QIAquick 96 PCR Purification Kits – Nettoyage d’ADN

Pour la purification de 96 produits de PCR (jusqu’à 10 µg), de 100 pb à 10 kb

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QIAquick 96 PCR Purification Kit (4)

Cat. No. / ID:   28181

Pour la purification de 4 × 96 réactions de PCR : 4 plaques QIAquick à 96 puits, tampons, microtubes de prélèvement (1,2 ml), bouchons
Kit
QIAquick 96 PCR Purification Kit
QIAquick 96 PCR BioRobot Kit
Préparations
4
24
Les QIAquick 96 PCR Purification Kits sont destinés aux applications de biologie moléculaire. Ces produits ne sont pas conçus pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Caractéristiques

  • Jusqu’à 95 % de récupération d’ADN prêt à l’emploi
  • Procédure rapide et pratique
  • Nettoyage d’ADN jusqu’à 10 kb en trois étapes simples

Détails produit

Les QIAquick 96 PCR Purification Kits contiennent des plaques à 96 puits, tampons et tubes de prélèvement pour la purification à haut débit sur membrane de silice de produits de PCR > 100 pb. L’ADN jusqu’à 10 kb est purifié suivant une procédure simple et rapide de liaison–lavage–élution, avec un volume d’élution de 60 à 80 µl (qui donne un volume d’éluat de 40 à 60 µl). La procédure de nettoyage peut être entièrement automatisée sur la station de travail universelle BioRobot à l’aide du QIAquick 96 PCR BioRobot Kit.

Performances

Le QIAquick 96 PCR Kit propose une méthode rapide et facile de purification à haut débit d’échantillons de PCR, avec un taux de récupération allant jusqu’à 90 %. La procédure QIAquick 96 donne un ADN particulièrement pur adapté à diverses applications en aval (voir l’illustration «  Séquençage de précision »). Avec le QIAvac 96, vous pouvez purifier des fragments d’ADN de 100 pb à 10 kb à partir de 1 à 4 × 96 échantillons.
Voir les illustrations

Principe

Les QIAquick 96 Kits contiennent une membrane de silice permettant la liaison de l’ADN dans un tampon de forte salinité et l’élution avec un tampon de faible salinité ou de l’eau. La procédure de purification permet d’éliminer les amorces, les nucléotides, les enzymes, l’huile minérale, les sels, l’agarose, le bromure d’éthidium et d’autres impuretés des échantillons d’ADN. La technologie à membrane de silice permet d’écarter les problèmes liés aux résines et aux bouillies non homogènes. Des tampons de liaison spéciaux sont optimisés pour des applications spécifiques et favorisent l’adsorption sélective de molécules d’ADN de tailles bien précises.

La procédure QIAquick 96 permet la purification en parallèle de 96 échantillons de PCR maximum par purification sous vide sur un QIAvac 96.
Le QIAquick 96 PCR BioRobot Kit est un kit spécifique optimisé pour être utilisé sur le système universel BioRobot. Ce kit propose des modules QIAquick 96 ainsi que tous les tampons et éléments en plastique nécessaires au nettoyage automatisé à haut débit de 96 échantillons de PCR.

Procédure

Le système QIAquick utilise une procédure simple de liaison–lavage–élution (voir le schéma «  Procédure QIAquick 96 »). Le tampon de liaison est ajouté directement à l’échantillon de PCR ou à la réaction enzymatique, puis le mélange est appliqué à la plaque à 96 puits. Les acides nucléiques se fixent à la membrane de silice dans les conditions de forte salinité du tampon. Les impuretés sont éliminées et l’ADN pur est élué dans un petit volume de tampon de faible salinité ou d’eau, prêt à être utilisé dans d’autres applications.

Manipulation

Les modules à plusieurs puits QIAquick sont traités par purification sous vide sur les rampes à vide QIAvac. Le QIAquick 96 PCR Purification Kit implique d’utiliser le QIAvac 96 Vacuum Manifold. La procédure de nettoyage peut être entièrement automatisée sur les stations de travail universelles BioRobot à l’aide du QIAquick 96 PCR BioRobot Kit.

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Applications

Les fragments d’ADN purifiés avec le système MinElute ou QIAquick peuvent s’utiliser directement dans diverses applications, y compris le séquençage, l’analyse de puce à ADN, la ligature et la transformation, la digestion par enzymes de restriction, le marquage, la micro-injection, la PCR et la transcription in vitro.

