MinElute Gel Extraction Kit

Pour l’extraction sur gel de fragments d’ADN de 5 µg maximum (70 pb à 4 kb) dans de faibles volumes d’élution

✓ Traitement automatique des commandes en ligne 24 h/24 7 j/7

✓ Assistance technique et produits pertinente et professionnelle

✓ Commande (ou réapprovisionnement) rapide et fiable

MinElute Gel Extraction Kit (50)

Cat. No. / ID: 28604

50 MinElute Spin Columns, tampons, Collection Tubes (2 ml)

18 000 JPY

Preparations

250

Le MinElute Gel Extraction Kit est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Caractéristiques

Très faibles volumes d’élution
Procédure rapide et manipulation facile
Récupérations importantes et reproductibles
Colorant de chargement gélifié pour simplifier l’analyse d’échantillon

Détails produit

Le MinElute Gel Extraction Kit contient des colonnes de centrifugation, tampons et tubes de prélèvement pour la purification sur membrane de silice de fragments d’ADN de 70 pb à 4 kb à partir de plaques de gel pouvant aller jusqu’à 400 mg. Les colonnes de centrifugation sont conçues pour permettre l’élution dans de très faibles volumes (de l’ordre de 10 µl), ce qui donne des rendements élevés d’ADN hautement concentré. Un indicateur de pH intégré simplifie la détermination du pH optimal pour la liaison de l’ADN à la colonne de centrifugation. Les fragments d’ADN purifiés avec le système MinElute peuvent s’utiliser directement dans toutes les applications, y compris le séquençage, l’analyse de puce à ADN, la ligature et la transformation, la digestion par enzymes de restriction, le marquage, la micro-injection, la PCR et la transcription in vitro. Le MinElute Gel Extraction Kit peut être automatisé sur le QIAcube Connect.

Pour des résultats optimaux, il est recommandé d’utiliser ce produit avec le QIAvac 24 Plus.

Performances

Le MinElute Gel Extraction Kit permet d’éliminer les nucléotides, les enzymes, les sels, l’agarose, le bromure d’éthidium et d’autres impuretés des échantillons d’ADN, laissant un ADN hautement concentré adapté à de nombreuses applications en aval (voir l’illustration « Des concentrations d’ADN supérieures »).

Le MinElute Gel Extraction Kit contient des colonnes de centrifugation destinées à l’extraction sur gel. À l’aide d’une microcentrifugeuse ou d’une rampe à vide, vous purifiez rapidement un ADN hautement concentré de 70 pb à 4 kb. (Les fragments d’ADN de 4 kb à 10 kb doivent être purifiés avec le QIAquick Gel Extraction Kit et les fragments d’ADN inférieurs à 70 pb ou supérieurs à 10 kb doivent être extraits avec le système d’extraction sur gel QIAEX II.)

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Des concentrations d’ADN supérieures.

Principe

Les MinElute Kits contiennent une membrane de silice permettant la liaison de l’ADN dans un tampon de forte salinité et l’élution avec un tampon de faible salinité ou de l’eau. La technologie à membrane de silice permet d’écarter les problèmes liés aux résines et aux bouillies non homogènes. Des tampons de liaison spéciaux sont optimisés pour des applications spécifiques et favorisent l’adsorption sélective de molécules d’ADN de tailles bien précises.

Colorant de chargement gélifié

Afin de faciliter un traitement et une analyse plus rapides et pratiques des échantillons, un colorant de chargement gélifié est fourni. Le colorant de chargement GelPilot contient trois colorants de suivi (xylène cyanol, bleu de bromophénol et orange G) pour faciliter l’optimisation du temps d’exécution du gel d’agarose et empêcher les petits fragments d’ADN de migrer trop loin (voir l’illustration « Colorant de chargement GelPilot »).

Voir les illustrations

Colorant de chargement GelPilot.

Procédure

Le système MinElute utilise une procédure simple de liaison-lavage-élution (voir le schéma « Procédure MinElute »). Les plaques de gel sont dissoutes dans un tampon contenant un indicateur de pH, cela permet de déterminer aisément le pH optimal pour la liaison de l’ADN (voir l’illustration « Colorant indicateur de pH ») puis le mélange est appliqué à la colonne de centrifugation MinElute. Les acides nucléiques se fixent à la membrane en gel de silice dans les conditions de forte salinité du tampon. Les impuretés sont éliminées et l’ADN pur est élué dans un petit volume de tampon de faible salinité ou d’eau, prêt à être utilisé dans d’autres applications.

Manipulation

Les MinElute Spin Columns offrent deux possibilités de manipulation pratiques. Les colonnes de centrifugation peuvent être insérées dans une microcentrifugeuse de paillasse classique ou dans n’importe quelle rampe à vide dotée de connecteurs Luer, de type QIAvac 24 Plus avec QIAvac Luer Adapters. Le MinElute Gel Extraction Kit, tout comme d’autres kits QIAGEN avec colonnes de centrifugation, peut être entièrement automatisé sur le QIAcube Connect, cela permet d’accroître la productivité et de standardiser les résultats (voir les illustrations « Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation A, B, C, D » et « QIAcube Connect »).

