miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays

• Concevez facilement un dosage personnalisé pour votre miARN d’intérêt spécifique
• Détection de vrais signaux à très faible plage de détection, jusqu’à 1 copie de miARN
• Procédure rapide et simple qui dure 2 heures
• Conception d’un dosage de miARN pour tout nouveau miARN, isoforme de miARN ou variante

Les miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays sont des lots d’amorces et de sondes PCR miARN conçus sur mesure qui permettent une quantification extrêmement sensible et spécifique des miARN avec le miRCURY LNA miRNA Probe PCR System. L’amorce à amplification par PCR avant et la sonde FAM et marquée par un quencher sombre sont spécifiques aux miARN et optimisées avec la technologie LNA, ce qui augmente la performance du dosage. Les dosages sont facilement créés en ligne en utilisant le même algorithme robuste et optimisé que nos dosages préconçus. Ainsi, il est possible de combiner des dosages personnalisés et des dosages prédéfinis, dont le fonctionnement est garanti.

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Détection très sensible de vrais signaux

La sensibilité exceptionnelle des miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays est obtenue en combinant la transcription inverse universelle avec des amorces et des sondes spécifiques aux miARN, renforcées par LNA et normalisées par T_m. Cette combinaison permet une quantification précise et fiable des miARN individuels à partir de 1 pg d’ARN total ou jusqu’à 1 molécule sans préamplification (voir  Quantification précise même avec un faible matériel de départ et  Efficacité exceptionnelle sur une large gamme dynamique). La sensibilité et la rapidité de la procédure rendent le système particulièrement adapté aux échantillons de sérum ou de plasma. Les enzymes QuantiNova permettent d’obtenir des résultats hautement reproductibles entre les réplicats techniques et biologiques dès la première tentative, ce qui permet d’enregistrer des économies de matériel et de temps.

Par rapport à d’autres systèmes PCR basés sur des sondes miARN qui reposent uniquement sur la sonde pour générer la spécificité, l’amorce et la sonde renforcées par LNA des miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays sont à la fois spécifiques au miARN et suffisamment courtes pour éviter tout chevauchement lors de la liaison à la cible (voir  miRCURY LNA miRNA Probe PCR System en un coup d’œil), ce qui améliore la sensibilité, la spécificité et l’efficacité du dosage. Associée à un excellent rapport signal/bruit (voir  Détection précise même en présence d’un bruit de fond ARN élevé), cette fonctionnalité unique permet de distinguer des miARN étroitement liés dont les différences de séquence ne dépassent pas un nucléotide (voir  Pouvoir discriminatoire jusqu’à une différence d’un seul nucléotide).

Validé et optimisé

La formulation des dosages (amorces et sondes) des nouveaux miARN est basée sur un algorithme de formulation créé par des experts en LNA et en dosages. Cet algorithme exhaustif évalue et optimise 60 paramètres qui sont validés in silico en fonction de critères de performance très stricts afin de garantir une conception offrant la sensibilité et la spécificité les plus élevées. Les dosages obtenus permettent de détecter jusqu’à 1 copie de miARN.

Rapide et facile

Le protocole facile à suivre, d’une durée de 2 heures, permet d’enregistrer des gains de temps et de main-d’œuvre. L’utilisation d’une transcription universelle et de protocoles RT-PCR optimisés simplifie grandement la procédure par rapport à d’autres solutions. De plus, l’ADNc généré lors de l’étape de RT peut être utilisé dans l’ensemble du miRCURY LNA miRNA Probe PCR System, ce qui vous permet de passer en douceur des panels aux dosages en fonction de vos besoins de recherche, et d’enregistrer des échantillons et du temps. Le nombre d’étapes de pipetage est réduit au minimum, ce qui minimise également les variations techniques. La fiabilité du dosage permet une configuration à température ambiante et des cycles différés pour une plus grande flexibilité et une utilisation en automatisation. Cette procédure simplifiée, associée à une fabrication de dosages conforme aux normes ISO, permet d’obtenir une reproductibilité extrêmement élevée d’un jour à l’autre et d’un site à l’autre.

Le processus de conception

L’outil de conception de miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay vous permet de concevoir facilement des lots d’amorces de PCR améliorés par des LNA hautement sensibles et spécifique et une sonde pour tout miARN non couvert par un dosage préconçu. L’algorithme avancé évalue environ 3 000 résultats de paires d’amorces et de sondes sur la base de plus de 60 critères différents afin de trouver en quelques minutes les amorces et les sondes optimales pour votre miARN. L’outil a été conçu pour les miARN, mais peut aussi être utilisé pour d’autres ARN d’une longueur de 14–27 nucléotides.

