J Clin Microbiol; 2006; 44 (4):1519-29 2006 Apr PMID:16597885

FAQ

No. HotStarTaq Plus DNA Polymerase is supplied with conventional QIAGEN PCR Buffer and CoralLoad PCR Buffer in separate vials. Both buffers minimize nonspecific amplification products, primer–dimers, and background.

CoralLoad PCR Buffer has all of the advantages of QIAGEN PCR Buffer but can also be used to directly load the PCR reaction onto an agarose gel without the need to add a gel loading buffer.

FAQ ID -1052

PCR products that will be cloned using the QIAGEN PCR Cloning Kit should be generated using a thermostable DNA Polymerase without proofreading activity, such as Taq DNA Polymerase. Such polymerases attach a single A overhang to their reaction products, which can hybridize to the U overhang of the pDrive Cloning Vector. For efficient addition of an A overhang during the PCR procedure, we recommend a final extension step for 10 min at 72°C as described in the standard protocols of the Taq PCR- and HotStarTaq PCR handbook.

FAQ ID -165

Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Polyacrylamide_gel_analysis_of_oligonucleotides' (PCR03).

FAQ ID -961

Not necessarily. In a lot of cases, the uniquely formulated PCR Buffer provided in the HotStarTag Plus DNA Polymerase, HotStar HiFidelity Polymerase, Taq DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and QIAGEN Multiplex PCR Kits provides optimal amplification of specific PCR products. The usefulness of Q-Solution needs to be determined empirically for each primer/template setup, by running parallel PCR reactions with and without Q-Solution under the same cycling conditions.

Q-Solution changes the melting behavior of DNA and will often improve a suboptimal PCR caused by templates that have a high degree of secondary structure or high GC-contents. For more details on the effects of Q-Solution on PCR amplification, please see the Q-Solution sections of the HotStarTaq Plus DNA Polymerase, HotStar HiFidelity Polymerase, Taq DNA Polymerase, HotStarTaq DNA Polymerase, and the QIAGEN Multiplex PCR Handbooks.

FAQ ID -380

Yes. Do not increase the activation time for HotStarTaq Plus DNA Polymerase beyond the recommended 5 minutes, as PCR product yield may be reduced and less specific amplification may result. Please follow the instructions in the HotStarTaq Plus PCR Handbook closely, and use the cycling parameters presented in the handbook to ensure optimal results.

FAQ ID -1050

CoralLoad gel tracking dye contained in Taq, HotStarTaq, TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits separates into 2 fragment-size dependent colors (orange and red) when loaded onto an agarose gel. Sigma Red buffer only has one color which is harder to visualize.

FAQ ID -1644

The activation time for HotStarTaq Plus DNA Polymerase used in the QuantiFast SYBR Green PCR Kits is longer than that for QuantiFast Probe PCR Kits. This is due to differences in buffer composition. Buffer components such as salts and additives influence the time required for enzyme activation.

FAQ ID -1449

Yes. Separated dyes are visible on an agarose gel down to a volume of 2 µl of PCR product generated with HotStarTaq Plus DNA Polymerase and CoralLoad PCR buffer.

FAQ ID -1051

In QIAGEN labs, we have amplified PCR products up to 5 kb from complex genomic DNA, and up to 10 kb from less complex lambda phage DNA with the HotStar HiFidelity Polymerase Kit, following standard protocols in the HotStar HiFidelity PCR Handbook.

For targets larger than 5 kb of complex genomic DNA, and larger than 10 kb of less complex DNA, we recommend to follow the protocol 'Amplification of Long PCR Products' in the HotStar HiFidelity PCR Handbook. The protocol uses a mixture of HotStar HiFidelity DNA Polymerase and Taq, or HotStar Taq Plus DNA Polymerase, and allows much longer fragments to be generated. In-house we have tested fragments up to 13 kb from complex genomic DNA or up to 30 kb from less complex lambda phage DNA using this protocol.

FAQ ID -1047