QuantiTect Virus Kits

Pour une détection très sensible de l’ARN et/ou de l’ADN viral

✓ Traitement automatique des commandes en ligne 24 h/24 7 j/7

✓ Assistance technique et produits pertinente et professionnelle

✓ Commande (ou réapprovisionnement) rapide et fiable

QuantiTect Virus Kit (1000)

Cat. No. / ID: 211015

Pour 1 000 x 50 µl de réactions : QuantiTect Virus Master Mix (contains ROX dye), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer

Reference dye

Rox in Mastermix

Rox in vial

Reactions

1000

200

Inquire

Les QuantiTect Virus Kits sont destinés aux applications de biologie moléculaire. Ces produits ne sont pas conçus pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

✓ Traitement automatique des commandes en ligne 24 h/24 7 j/7

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✓ Commande (ou réapprovisionnement) rapide et fiable

Caractéristiques

Haute sensibilité dans les dosages simples et multiplexes
Détection de l’ARN et/ou de l’ADN viral dans la même réaction
Détection claire des signaux positifs faibles
Protocoles universels rapides en 2 étapes
5x mélanges principaux pour une plus grande sensibilité avec plus d’échantillons

Détails produit

Le QuantiTect Virus Kit est spécialement conçu pour la détection très sensible d’un maximum de 4 cibles d’acide nucléique viral par RT-PCR multiplex, en temps réel et en une seule étape, à l’aide de sondes spécifiques de séquence. Plusieurs cibles d’ARN et/ou d’ADN viral ainsi que des contrôles internes peuvent être détectés dans un seul tube sans perte de sensibilité. Le mélange principal à concentration 5x permet l’ajout d’échantillons plus importants et contient la HotStarTaq Plus DNA Polymerase.Plus. Le QuantiTect Virus RT Mix contient une formulation unique de t Sensiscript Reverse Transcriptase optimisée pour une détection très sensible de l’ARN viral. Deux formats de kit sont disponibles : le QuantiTect Virus kit pour les thermocycleurs qui nécessitent le colorant ROX pour la normalisation de la fluorescence et le QuantiTect Virus +ROX Vial kit pour les autres thermocycleurs. Pour des raisons de commodité, le mélange principal peut être conservé entre 2 et 8 °C.

Performances

L’amplification à l’aide des QuantiTect Virus Kits permet d’obtenir des courbes sigmoïdales raides sur une plage de dilutions, même pour de faibles quantités de matrice avec des valeurs C_T élevées (voir figure « Détermination sans ambiguïté des valeurs de C_T sur une large plage dynamique »). Cela permet de déterminer avec précision la valeur C_T pour la quantification des acides nucléiques viraux dans la PCR en temps réel.

Les dosages multiplex permettent de détecter plusieurs cibles d’ARN et/ou d’ADN viral ainsi que des contrôles internes sur une large plage linéaire sans perte de sensibilité (voir les figures « Détection fiable de l’ARN viral sur une large plage linéaire » et « Amélioration de la détection de faibles quantités d’ARN viral »).

Le QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, fourni avec les kits, stabilise les étalons d’ARN et d’ADN pendant la dilution et la configuration de la réaction et empêche la perte d’acides nucléiques sur les surfaces en plastique, telles que les tubes ou les pointes de pipette. Le tampon permet une dilution fiable des étalons utilisés pour quantifier les acides nucléiques viraux, donnant une large plage linéaire, de valeurs C_T faibles à élevées, et assure un stockage plus long des étalons sans dégradation (voir figure « Dilution et stockage fiables des étalons d’ARN »).

Voir les illustrations

Détermination sans ambiguïté des valeurs de C_T sur une large plage dynamique.

Détection fiable de l’ARN viral sur une large plage linéaire.

Amélioration de la détection de faibles quantités d’ARN viral.

Dilution et stockage fiables des étalons d’ARN.

Principe

Les QuantiTect Virus Kits permettent une détection très sensible des acides nucléiques viraux dans les dosages simples ou multiplex dès le premier essai (voir l’organigramme « Kits multiplex QIAGEN »). Le mélange principal optimisé garantit que les produits PCR dans une réaction multiplex sont amplifiés avec la même efficacité et la même sensibilité que les produits PCR dans une réaction d’amplification simple correspondante.

