QuantiNova PCR Kits

• Configuration précise de la réaction grâce à un indicateur visuel intégré
• Détection précise et robuste de cibles jusqu’à une seule copie
• Spécificité inégalée grâce à un nouveau mécanisme de hot start
• Détection sensible d’un maximum de 5 cibles dans un seul tube
• Stabilité de la réaction jusqu’à 100 heures à 30 °C pour des procédures flexibles

Le QuantiNova SYBR Green PCR Kit (SYBR qPCR kit), qui se caractérise par une spécificité, une sensibilité, une rapidité et une sécurité de processus accrues, représente un nouveau standard dans le domaine de la qPCR basée sur le SYBR Green. Un nouveau mécanisme de hot start améliore considérablement la spécificité de la real-time PCR et une chimie optimisée permet d’obtenir des résultats quantitatifs précis à partir d’ADNc ou d’ADNg sur n’importe quel thermocycleur de real-time PCR, avec la détection d’une seule copie de la cible. Enfin, un indicateur visuel intégré garantit un pipetage correct.

Évitez les effets délétères d’un mauvais amorçage à des températures plus basses grâce au QuantiNova Probe PCR Kit (kit qPCR à sonde). Ce kit, qui repose sur un nouveau mécanisme de hot start médié par des anticorps, améliore la spécificité et l’efficacité de la PCR en temps réel basée sur des sondes afin de fournir une analyse précise, simple ou double, de l’ADNc ou de l’ADNg sur divers thermocycleurs de PCR en temps réel. Son extrême stabilité sur une période allant jusqu’à 100 heures à température ambiante, sans nécessiter d’agent réfrigérant, en fait un produit idéal pour la manipulation d’échantillons à haut débit et pour les procédures automatisées. Un système de suivi intégré pour l’identification visuelle du pipetage correct vous procure une sérénité absolue, tandis que la détection extrêmement sensible de quantités de cibles même faibles vous assure systématiquement des résultats fiables en qPCR.

Les QuantiNova Multiplex PCR Kits (kits qPCR multiplex) permettent une quantification rapide et fiable d’un maximum de 5 cibles ADNc ou ADNg dans un seul tube par PCR en temps réel multiplex, ou RT-PCR en deux étapes. La technologie Q-bond et un mélange principal optimisé favorisent une PCR en temps réel multiplex ultrarapide en 1 heure. La combinaison d’un système unique de hot start et de tampon PCR dans le mélange principal 4x prêt à l’emploi garantit une qPCR très sensible sur n’importe quel thermocycleur en temps réel sans recourir à l’optimisation, et fournit également des options de réglage automatisé de la réaction à température ambiante. Un système de suivi intégré pour l’identification visuelle du pipetage correct permet d’éviter les erreurs humaines, tandis que l’association avec le QuantiNova Reverse Transcription Kit pour la synthèse de l’ADNc permet d’inclure le QuantiNova Internal Control RNA pour enregistrer la réussite de la transcription inverse et de la qPCR.

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Indicateur visuel intégré pour une configuration précise de la réaction

Le mélange principal fourni avec les QuantiNova PCR Kits contient un colorant bleu inerte qui n’interfère pas avec la PCR en temps réel, mais augmente la visibilité dans le tube ou le puits. Le QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer contient un colorant jaune inerte. Lorsque l’acide nucléique matrice est dilué dans le QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer et ajouté au mélange principal, la couleur de la solution passe du bleu au vert (voir figure «  Configuration précise de la réaction indiquée par le contrôle de pipetage intégré »), ce qui fournit une indication visuelle que chaque réaction a été réglée correctement.

QuantiNova SYBR Green PCR Kit

La grande sensibilité du QuantiNova SYBR Green PCR Kit se traduit par une détection précise et robuste même d’une seule copie de la cible (voir figure «  Détection fiable et sensible de cibles à copie unique »). Cette extrême sensibilité est atteinte même dans des conditions de thermocyclage ultrarapides.

Il est possible d’utiliser le QuantiNova SYBR Green PCR Kit avec un grand nombre de matrices. Les performances de ce SYBR real-time PCR kit ont été testées pour une plage dynamique couvrant 8 ordres de grandeur (de 100 ng à 10 fg d’ADNc) et quel que soit l’appareil utilisé, la quantification s’est avérée précise et robuste (voir figure «  Quantification précise sur une large plage dynamique »).

