Certal Residual DNA Detection Kits
Pour la détection sensible par sonde de l’ADN résiduel de cellules hôtes CHO, y compris un contrôle interne
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Cat. No. / ID: 211822
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Lorsque nous travaillons avec des produits biopharmaceutiques, il est essentiel d’évaluer le matériel thérapeutique final pour s’assurer qu’il est exempt de substances contaminantes, telles que l’ADN résiduel de la cellule hôte. Les Certal Residual DNA Detection Kits sont conçus pour une quantification sensible et rapide par real-time PCR de l’ADN génomique résiduel de la cellule hôte à l’aide de sondes d’hydrolyse doublement marquées (également connues sous le nom de TaqMan®). Le Certal CHO Detection Kit contient des réactifs pour la détection par real-time PCR duplex de l’ADN résiduel des cellules hôtes CHO, ainsi que le Certal Internal Control. Le kit comprend également le Certal Residual DNA Positive Control, qui vérifie la fonctionnalité du dosage PCR en l’absence d’un signal provenant de l’ADN de la cellule hôte CHO, et 2 formats de colorant de référence passif ROX à différentes concentrations, permettant une utilisation sur pratiquement n’importe quel appareil en temps réel.
Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent une détection et une quantification sensibles et fiables de l’ADN génomique résiduel (ADNg), ce qui est essentiel pour la production de produits biopharmaceutiques sûrs et fiables (voir figure « Détection très sensible et fiable »). Le Certal CHO Detection Kit détecte l’ADNg résiduel des cellules ovariennes de hamster chinois (CHO) avec une limite de détection basse et une plage linéaire élevée, garantissant une détection fiable même de faibles niveaux d’ADNg résiduel (voir figure « Limite inférieure de détection »). Les Certal Residual DNA Detection Kits sont compatibles avec une large plage de thermocycleurs, fournissant des données sensibles et fiables (voir figures « Détection sensible et fiable sur un grand nombre de thermocycleurs » et « Détection sensible et fiable de l’ADN génomique de CHO sur le Rotor‑Gene Q »).
Pour une grande sécurité du processus, les Certal Residual DNA Detection Kits intègrent leQIAGEN Internal Control, qui est spécifiquement conçu pour l’interprétation correcte des résultats négatifs et ne pas interférer avec le dosage cible. LeQIAGEN Internal Control est détecté de manière fiable lorsqu’il est coamplifié avec de l’ADN génomique (voir figure « Détection fiable du contrôle interne QIAGEN »).
Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent de s’assurer que les substances contaminantes provenant de la lignée cellulaire hôte utilisée pour produire des produits biopharmaceutiques sont absentes du matériel thérapeutique final, grâce à un dosage prédéfini permettant de détecter spécifiquement l’ADN de la cellule hôte CHO. Chaque Certal Residual DNA Assay est composé d’une paire d’amorces optimisée et d’une sonde d’hydrolyse marquée au FAM pour une détection fiable de l’ADN génomique résiduel de CHO. L’ADN de fond humain et l’ADN de contrôle interne Certal n’interfèrent pas avec le dosage de l’ADN résiduel Certal.
Le Certal Internal Control Assay prémélangé contient une amorce avant et arrière et une sonde d’hydrolyse marquée au MAX pour la détection de l’ADN de contrôle interne Certal. Il a été spécifiquement optimisé pour éviter toute interférence avec les Certal Residual DNA Assays. Le Certal Residual DNA Positive Control permet d’interpréter correctement les résultats négatifs en testant la fonctionnalité de la réaction d’amplification elle-même.
Le Certal ResDNA PCR Buffer a été optimisé pour fournir des résultats quantitatifs sensibles et fiables de la real-time PCR. Le mélange principal contient également du dUTP, ce qui permet un prétraitement à l’uracil-N-glycosylase (UNG) avant le début de la PCR, avec pour objectif de garantir que les produits de PCR contaminés n’affectent pas les réactions de PCR ultérieures.