L’amplification des gènes de contrôle et des gènes cibles dans la même réaction plutôt que dans des réactions séparées augmente la fiabilité de la quantification des gènes en minimisant les erreurs de manipulation. Le QuantiTect Virus Buffer contient une combinaison équilibrée d’ions K⁺ et NH₄⁺ ainsi que le Factor MP synthétique unique stabilisants qui, ensemble, favorisent une renaturation stable et efficace des amorces et des sondes sur la matrice d’acide nucléique, ce qui permet une grande efficacité de la PCR (voir figure « Tampon PCR unique »). En outre, la formulation unique de la Sensiscript Reverse Transcriptase garantit une transcription inverse très sensible de l’ARN viral, tandis que la HotStarTaqPlus DNA Polymerase assure un hot start rigoureux, empêchant la formation de produits non spécifiques.

Composant du QuantiTect Virus Kit
	Composant du kit	Caractéristique	Avantages
5x QuantiTect Virus Master Mix	Mélange principal concentré	Hautement concentré et optimisé pour une détection sensible des virus	Pour augmenter la sensibilité du dosage, il est possible d’ajouter des volumes plus importants de matrice
	HotStarTaq Plus DNA Polymerase	5 min d’activation à 95 °C	Réglage des réactions qPCR à température ambiante
	QuantiTect Virus Buffer	Combinaison équilibrée d’ions NH₄⁺ et K⁺	La renaturation spécifique des amorces garantit des résultats fiables de la PCR
	QuantiTect Virus Buffer	Synthetic Factor MP	Analyse multiplexe fiable d’un maximum de 4 gènes dans le même tube
Composants supplémentaires du kit	QuantiTect Virus RT Mix	Contient une formulation unique de Sensiscript Reverse Transcriptase	Optimisé pour une détection très sensible de l’ARN viral
Composants supplémentaires du kit	QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer	Formule tampon exclusive pour la dilution et le stockage des étalons d’acides nucléiques.	Stabilise les étalons d’ARN et d’ADN pendant la dilution et la configuration de la réaction et empêche la perte d’acides nucléiques sur les surfaces en plastique, telles que les tubes ou les pointes de pipette

Voir les illustrations

Kits multiplex QIAGEN.

Tampon PCR unique.

Procédure

Les QuantiTect Virus Kits permettent une analyse de PCR en temps réel très sensible des acides nucléiques viraux (ARN et/ou ADN) et des contrôles internes à l’aide de sondes spécifiques à une séquence. Les réactions peuvent être effectuées avec ou sans étape de transcription inverse, ce qui permet de concevoir avec souplesse des dosages multiplex pour détecter des cibles d’ARN, des cibles d’ADN ou des cibles d’ARN et d’ADN. Suivez le protocole du manuel pour obtenir des résultats rapides et fiables.

Les kits sont disponibles avec ou sans colorant de référence passif ROX dans le mélange principal (voir tableau).

Choixsissez le QuantiTect Virus Kit approprié
Colorant ROX	Kit	Thermocycleurs compatibles
Fourni dans le mélange principal	QuantiTect Virus Kit	Tous les thermocylceurs d’Applied Biosystems sauf Applied Biosystems 7500
Fourni dans un tube séparé	QuantiTect Virus +ROX Vial Kit	Applied Biosystems 7500 et thermocycleurs de Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Agilent et d’autres fournisseurs

Pour les applications RT-PCR en une étape, rapides et très sensibles, y compris la détection de virus, nous recommandons d’utiliser le QIAGEN OneStep RT-PCR Kit.

Applications

Les QuantiTect Virus Kits permettent une PCR simple ou multiplex en temps réel très sensible ou une RT-PCR en une étape utilisant des sondes spécifiques de la séquence pour la détection de l’ADN et/ou de l’ARN viral, ainsi que des contrôles internes. Les kits peuvent être utilisés sur un grand nombre de thermocycleurs en temps réel, y compris les appareils d’Applied Biosystems, de Bio-Rad, de Cepheid, d’Eppendorf, de QIAGEN, de Roche (à l’exception des thermocycleurs capillaires) et d’Agilent.