La spécificité rigoureuse et la sensibilité exceptionnelle de la chimie QuantiNova permettent d’obtenir des résultats optimaux sur le QIAGEN Rotor‑Gene Q, mais peuvent être appliquées sur n’importe quel thermocycleur PCR en temps réel, indépendamment du format, de la capacité de thermocyclage rapide et de la nécessité d’un colorant de référence passif. Le colorant ROX fourni avec le QuantiNova SYBR Green PCR Kit est simplement ajouté au mélange principal si nécessaire. Les résultats d’amplification et de quantification obtenus avec le Rotor‑Gene Q, le Mx3005P d’Agilent Technologies, le 7900 HT Fast, le ViiA 7, le StepOnePlus et le 7500 Fast d’Applied Biosystems, le LightCycler 480 de Roche et le CFX96 de Bio-Rad ont été invariablement fiables et sensibles.
Le QuantiNova SYBR Green PCR Kit offre des résultats supérieurs à ceux des autres SYBR Green PCR kits. La chimie QuantiNova génère des valeurs CT plus faibles, une meilleure reproductibilité et une plus grande efficacité de réaction, indépendamment des conditions de thermocyclage ou de l’appareil.

Le QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer permet de procéder à la configuration de la réaction en toute sérénité, mais n’est pas nécessaire pour obtenir des résultats supérieurs avec le QuantiNova SYBR Green PCR Kit. La chimie QuantiNova est conçue pour la souplesse, et peut donc être intégrée dans n’importe quelle procédure établie. Les performances sont donc optimales avec la cible d’amplification choisie, ainsi qu’avec l’appareil et le tampon de dilution retenus.

QuantiNova Probe PCR Kit

Le PCR en temps réel mix de ce kit de PCR à sonde en temps réel peut être stocké à 30 °C pendant 100 heures sans altérer la performance des réactions suivantes. Cette stabilité exceptionnelle, même après un stockage prolongé à température ambiante en l’absence d’agent refroidissant, rend le QuantiNova Probe PCR Kit idéal pour la configuration de réactions et la manipulation de piles de plaques haut débit (voir le tableau « Effet du stockage sur la stabilité de la réaction »).

Comparaison des valeurs C_T avant et après 100 heures de stockage à 30 °C. Les PCR en temps réel comprenant le master mix, l’ADNc matrice, les amorces et les sondes pour le TNF ont été incubées à 30 °C pendant 100 heures et soumis à la real-time PCR en même temps que les réactions fraîchement préparées. Des réactions en triple de 3 quantités différentes de matrices ont été testées. Contrairement au kit PCR à sonde du fournisseur L, les valeurs CT fournies par le QuantiNova Probe PCR Kit n’ont pas varié après un stockage prolongé des échantillons à 30 °C.

La grande sensibilité du QuantiNova Probe PCR Kit permet une détection précise et fiable d’une seule copie de la cible (voir figure «  Détection sensible et fiable d’une seule copie de la cible »). Le mélange principal spécial fourni avec ces kits permet de quantifier avec précision 2 cibles ayant des abondances très différentes dans un seul tube. Cela permet d’économiser du temps et de l’argent et de réduire la quantité d’échantillon nécessaire. En outre, les données obtenues par PCR duplex sont comparables à celles obtenues par PCR simple.
La combinaison unique de la technologie de tampons brevetée et éprouvée de QIAGEN avec les nouveaux ADN polymérase QuantiNova, l’anticorps QuantiNova et le protecteur QuantiNova, garantit le succès de la real-time PCR dès la première tentative, sans qu’il soit nécessaire de procéder à une optimisation coûteuse et fastidieuse, même avec des dosages de real-time PCR difficiles (voir la figure «  Des résultats supérieurs pour les dosages difficiles »).

Vous pouvez utiliser le QuantiNova Probe PCR Kit sur n’importe quel thermocycleur en temps réel. Le colorant ROX est fourni dans un tube séparé et peut être ajouté dans un thermocycleur qui utilise le ROX comme colorant de référence passif. Le kit fournit des résultats très cohérents entre les différents thermocycleurs en termes de sensibilité, de reproductibilité et d’efficacité. Malgré des capacités de thermocyclage rapide variables d’un thermocycleur à l’autre, la cohérence des résultats est préservée, ce qui se traduit par des protocoles de thermocyclage différents.