Données et illustrations utiles

Specifications

FeaturesSpecifications
Binding capacity10 µg
ProcessingManuel/Automatisé
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteinsÉlimination < 40 mères
Sample type: applicationsADN, oligonucléotides : réactions de PCR
FormatPlaque de 96 puits
Fragment size100 pb – 10 kb
TechnologyTechnologie à base de silice
Recovery: oligonucleotides dsDNARécupération : oligonucléotides, ADNdb
Elution volume60 – 80 µl

Ressources

Quick-Start Protocols (1)
Technical Information and Important Notes (2)
Kit Handbooks (1)
For rapid purification of multiple PCR products 
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

Publications

Temporal and differential gene expression of Singapore grouper iridovirus.
Chen LM; Wang F; Song W; Hew CL;
J Gen Virol; 2006; 87 (Pt 10):2907-2915 2006 Oct PMID:16963749
Comparative genomics of host-specific virulence in Pseudomonas syringae.
Sarkar SF; Gordon JS; Martin GB; Guttman DS;
Genetics; 2006; 174 (2):1041-56 2006 Sep 1 PMID:16951068
cDNA microarrays as a tool for identification of biomineralization proteins in the coccolithophorid Emiliania huxleyi (Haptophyta).
Quinn P; Bowers RM; Zhang X; Wahlund TM; Fanelli MA; Olszova D; Read BA;
Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (8):5512-26 2006 Aug PMID:16885305
Characterization of the vernalization response in Lolium perenne by a cDNA microarray approach.
Ciannamea S; Busscher-Lange J; de Folter S; Angenent GC; Immink RG;
Plant Cell Physiol; 2006; 47 (4):481-92 2006 Jan 31 PMID:16449231
Anti-inflammatory activity in vitro and in vivo of the protein farnesyltransferase inhibitor tipifarnib.
Xue X; Lai KT; Huang JF; Gu Y; Karlsson L; Fourie A;
J Pharmacol Exp Ther; 2005; 317 (1):53-60 2005 Dec 13 PMID:16352705

FAQ

I bound an 11 kb DNA fragment to a QIAquick column; is it completely lost?

Larger DNA fragments bind more tightly to the QIAquick columns. It is difficult to predict whether a DNA fragment larger than 10 kb can be efficiently recovered, because this depends on base composition as well as fragment size. If the fragment is only a few kb larger than the 10 kb limit, it can be helpful to heat the elution buffer EB to 60°C and let it incubate on the column for a few minutes before centrifuging. However, please note that it will become less likely to recover your sample the larger the fragment size is. As we cannot guarantee recovery of fragments larger than the maximum cutoff size, we do not recommend to purify such fragments using QIAquick Kits.

The QIAEX II Kit can be used to extract DNA fragments up to 50 kb from agarose or polyacrylamide gels.

 

FAQ ID -756
How can I improve recoveries when using the QIAquick Kits?

Buffer PE did not contain ethanol

Ethanol must be added to Buffer PE (concentrate) before use. Repeat procedure with correctly prepared Buffer PE.

Inappropriate elution buffer

DNA will only be eluted efficiently in the presence of low-salt buffer (e.g., Buffer EB: 10 mM Tris·Cl, pH 8.5) or water. Elution efficiency is strongly dependent on the salt concentration and pH of the elution buffer. Contrary to adsorption, elution is most efficient under basic conditions and low salt concentrations. DNA is eluted with 50 or 30 µl of the provided Buffer EB (10 mM Tris·Cl, pH 8.5), or water. The maximum elution efficiency is achieved between pH 7.0 and 8.5. When using water to elute, make sure that the pH is within this range. In addition, DNA must be stored at –20°C when eluted with water since DNA may degrade in the absence of a buffering agent. Elution with TE (10 mM Tris·Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0) is possible, but not recommended because EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

Elution buffer incorrectly dispensed

Add elution buffer to the center of the QIAquick membrane to ensure that the buffer completely covers the membrane. This is particularly important when using small elution volumes (30 µl).

FAQ ID -180
Can I use a centrifuge instead of vacuum when using the QIAquick 96 PCR Purification Kit?
Yes, you can use a QIAGEN Centrifuge with the QIAquick 96 PCR Purification Kit. Follow the Supplementary Protocol 'Spin procedure for purifying 2 x 96 PCR samples using the Plate Rotor 2 x 96, a special centrifuge, and the QIAquick 96 PCR Purification Kit.' Here's the link to the protocol.
FAQ ID -293
Do you have a protocol for purifying 2x96 PCR samples simultaneously with the QIAquick 96 PCR Purification Kit?

Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Spin procedure for purifying the 2x96 PCR samples using the Plate Rotor 2x96, a special centrifuge and the QIAquick 96 PCR Purification Kit' (QQ01).  Please contact your local QIAGEN Technical Service for this protocol.

The protocol is for use with QIAGEN Centrifuges and the Plate Rotor 2 x 96.

FAQ ID -935
Do I have to remove the oil from my PCR reaction before using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit?
No - mineral oil will not affect the clean-up procedure with the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit.
FAQ ID -575
Do you have protocols for multiple extractions of DNA fragments from agarose gels?

Yes, please follow the Supplementary Protocols 'High-throughput gel extractions using the QIAquick 96 PCR Purification Kit' (QQ03).  Please contact your local QIAGEN Technical Service for this protocol.

FAQ ID -944
Why does my DNA sample float out of the slot when loading it onto an agarose gel?

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

  • re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
  • incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
  • dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water
FAQ ID -205