Le virus adéno-associé est un vecteur viral largement utilisé dans les applications de thérapie génique. Cependant, le processus de génération et de purification des vecteurs viraux requiert un contrôle qualité précis pour permettre un dosage sûr et fiable pendant les études cliniques ou le traitement du patient. La capacité à quantifier avec précision les titres des vecteurs et à déterminer la contamination est essentielle pour des thérapies géniques basées sur l’AAV sûres et efficaces.
Grâce au CGT Viral Vector Lysis Kit qui comprend des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions, nous bénéficions désormais d’une procédure optimisée et standardisée pour la lyse des vecteurs viraux avec un mode précis de détermination du titre viral. Ce kit est également compatible avec les adénovirus.
Nous proposons une procédure complète de la lyse de l’AAV à la quantification du titre viral à partir de lysats cellulaires. Avec sa formule améliorée, le CGT Viral Vector Lysis Kit permet une détermination homogène, précise et fiable du titre final. Il fonctionne avec les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, le QIAcuity Digital PCR System, le QIAcuity Probe PCR Kit et la QIAcuity Nanoplate 8.5K, permettant ainsi une procédure de dPCR complète comparable à la qPCR, mais avec une quantification absolue des copies du génome du vecteur d’AAV dans votre échantillon.
La solution tout-en-un pour la lyse de l’AAV comprend :
Le CGT Viral Vector Lysis Kit associé aux QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays et au QIAcuity Probe PCR Kit réalisant des réactions simplex ou multiplex sur les instruments QIAcuity permettent à présent une procédure complète de titre viral.
Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.
Le CGT Viral Vector Lysis Kit est fourni avec des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions dans deux boîtes pour les vecteurs d’AAV. Le kit permet la lyse de l’AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 et AAV9. Les lysats sont optimisés pour les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays associés au QIAcuity Probe PCR Kit. Ces dosages permettent des applications de thérapie cellulaire et génique simplex comme multiplex, y compris les mesures du titre viral et du nombre de copies du vecteur. Le kit n’inclut pas les enzymes de restriction (p. ex. pour Hpall) qui apparaissent dans le protocole (figurant dans la section Ressources ci-après).
Le CGT Viral Vector Lysis Kit est utilisé pour la lyse de l’AAV et des adénovirus pour diverses applications, notamment les mesures du titre du génome du vecteur viral et du nombre de copies du vecteur.
Two AAV2 samples were processed using the CGT Viral Vector Lysis Kit and quantified using the QIAcuity Digital PCR instrument with 8.5k Nanoplates and the CGT dPCR Assays. The CGT dPCR Assays were run in triplex reactions in the FAM, HEX and Cy5 channels. The samples were serially diluted in 6 steps from 15,000 copies/µL down to 2.5 copies/µL with an R2=1.0 on 8.5k Nanoplates (A, B). Each dilution was measured in technical triplicates. Quantifications were performed with (+) and without (–) restriction digest of the ITR regions. (A) For the titration of a purified AAV2 reference standard sample, the CGT dPCR assays targeting the CMV enhancer bGH polyA regions were used. The expected copies are based on an ITR estimate determined by qPCR measurements from the reference standard supplier and not directly comparable to dPCR measurements. (B) For the titration of the AAV2-SV40 harvest sample, the CGT dPCR Assays targeting the SV40 promoter, SV40 polyA and bGH polyA regions were used.