QuantiNova Multiplex PCR Kits

Le mélange principal spécial fourni avec les QuantiNova Multiplex PCR Kits permet une configuration rapide des réactions multiplex et donne des résultats fructueux dès la première tentative, en fournissant des données de PCR multiplex comparables aux données de PCR simplex. Le mélange principal 4x hautement concentré peut contenir jusqu’à 800 ng de matrice, ce qui garantit une sensibilité exceptionnelle, même dans les réactions 5-plex. Le kit peut clairement distinguer de petites différences dans la quantité de matrice et fournit une quantification précise de cibles dont l’abondance est très variable.

Un nouveau mécanisme de hot start, à médiation par anticorps, garantit une spécificité exceptionnelle et permet une configuration de la réaction à température ambiante, ce qui convient parfaitement aux procédures automatisées. Le tampon PCR rapide spécialement développé contient l’additif Q-Bond, lequel réduit considérablement les temps de renaturation et d’extension, ce qui permet une qPCR multiplex en moins d’une heure. Le contrôle visuel du pipetage permet d’éviter les erreurs humaines et renforce la sécurité du processus, en particulier s’il est associé à l’Internal Control RNA fourni dans le QuantiNova Reverse Transcription Kit pour une RT-PCR quantitative en 2 étapes.

Le QuantiNova Multiplex PCR Kit augmente l’efficacité de la procédure en générant davantage d’informations à partir d’un nombre limité d’échantillons grâce à l’utilisation de la qPCR multiplex ultrarapide et contrôlée pendant le processus.

Les QuantiNova PCR Kits permettent d’analyser l’ADNc ou l’ADNg avec la plus grande spécificité grâce à un nouveau mécanisme de hot start à médiation par anticorps (voir la figure «  Principe du nouveau mécanisme hot start QuantiNova »). Aux basses températures, la QuantiNova DNA Polymerase est conservée dans un état inactif par le QuantiNova Antibody et le nouvel additif, le QuantiNova Guard qui stabilise le complexe. Cela améliore la rigueur du hot start et prévient l’élongation de dimères d’amorces et d’amorces hybridées de façon non spécifique. Dans les 2 minutes qui suivent l’augmentation de la température à 95 °C, le QuantiNova Antibody et le QuantiNova Guard sont dénaturés et la QuantiNova DNA Polymerase est activée, permettant l’amplification.

En outre, la chimie QuantiNova comprend des fonctionnalités qui permettent de rationaliser la procédure sans perte de sensibilité et d’efficacité de la PCR. Des colorants inertes dans le mix et dans le QuantiNova Yellow Dilution Buffer servent d’indicateur visuel pour vérifier que chaque réaction a été correctement ajustée. La couleur bleue du mélange principal augmente la visibilité du contenu de la cuve de réaction et devient verte lors de l’ajout d’acides nucléiques matrice dilués dans le QuantiNova Yellow Dilution Buffer (voir figure «  Configuration précise de la réaction indiquée par le contrôle de pipetage intégré »). La formulation unique du tampon PCR inclus dans les QuantiNova SYBR PCR kits renforce la rigueur du mécanisme de hot start et raccourcit les étapes de thermocyclage, de sorte que la PCR est réalisée plus rapidement et qu’il est possible d’augmenter le débit.

Les QuantiNova Multiplex PCR Kits fournissent des résultats très sensibles et rapides sur une large plage dynamique sur les thermocycleurs standards et rapides sans optimisation. Le tampon PCR rapide spécialement développé contient l’additif Q-Bond, qui réduit considérablement les temps de renaturation et d’extension (voir figure «  Renaturation rapide de l’amorce »).

L’amplification des gènes de référence et des gènes cibles dans la même réaction plutôt que dans des réactions séparées augmente la fiabilité de la quantification des gènes en minimisant les erreurs de manipulation. De manière complémentaire, l’Internal Control RNA fourni dans le QuantiNova Reverse Transcription Kit pour la RT-PCR quantitative en 2 étapes peut être incorporé pour enregistrer la réussite de la transcription inverse et de la qPCR.