Composant | Caractéristiques | Avantages |
Certal Residual DNA Assays et ADN de contrôle | ||
---|---|---|
50x Certal Residual DNA Assay | Ensemble d’amorces et de sondes prédéfini, optimisé et validé (marqué FAM) | Détection fiable de l’ADN résiduel des cellules hôtes CHO |
Certal Residual DNA Positive Control | ADN de contrôle positif qui sera amplifié par le Certal Residual DNA Assay | Vérification du bon fonctionnement du Certal Residual DNA Assay dans le cas où aucun ADN résiduel de cellule hôte n’est détecté dans l’échantillon |
50x Certal Internal Control Assay | Ensemble d’amorces et de sondes prédéfini, optimisé et validé (marquées au MAX) pour la détection de l’ADN du contrôle interne Certal | Détection spécifique du Certal Internal Control DNA uniquement. Optimisé pour éviter toute interférence avec les Certal Residual DNA Assays |
Certal Internal Control DNA | Internal Control DNA qui sera amplifié par le Certal Internal Control Assay | Exclut la présence d’inhibiteurs de la PCR ou peut être utilisé pour contrôler la purification et l’amplification lorsqu’il est ajouté au cours de l’étape de purification |
Certal ResDNA PCR Master Mix | ||
HotStarTaq DNA Polymerase | 15 min d’activation à 95 °C | Réglage des réactions qPCR à température ambiante |
Certal ResDNA PCR Buffer | Combinaison équilibrée d’ions KCl et (NH4)2SO4 | La renaturation spécifique des amorces garantit des résultats fiables de la PCR |
Synthetic Factor MP | Analyse multiplexe fiable d’un maximum de 4 gènes dans le même tube | |
Mélange dNTP | Comprend du dUTP, qui remplace partiellement le dTTP et permet un traitement UNG optionnel | Élimination efficace du transfert des produits de PCR lorsque la réaction est prétraitée avec de l’uracil-N-glycosylase (UNG) |
Composants supplémentaires | ||
50x ROX Dye Solution | Tube séparé de colorant de référence passif pour la normalisation des signaux fluorescents sur les systèmes de real-time PCR Applied Biosystems 7500. En option : Peut être utilisé sur les appareils Stratagene d’Agilent | Quantification précise sur les thermocycleurs nécessitant le colorant ROX. N’interfère pas avec la PCR sur tous les thermocycleurs en temps réel |
50x High-ROX Dye Solution | Tube séparé de colorant de référence passif pour la normalisation des signaux fluorescents sur les systèmes de PCR en temps réel Applied Biosystems 7900 et StepOne | |
Uracil-N-Glycosylase (UNG) | Tube séparé d’enzyme recombinante pure, exempte de nucléase | Élimination efficace du transfert des produits de PCR |
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | Formule tampon exclusive pour la dilution et le stockage des étalons d’acides nucléiques | Stabilise les étalons d’ARN et d’ADN pendant la dilution et la configuration de la réaction et empêche la perte d’acides nucléiques sur les surfaces en plastique, telles que les tubes ou les pointes de pipette |
Les Certal Residual DNA Detection Kits proposent une procédure simple pour la détection de l’ADN de la cellule hôte, du contrôle interne Certal et du contrôle positif d’ADN résiduel Certal (voir figure « Procédure du kit de détection d’ADN résiduel Certal »). Il suffit de mélanger le master mix fourni avec le Certal Residual DNA Assay, le Certal Internal Control Assay et le Certal Internal Control DNA, puis d’ajouter l’ADN de votre échantillon ou le Certal Residual DNA Positive Control. Le manuel du kit contient des protocoles optimisés pour une utilisation sur un grand nombre de thermocycleurs. Le colorant ROX est fourni dans 2 tubes de concentrations différentes, ce qui permet de l’utiliser sur n’importe quel appareil en temps réel (voir le tableau « Choix de la concentration correcte de ROX »).
Instrument | ROX Dye Solution | ||
Non nécessaire | ROX Dye Solution | High-ROX Dye Solution | |
---|---|---|---|
Rotor‑Gene Q | X | ||
Rotor‑Gene 6000 et Rotor‑Gene 3000 | X | ||
Applied Biosystems 7500, ABI ViiA7 | X | ||
Applied Biosystems 7900HT, StepOne et StepOne Plus, ABI PRISM 7700, 7000 et 7300 | X | ||
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 | X | En option | |
iCycler iQ System | X | ||
LightCycler 480 | X |
Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent une PCR en temps réel sensible à l’aide de sondes propres à la séquence pour la détection de l’ADN de la cellule hôte, y compris un contrôle interne. Les kits peuvent être utilisés sur un grand nombre de thermocycleurs en temps réel, notamment les thermocycleurs de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche et Agilent.
Les amorces et la sonde pour le dosage de la cible (CHO) et le dosage du contrôle interne sont ajoutées au Certal ResDNA Master Mix. Une fois la matrice de contrôle interne et la matrice d’échantillon ajoutées et les réactions distribuées, il est possible de les exécuter à l’aide d’un grand nombre de thermocycleurs. Il est également possible de tester des contrôles CHO positifs et d’utiliser l’UNG pour contrôler la contamination de transfert des produits PCR.