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Procédure MinElute.

Colorant indicateur de pH

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – A.

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – B.

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – C.

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – D.

QIAcube Connect.

Applications

Les fragments d’ADN purifiés à l’aide du système MinElute ou QIAquick peuvent s’utiliser directement dans toutes les applications, notamment :

Séquençage, y compris le séquençage à haut débit
Analyse de puce à ADN
Ligature et transformation
Digestion par enzymes de restriction
Marquage

Données et illustrations utiles

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – C.

Rampe avec connecteurs Luer

Specifications

Features	Specifications
Binding capacity	5 µg
Elution volume	10 µl
Fragment size	70 pb – 4 kb
Sample type: applications	ADN : réactions de PCR
Technology	Extraction sur gel
Recovery: oligonucleotides dsDNA	Récupération : fragments d’ADNdb
Format	Tube
Processing	Manuel

Ressources

Publications

MicroRNA-137 targets microphthalmia-associated transcription factor in melanoma cell lines.

Bemis LT; Chen R; Amato CM; Classen EH; Robinson SE; Coffey DG; Erickson PF; Shellman YG; Robinson WA;

Cancer Res; 2008; 68 (5):1362-8 2008 Mar 1 PMID:18316599

Molecular and phylogenetic analyses reveal mammalian-like clockwork in the honey bee (Apis mellifera) and shed new light on the molecular evolution of the circadian clock.

Rubin EB; Shemesh Y; Cohen M; Elgavish S; Robertson HM; Bloch G;

Genome Res; 2006; 16 (11):1352-65 2006 Oct 25 PMID:17065608

An accurate fluorescent assay for quantifying the extent of RNA editing.

Roberson LM; Rosenthal JJ;

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Adaptive evolution of fertilization proteins within a genus: variation in ZP2 and ZP3 in deer mice (Peromyscus).

Turner LM; Hoekstra HE;

Mol Biol Evol; 2006; 23 (9):1656-69 2006 Jun 14 PMID:16774977

Collision events between RNA polymerases in convergent transcription studied by atomic force microscopy.

Crampton N; Bonass WA; Kirkham J; Rivetti C; Thomson NH;

Nucleic Acids Res; 2006; 34 (19):5416-25 2006 Sep 29 PMID:17012275

FAQ

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560

Cut out the slice of agarose containing the DNA fragment of interest, and store it at 4^oC in an Eppendorf tube sealed with Parafilm.

FAQ ID -313

Yes, and therefore they are interchangeable.

FAQ ID -581

Yes. The QIAquick Gel Extraction Kit for extraction of DNA from gels can also be used for RNA gel extraction. Please see a user-developed procedure below, which was kindly provided by J. Knobloch, Heinrich Heine University, Düsseldorf, Germany. Note that this protocol has not been thoroughly tested and optimized by QIAGEN. QIAquick Gel Extraction Kits are not guaranteed to be RNase-free.

Excise the RNA fragment from the formaldehyde agarose gel with a clean, sharp scalpel.
Weigh the gel slice, and record the weight. Soak the gel slice in TE buffer for 25 min at room temperature with gentle shaking.
Remove the gel slice from the TE buffer, and place it in a colorless tube. Add 6 volumes of Buffer QG to 1 volume of gel, based on the gel weight (100 mg ~ 100 µl).
Incubate at 58°C for 25 min. To help dissolve the gel, mix by vortexing the tube every 2–3 min during the incubation.
Continue the QIAquick Gel Extraction Kit Protocol (using a microcentrifuge) in the QIAquick Spin Handbook, beginning with step 4.

Please click here for Figure 1.

Figure 1:

A. Total RNA was isolated from the parasitic blood fluke Schistosoma mansoni using the RNeasy Mini Kit and run on a formaldehyde agarose (1.2%) gel. (Note: The 28S rRNA in S. mansoni contains a break site so that the rRNA splits into two parts, which run on a gel at the same size as the 18S rRNA.) The rRNA bands were excised and treated as described above (left lane) or using 10 volumes of Buffer QG in step 3 (right lane).

B. The extracted RNA was then analyzed on a new formaldehyde agarose gel. (Data kindly provided by J. Knobloch, Department of Genetic Parasitology, Heinrich Heine University, Düsseldorf, Germany).

FAQ ID -133

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water

FAQ ID -205

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759

The composition of Buffer EB is:

10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.

FAQ ID -148

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460

The QIAEX II and QIAquick Gel Extraction Kit can be used to extract DNA from polyacrylamide gels.

The QIAEX II Handbook contains a protocol for Polyacrylamide Gel Extraction. A specialized User-Developed Protocol (QQ05) is available when using the QIAquick Gel Extraction Kit for this purpose.

Both protocols require the preparation of a diffusion buffer and a disposable plastic column or syringe barrel containing a Whatman GF/C filter or siliconized glass wool. To ensure optimal diffusion, cut the gel slices as small as possible, and use 2 volumes of diffusion buffer per 1 volume of gel. Increasing incubation time (protocol step 3) may result in higher yields.

FAQ ID -120