Le tampon PCR multiplex QuantiNova comprend une combinaison équilibrée d’ions K+ et NH4+ et de Factor MP synthétique unique qui favorisent conjointement une renaturation stable et efficace des amorces et des sondes sur la matrice d’acide nucléique. Cela permet une grande efficacité de la PCR (voir figure «  Le tampon PCR multiplex unique favorise une renaturation stable et efficace »).
Le mélange principal du QuantiNova Multiplex PCR Kit peut être stocké entre 2 et 8 °C jusqu’à 12 mois, et le réglage de la réaction est extraordinairement stable à température ambiante, ce qui permet d’automatiser les procédures pour augmenter l’efficacité et la précision.

Les QuantiNova PCR Kits contiennent des mélanges principaux prêts à l’emploi qui éliminent le besoin d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. Il suffit d’ajouter l’ADNg ou l’ADNc matrice et les amorces (détection basée sur le SYBR Green) ou l’ADNg ou l’ADNc matrice, les amorces et les sondes (détection basée sur les sondes) au mélange principal et de suivre le protocole du manuel pour obtenir des résultats rapides et fiables sur n’importe quel thermocycleur en temps réel. Le colorant de référence passif ROX est fourni dans un tube séparé et il est possible d’ajuster les concentrations du colorant en fonction du type de thermocycleur utilisé. Les QuantiNova PCR Kits peuvent donc être utilisés sur pratiquement tous les thermocycleurs en temps réel, quel que soit le format ou les conditions de thermocyclage. L’analyse automatique des données permet de détecter même les faibles nombres de copies grâce aux concentrations optimisées de ROX.

Les QuantiNova Multiplex PCR Kits contiennent 4x de mélanges principaux prêts à l’emploi qui éliminent le besoin d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. Il suffit d’ajouter jusqu’à 800 ng d’ADN matrice et des ensembles amorce-sonde au mélange principal et de suivre le protocole du manuel pour obtenir des résultats rapides et fiables sur n’importe quel thermocycleur en temps réel. Les kits fournissent un colorant de référence passif ROX dans un tube séparé, pour ajuster la concentration appropriée de ROX pour votre appareil, si nécessaire.

Pour des résultats optimaux lors de la PCR en temps réel en deux étapes, nous recommandons de synthétiser l’ADNc à l’aide du QuantiNova Reverse Transcription Kit, qui permet une synthèse rapide de l’ADNc en seulement 20 minutes avec une élimination intégrée de la contamination par l’ADN génomique. Il fournit en outre le QuantiNova Internal Control RNA, qui permet de contrôler en cours de processus la réussite de la transcription inverse et de la qPCR.

Pour une procédure simplifiée, nous recommandons de combiner les kits QuantiNova avec nos dosages ou panels de QuantiNova real-time PCR assays. Ils permettent de quantifier avec précision les ARNm ou les longues transcriptions d’ARN non codants, quelle que soit leur abondance. Choisissez parmi une large plage d’ensembles d’amorces prédéfinies pour l’homme, la souris et le rat, ou personnalisez vos propres dosages et panels à l’aide de nos outils de conception avancés. 

Nos QuantiNova LNA PCR et QuantiNova LNA Probe PCR Assays utilisent la technologie LNA pour une sensibilité accrue, ce qui permet d’obtenir des profils d’expression génique non biaisés et des connaissances scientifiques plus rapides.

Le QuantiNova SYBR Green PCR Kit peut être utilisé pour l’analyse d’expression génique basée sur le SYBR Green des cibles ADNc et l’analyse quantitative de l’ADNg sur n’importe quel thermocycleur. Il s’agit des appareils des sociétés Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, LIFE Technologies, Roche et Agilent, ainsi que du Rotor‑Gene Q.

Les QuantiNova Probe PCR Kits peuvent être utilisés pour l’analyse d’expression génique par sonde des cibles ADNc et l’analyse quantitative de l’ADNg sur n’importe quel thermocycleur. Il s’agit notamment des appareils d’Applied Biosystems, de Bio-Rad, de Cepheid, d’Eppendorf, de Roche et d’Agilent.

Les QuantiNova Multiplex PCR Kits peuvent être utilisés pour l’analyse multiplex de l’expression génique de cibles ADNc ou ADNg sur n’importe quel thermocycleur en temps réel. Pour exploiter pleinement les avantages du multiplexage, nous recommandons des appareils offrant une capacité allant jusqu’à 5-plex, tels que le Rotor‑Gene Q.