Le virus adéno-associé est un vecteur viral largement utilisé dans les applications de thérapie génique. Cependant, le processus de génération et de purification des vecteurs viraux requiert un contrôle qualité précis pour permettre un dosage sûr et fiable pendant les études cliniques ou le traitement du patient. La capacité à quantifier avec précision les titres des vecteurs et à déterminer la contamination est essentielle pour des thérapies géniques basées sur l’AAV sûres et efficaces.
Grâce au CGT Viral Vector Lysis Kit qui comprend des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions, nous bénéficions désormais d’une procédure optimisée et standardisée pour la lyse des vecteurs viraux avec un mode précis de détermination du titre viral. Ce kit est également compatible avec les adénovirus.
Nous proposons une procédure complète de la lyse de l’AAV à la quantification du titre viral à partir de lysats cellulaires. Avec sa formule améliorée, le CGT Viral Vector Lysis Kit permet une détermination homogène, précise et fiable du titre final. Il fonctionne avec les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, le QIAcuity Digital PCR System, le QIAcuity Probe PCR Kit et la QIAcuity Nanoplate 8.5K, permettant ainsi une procédure de dPCR complète comparable à la qPCR, mais avec une quantification absolue des copies du génome du vecteur d’AAV dans votre échantillon.
La solution tout-en-un pour la lyse de l’AAV comprend :
Le CGT Viral Vector Lysis Kit associé aux QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays et au QIAcuity Probe PCR Kit réalisant des réactions simplex ou multiplex sur les instruments QIAcuity permettent à présent une procédure complète de titre viral.
Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.
Le CGT Viral Vector Lysis Kit est fourni avec des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions dans deux boîtes pour les vecteurs d’AAV. Le kit permet la lyse de l’AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 et AAV9. Les lysats sont optimisés pour les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays associés au QIAcuity Probe PCR Kit. Ces dosages permettent des applications de thérapie cellulaire et génique simplex comme multiplex, y compris les mesures du titre viral et du nombre de copies du vecteur. Le kit n’inclut pas les enzymes de restriction (p. ex. pour Hpall) qui apparaissent dans le protocole (figurant dans la section Ressources ci-après).
Le CGT Viral Vector Lysis Kit est utilisé pour la lyse de l’AAV et des adénovirus pour diverses applications, notamment les mesures du titre du génome du vecteur viral et du nombre de copies du vecteur.
Deux échantillons de VAA2 ont été traités avec le CGT Viral Vector Lysis Kit puis quantifiés sur l’instrument de PCR digitale QIAcuity avec les nanoplaques 8.5k et les dosages de CGT par dPCR. Les dosages de CGT par dPCR ont été réalisés dans des réactions triples sur les canaux FAM, HEX et Cy5. Les échantillons ont été plusieurs fois dilués en 6 étapes de 15 000 copies/µl à 2,5 copies/µl, avec un R2 = 1,0 sur les nanoplaques 8.5k (A, B). Chaque dilution a été mesurée en trois réplicats techniques. Les quantifications ont été effectuées avec (+) et sans (–) digestion par enzymes de restriction des régions ITR. (A) Pour le titrage d’un échantillon standard de référence VAA2 purifié, les dosages de CGT par dPCR ciblant les régions de l’amplificateur du CMV, polyA STB, ont été utilisés. Les copies prévues sont basées sur une estimation des ITR déterminée par des mesures par qPCR à partir de l’étalon de référence et pas directement comparable aux mesures par dPCR. (B) Pour le titrage de l’échantillon VAA2-SV40, les dosages de CGT par dPCR ciblant les régions du promoteur du SV40, polyA SV40 et polyA STB, ont été utilisés.