Données et illustrations utiles

Détermination sans ambiguïté des valeurs de C_T sur une large plage dynamique.

Des dilutions en série de l’ARN du virus de la diarrhée virale bovine (BVDV), comme indiqué, ont été amplifiées et analysées à l’aide du QuantiTect Virus Kit. Les courbes sigmoïdales raides permettent une détermination précise de la valeur C_T, même pour de faibles quantités de matrice (10 copies/μl). [A] Détection de l’ARN du BVDV1. [B] Détection de l’ARN du BVDV2. NTC : Contrôle sans matrice.

Specifications

Features	Specifications
Applications	Détection de virus
SYBR Green I or sequence-specific probes	Sondes spécifiques à une séquence
Real-time or endpoint	Temps réel
Reaction type	Transcription inverse et PCR
Thermal cycler	La plupart des thermocycleurs en temps réel (à l’exception des thermocycleurs capillaires, par exemple LightCycler® 1.x et 2.0)
Sample/target type	Cibles ARN et/ou ADN
With or without ROX	Disponible avec ROX dans le mélange principal et ROX en flacon séparé
Single or multiplex	Simple ou multiplex

Ressources

Now with even more applications!

For highly sensitive real-time singleplex or multiplex PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of viral DNA and RNA and internal controls

FAQ

Ensure PCR amplicons are as short as possible, ideally 60–150 bp. Always use the same algorithm or software to design the primers and probes. For optimal results, only combine assays that have been designed using the same parameters.

Check the functionality of each set of primers and probes in individual assays before combining the different sets in the multiplex assay. Choose compatible reporters and quenchers based on a specific instrument. See How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR.

FAQ ID -9093

No. UNG treatment does not provide any advantage for the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits because the mastermixes do not contain dUTP. Use the QuantiTect kits if you intend to use the UNG treatment.

FAQ ID -9092

If the extra peaks seem irregular or noisy, do not occur in all samples, and occur at temperatures less than 70 ºC, then these peaks may not represent real PCR products and instead may represent artifacts caused by instrument settings.

Usually extra peaks caused by secondary products are smooth and regular, occur reproducibly in most samples, and occur at temperatures greater than 70 ºC. Characterization of the product by agarose gel electrophoresis is the best way to distinguish between these cases. If only one band appears by agarose gel then the extra peaks in the dissociation curve are instrument artifacts and not real products. If this is the case, refer to the thermal cycler user manual, and confirm that all instrument settings (smooth factor, etc.) are set to their optimal values.

FAQ ID -90990

The REST 2009 (Relative Expression Software Tool) software applies mathematic models that compensate for the different PCR efficiencies of the gene of interest and reference genes. In addition, the software can use multiple reference gene normalization to improve the reliability of result, as well as provides statistical information suitable for robust comparison of expression in groups of treated and untreated. QIAGEN offers the REST 2009 software free of charge.

FAQ ID -9095

The Ct or threshold cycle value is the cycle number at which the fluorescence generated within a reaction crosses the fluorescence threshold, a fluorescent signal significantly above the background fluorescence. At the threshold cycle, a detectable amount of amplicon product has been generated during the early exponential phase of the reaction. The threshold cycle is inversely proportional to the original relative expression level of the gene of interest.

FAQ ID -2682

Check the template quality and integrity by amplifying an endogenous control gene. Check the amplicon by QIAxcel Advanced system or agarose gel electrophoresis to show that amplification was successful.

Determine whether the gene of interest is expressed in your sample. See How can I find out if my gene of interest is express in a specific tissue type or cell line. Ensure the assay setup and cycling conditions are correct, and that the data collection channel matches the emission wavelength of the fluorescent dye used. Use a control sample in which the gene of interest is definitely expressed.

If the issue persists, please send the original run file to QIAGEN Technical Services.