Les critères de conception incluent :

• Optimisation des températures de fusion en variant la distribution de LNA des amorces et de la sonde afin d’assurer une efficacité et une spécificité de l’amplification élevées.
• Calculs et ajustements des scores d’auto-hybridation et d’hybridation croisée pour des réactions de PCR efficaces.
• Ajustements pour éviter une formation potentielle de dimère d’amorces dans la réaction de PCR.
• Positionnement intelligent des bases des LNA dans les amorces et la sonde sur la base de nos vastes connaissances en matière de conception d’oligonucléotides du LNA.
• Recherches de miRBase pour identifier les miARN potentiels avec une similitude de séquence élevée au sein d’une même espèce. Cela garantit que les lots d’amorces et la sonde sont hautement spécifiques pour le petit ARN pour lequel ils ont été conçus.

Un système unique pour la quantification des miARN

Le miRCURY LNA miRNA Probe PCR System permet une quantification et un profilage sensibles et spécifiques des miARN par real-time PCR. La détection est basée sur une sonde FAM et une sonde d’hydrolyse marquée par un quencher sombre. Le système couvre toutes les étapes de la conversion des miARN en ADNc et de la détection ultérieure des miARN par qPCR. Les miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays ont été validés à l’aide du QuantiNova Probe Master Mix ; l’utilisation d’autres réactifs pour la qPCR affectera les résultats.

RNA Spike-In Kit pour RT

Le RNA Spike-In Kit permet de contrôler la qualité des étapes d’isolation de l’ARN, de synthèse de l’ADNc et d’amplification par PCR des expériences miRCURY LNA miRNA Probe PCR. Vous pouvez ainsi identifier les échantillons de mauvaise qualité dès le début du processus et gagner du temps et d’économiser des réactifs. Le kit comprend les UniSp2, UniSp4 et UniSp5 RNA Spike-in Template Mix et le cel-miR-39-3p RNA Spike-in Template.

miRCURY LNA RT Kit

Un kit universel de transcription inverse pour deux systèmes de détection. Le miRCURY LNA RT Kit est utilisé à la fois pour le miRCURY LNA miRNA PCR System, qui utilise le SYBR Green pour la détection, et pour le miRCURY LNA miRNA Probe PCR System, basé sur des sondes. Le kit comprend deux tampons de réaction spécifiques au système et tous les réactifs nécessaires pour réaliser une polyadénylation et une transcription inverse des miARN rapides et pratiques en une seule étape de réaction.

miRCURY Probe PCR Kit

Optimisé et dédié au miRCURY LNA miRNA Probe PCR System, ce kit contient le QuantiNova Probe Master Mix et le miRCURY Probe Universal Reverse Primer. Associée à un miRCURY LNA miRNA Probe Assay ou un miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel, la chimie permet la détection des miARN par real-time PCR quantitative.

miRCURY LNA miRNA Probe Assays

Ces dosages à base d’amorces et de sondes utilisent des sondes d’hydrolyse spécifiques des miARN et des amorces directes spécifiques des miARN conçues pour détecter les miARN matures en utilisant les informations de séquence les plus récentes de la base de données miRBase 22. La miRCURY Probe Universal Reverse Primer se trouve dans le miRCURY Probe PCR Kit.

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panels

Plaques de panel PCR à usage unique, prêtes à l’emploi, pour établir rapidement le profil des miARN matures en se concentrant sur le miARNome, des voies spécifiques, certains types d’échantillons comme le sérum/plasma, ou dans le cadre d’un panel personnalisé conçu par l’utilisateur.

GeneGlobe Data Analysis Center

Cet outil d’analyse gratuit basé sur le Web vous guide pas à pas, via un assistant facile, dans la normalisation et l’analyse de vos données et génère des figures prêtes pour la publication.

La première étape, la réaction de transcription inverse, est une réaction facile à réaliser, en un seul tube. L’ARN total, y compris les miARN, est utilisé comme matériel de départ et l’ADNc résultant est utilisé dans l’amplification par real-time PCR avec des amorces renforcées par LNA et une sonde d’hydrolyse pour détecter les miARN matures. Cela permet une quantification et un profilage simples des miARN, accessibles à tout laboratoire disposant d’un thermocycleur à real-time PCR.

Les miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays sont utilisés comme un élément du miRCURY LNA miRNA Probe PCR System pour :

• La détection, le profilage et la quantification de l’expression des miARN
• Le développement de biomarqueurs de miARN – dépistage et identification
• La régulation des miARN et l’analyse des voies
• Détection des miARN dans des types d’échantillons complexes et des échantillons présentant de faibles niveaux d’expression de miARN (exosomes, sérum, plasma, urine, coupes FFPE)
• La détection des snoRNA
• La validation du séquençage des miARN