MinElute PCR Purification Kit pour le nettoyage par PCR

Pour la purification de produits de PCR de 5 μg maximum (70 pb à 4 kb) dans de faibles volumes d’élution

✓ Traitement automatique des commandes en ligne 24 h/24 7 j/7

✓ Assistance technique et produits pertinente et professionnelle

✓ Commande (ou réapprovisionnement) rapide et fiable

MinElute PCR Purification Kit (50)

Cat. No. / ID: 28004

50 MinElute Spin Columns, tampons, Collection Tubes (2 ml)

1 190,00 HKD

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Préparations

250

Quantité

Le MinElute PCR Purification Kit est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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✓ Assistance technique et produits pertinente et professionnelle

✓ Commande (ou réapprovisionnement) rapide et fiable

Caractéristiques

Très faibles volumes d’élution
Procédure rapide et manipulation facile
Récupérations importantes et reproductibles
Colorant de chargement gélifié pour simplifier l’analyse d’échantillon

Détails produit

Le MinElute PCR Purification Kit contient des colonnes de centrifugation, tampons et tubes de prélèvement pour la purification sur membrane de silice de produits de PCR de 70 pb à 4 kb. Les colonnes de centrifugation sont conçues pour permettre l’élution dans de très faibles volumes (de l’ordre de 10 μl), ce qui donne des rendements élevés d’ADN hautement concentré. Un indicateur de pH facultatif simplifie la détermination du pH optimal pour la liaison de l’ADN à la colonne de centrifugation. La procédure peut être entièrement automatisée sur le système QIAcube Connect.

Performances

La procédure MinElute PCR Purification permet d’éliminer les amorces, les nucléotides, les enzymes, l’huile minérale, les sels et d’autres impuretés des échantillons d’ADN (voir l’illustration « »).

Le MinElute PCR Purification Kit contient des colonnes de centrifugation destinées au nettoyage des produits de PCR. À l’aide d’une microcentrifugeuse ou d’une rampe à vide, vous obtenez rapidement une grande concentration de fragments d’ADN (70 pb à 4 kb). (Les fragments d’ADN supérieurs à 4 kb doivent être purifiés avec le QIAquick PCR Purification Kit.)

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Élimination efficace des amorces.

Principe

Le MinElute PCR Purification Kit contient une membrane de silice permettant la liaison de l’ADN dans un tampon de forte salinité et l’élution avec un tampon de faible salinité ou de l’eau. La technologie à membrane de silice permet d’écarter les problèmes liés aux résines et aux bouillies non homogènes.

Colorant de chargement gélifié

Afin de faciliter un traitement et une analyse plus rapides et pratiques des échantillons, un colorant de chargement gélifié est fourni. Le colorant de chargement GelPilot contient trois colorants de suivi (xylène cyanol, bleu de bromophénol et orange G) pour faciliter l’optimisation du temps d’exécution du gel d’agarose et empêcher les petits fragments d’ADN de migrer trop loin (voir l’illustration « Colorant de chargement GelPilot »).

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Colorant de chargement GelPilot.

Procédure

Le système MinElute utilise une procédure simple de liaison-lavage-élution Le tampon de liaison est ajouté directement à l’échantillon de PCR ou à la réaction enzymatique, puis le mélange est appliqué à la colonne de centrifugation MinElute. Le tampon de liaison contient un indicateur de pH, cela simplifie la détermination du pH optimal pour la liaison de l’ADN (voir l’illustration « Colorant indicateur de pH »). Les acides nucléiques se fixent à la membrane de silice dans les conditions de forte salinité du tampon. Les impuretés sont éliminées et l’ADN pur est élué dans un petit volume de tampon de faible salinité ou d’eau, prêt à être utilisé dans d’autres applications.

Manipulation

Les MinElute Spin Columns offrent deux possibilités de manipulation pratiques (voir le schéma « Procédure MinElute »). Les colonnes de centrifugation peuvent être insérées dans une microcentrifugeuse de paillasse classique ou dans n’importe quelle rampe à vide dotée de connecteurs Luer, de type QIAvac 24 Plus et peuvent également être entièrement automatisées sur le QIAcube Connect (voir les illustrations « Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation A et B » et « QIAcube Connect »).

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Colorant indicateur de pH.

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation – A.

Possibilités de manipulation des colonnes de centrifugation — B.

QIAcube Connect.

Applications

Les fragments d’ADN purifiés à l’aide du système MinElute peuvent s’utiliser directement dans toutes les applications, notamment :

Séquençage, y compris le séquençage à haut débit
Analyse de puce à ADN
Ligature et transformation
Digestion par enzymes de restriction
Marquage

Données et illustrations utiles

Élimination efficace des amorces.

Analyse des produits de PCR avant (b) et après (a) purification avec le MinElute PCR Purification Kit. Échantillons analysés sur un gel d’agarose TAE à 1,2 %. M : marqueurs.

Specifications

Features	Specifications
Binding capacity	5 µg
Sample type: applications	ADN, oligonucléotides : réactions de PCR
Elution volume	10 µl
Fragment size	70 pb – 4 kb
Recovery: oligonucleotides dsDNA	Récupération : oligonucléotides, ADNdb
Format	Tube
Technology	Technologie à base de silice
Processing	Manual
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteins	Élimination < 40 mères

Ressources

Publications

Factors involved in root formation in Medicago truncatula.

Imin N; Nizamidin M; Wu T; Rolfe BG;

J Exp Bot; 2006; 58 (3):439-51 2006 Dec 6 PMID:17158109

Expression of c-kit in human osteosarcoma and its relevance as a prognostic marker.

Sulzbacher I; Birner P; Toma C; Wick N; Mazal PR;

J Clin Pathol; 2006; 60 (7):804-7 2006 Oct 3 PMID:17018686

Application of microdroplet PCR for large-scale targeted bisulfite sequencing.

Komori HK; LaMere SA; Torkamani A; Hart GT; Kotsopoulos S; Warner J; Samuels ML; Olson J; Head SR; Ordoukhanian P; Lee PL; Link DR; Salomon DR;

Genome Res; 2011; 21 (10):1738-45 2011 Jul 14 PMID:21757609

A new fractionation assay, based on the size of formaldehyde-crosslinked, mildly sheared chromatin, delineates the chromatin structure at promoter regions.

Ishihara S; Varma R; Schwartz RH;

Nucleic Acids Res; 2010; 38 (11):e124 2010 Apr 5 PMID:20371521

Transcriptional organization, regulation and role of the Porphyromonas gingivalis W83 hmu haemin-uptake locus.

Lewis JP; Plata K; Yu F; Rosato A; Anaya C;

Microbiology (Reading); 2006; 152 (Pt 11):3367-3382 2006 Nov PMID:17074906

FAQ

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560

CoralLoad dyes supplied in PCR Kits such as, e.g., Taq, HotStarTaq, and TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix do not interfere with most downstream enzymatic applications.

However, for reproducible results, purification of PCR products using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kits prior to enzymatic manipulation is recommended.

FAQ ID -1745

Buffer PB contains a high concentration of guanidine hydrochloride and isopropanol. The exact composition of Buffer PB is confidential. However, this buffer can be purchased separately: Buffer PB.

FAQ ID -2791

No - mineral oil will not affect the clean-up procedure with the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit.

FAQ ID -575

Yes, and therefore they are interchangeable.

FAQ ID -581

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water

FAQ ID -205

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759

The composition of Buffer EB is:

10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199

Yes, please follow the User-developed protocol 'Forensic post-PCR purification protocol using the MinElute PCR Purification Kit' (ME01).

FAQ ID -1761

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.

FAQ ID -148

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460