FAQ ID -9091

For duplex analysis, using non-fluorescent quenchers (e.g., Black Hole Quencher^®) is preferred over fluorescent quenchers (e.g., TAMRA fluorescent dye). For triplex and 4-plex analysis, QIAGEN strongly recommends using non-fluorescent quenchers. Generally, use the green channel, the yellow channel, and the orange and crimson channels to detect the least abundant target, the second least abundant target, and the two most abundant targets, respectively. For instrument-specific recommendations, please see the handbooks for the QuantiTect Multiplex PCR kit, QuantiFast Multiplex kit or Rotor-Gene Multiplex kit.

FAQ ID -9094

The gDNA wipeout buffer incubation step can be skipped when the total RNA is free from genomic DNA. However, the gDNA wipeout buffer is still required to be added because the reverse transcription step is optimized in the presence of components in the gDNA wipeout buffer.

FAQ ID -9098

Store the standards at a high concentration in aliquots at -20^oC to -70^oC. If using low concentrations, stabilize standards with carrier nucleic acid. It is always best to use freshly diluted standards for each experiment. If possible, use siliconized tubes for standard (and target) dilutions. This will prevent any unspecific binding of nucleic acids to the plastic.

FAQ ID -9099

Reliable HRM analysis results depend on template quality, highly specific HRM PCR kit with a saturation dye, a real-time instrument with HRM capability, and powerful software package. Factors critical for successful HRM analysis are:

Use the same genomic DNA purification procedure for all samples being analyzed by HRM. This avoids variation due to differing composition of elution buffers.
DNA template concentrations should be normalized using the same dilution buffer. Ensure the C_T values are below 30 and differ no more than 3 C_T values across individual samples.
Design assays with amplicon length 70–350 bp. For SNP analysis, use amplicon length 70–150 bp.
Always start with 0.7 µM primer concentration

For more details, please refer to the HRM Technology – FAQs and the Critical Success Factor for HRM performance.

FAQ ID -9097

Shorter amplification products facilitate high PCR efficiencies. Ideally, amplicon length should be less than 150 bp for optimal amplification efficiency. PCR efficiencies close to 100% are a crucial prerequisite for accurate quantification of target copy numbers in real-time PCR.

FAQ ID-751

The QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits are based on similar reaction chemistry and show identical sensitivity but as a new feature, the QuantiFast Pathogen kits include an Internal Control template and the corresponding primer/probe set for duplex amplification of a user-defined pathogen target with the provided Internal Control. Additional new features are pack size, kit variants, ROX variants, and speed.

FAQ ID -2448

Yes, the Internal Control RNA (High conc.) and Internal Control DNA (High conc.) templates are available under a separate catalog number. After reconstitution according to the description in the handbook, these IC templates have a 10x higher concentration than the Internal Control templates provided in the kits. They are sufficiently concentrated to be spiked into the sample prep without replacing too much of the sample input volume.

**Please note that there is no assay (primer/probe set) for amplification of the IC included in these separate catalog numbers. The assay is only included in the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit and QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit. The ICs cannot be used with the QuantiTect Virus kits because the assay (primer/probe set) for the detection of the IC is provided with the QuantiFast Pathogen Kits only.

FAQ ID -2451

Depending on primer design and copy number of target, primer-dimer may occur and its signal might be detected. Typical strategies against this are to optimize PCR conditions and/or redesign the assay.

Alternatively, an additional data-acquisition step can be added to the 3-step cycling protocol. First, determine the melting temperatures (T_m) for both the amplicon and the primer-dimer. Then, add a 15 second data-acquisition step with a temperature that is higher than the primer-dimer T_m, but approximately 3ºC lower than the specific amplicon T_m.

FAQ ID -9096

QuantiTect Virus Kits

Pour une détection très sensible de l’ARN et/ou de l’ADN viral

QuantiTect Virus Kit (1000)

Caractéristiques

Détails produit

Performances

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Principe

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Procédure

Applications

Données et illustrations utiles

Détermination sans ambiguïté des valeurs de CT sur une large plage dynamique.

Specifications

Ressources

FAQ

Détermination sans ambiguïté des valeurs de C_T sur une large plage dynamique.