Certal Residual DNA Detection Kits

Pour la détection sensible par sonde de l’ADN résiduel de cellules hôtes CHO, y compris un contrôle interne

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Certal CHO Detection Kit (100)

Cat. No. / ID:   211822

Pour 100 x 25 µl de réactions : 1,25 ml de Certal Residual DNA PCR Master Mix, Certal Internal Control DNA and Assay, CHO DNA Positive control and CHO-Assay,, 100 µl d’Uracil-N-Glycosylase, 210 µl de High-ROX Dye Solution, 210 µl de ROX Dye Solution, Nucleic Acid Dilution Buffer, TE Buffer
Les Certal Residual DNA Detection Kits sont destinés aux applications de biologie moléculaire dans les tests de produits pharmaceutiques. Ces produits ne sont pas conçus pour le diagnostic, la prévention ou le traitement de maladies.Voir les marques de commerce.

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Caractéristiques

  • Limite de quantification basse avec une excellente reproductibilité
  • Plage linéaire élevée
  • Contrôle interne fiable et précis
  • Protocoles optimisés pour une large plage de thermocycleurs en temps réel
  • Kits complets comprenant le contrôle interne et le contrôle positif

Détails produit

Lorsque nous travaillons avec des produits biopharmaceutiques, il est essentiel d’évaluer le matériel thérapeutique final pour s’assurer qu’il est exempt de substances contaminantes, telles que l’ADN résiduel de la cellule hôte. Les Certal Residual DNA Detection Kits sont conçus pour une quantification sensible et rapide par real-time PCR de l’ADN génomique résiduel de la cellule hôte à l’aide de sondes d’hydrolyse doublement marquées (également connues sous le nom de TaqMan®). Le Certal CHO Detection Kit contient des réactifs pour la détection par real-time PCR duplex de l’ADN résiduel des cellules hôtes CHO, ainsi que le Certal Internal Control. Le kit comprend également le Certal Residual DNA Positive Control, qui vérifie la fonctionnalité du dosage PCR en l’absence d’un signal provenant de l’ADN de la cellule hôte CHO, et 2 formats de colorant de référence passif ROX à différentes concentrations, permettant une utilisation sur pratiquement n’importe quel appareil en temps réel.

Performances

Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent une détection et une quantification sensibles et fiables de l’ADN génomique résiduel (ADNg), ce qui est essentiel pour la production de produits biopharmaceutiques sûrs et fiables (voir figure «  Détection très sensible et fiable »). Le Certal CHO Detection Kit détecte l’ADNg résiduel des cellules ovariennes de hamster chinois (CHO) avec une limite de détection basse et une plage linéaire élevée, garantissant une détection fiable même de faibles niveaux d’ADNg résiduel (voir figure «  Limite inférieure de détection »). Les Certal Residual DNA Detection Kits sont compatibles avec une large plage de thermocycleurs, fournissant des données sensibles et fiables (voir figures «  Détection sensible et fiable sur un grand nombre de thermocycleurs » et «  Détection sensible et fiable de l’ADN génomique de CHO sur le Rotor‑Gene Q »).

Pour une grande sécurité du processus, les Certal Residual DNA Detection Kits intègrent leQIAGEN Internal Control, qui est spécifiquement conçu pour l’interprétation correcte des résultats négatifs et ne pas interférer avec le dosage cible. LeQIAGEN Internal Control est détecté de manière fiable lorsqu’il est coamplifié avec de l’ADN génomique (voir figure «  Détection fiable du contrôle interne QIAGEN »).

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Principe

Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent de s’assurer que les substances contaminantes provenant de la lignée cellulaire hôte utilisée pour produire des produits biopharmaceutiques sont absentes du matériel thérapeutique final, grâce à un dosage prédéfini permettant de détecter spécifiquement l’ADN de la cellule hôte CHO. Chaque Certal Residual DNA Assay est composé d’une paire d’amorces optimisée et d’une sonde d’hydrolyse marquée au FAM pour une détection fiable de l’ADN génomique résiduel de CHO. L’ADN de fond humain et l’ADN de contrôle interne Certal n’interfèrent pas avec le dosage de l’ADN résiduel Certal.

Le Certal Internal Control Assay prémélangé contient une amorce avant et arrière et une sonde d’hydrolyse marquée au MAX pour la détection de l’ADN de contrôle interne Certal. Il a été spécifiquement optimisé pour éviter toute interférence avec les Certal Residual DNA Assays. Le Certal Residual DNA Positive Control permet d’interpréter correctement les résultats négatifs en testant la fonctionnalité de la réaction d’amplification elle-même.

Le Certal ResDNA PCR Buffer a été optimisé pour fournir des résultats quantitatifs sensibles et fiables de la real-time PCR. Le mélange principal contient également du dUTP, ce qui permet un prétraitement à l’uracil-N-glycosylase (UNG) avant le début de la PCR, avec pour objectif de garantir que les produits de PCR contaminés n’affectent pas les réactions de PCR ultérieures.

Composants du Certal Residual DNA Detection Kit
Composant Caractéristiques Avantages
Certal Residual DNA Assays et ADN de contrôle
50x Certal Residual DNA Assay Ensemble d’amorces et de sondes prédéfini, optimisé et validé (marqué FAM) Détection fiable de l’ADN résiduel des cellules hôtes CHO
Certal Residual DNA Positive Control ADN de contrôle positif qui sera amplifié par le Certal Residual DNA Assay Vérification du bon fonctionnement du Certal Residual DNA Assay dans le cas où aucun ADN résiduel de cellule hôte n’est détecté dans l’échantillon
50x Certal Internal Control Assay Ensemble d’amorces et de sondes prédéfini, optimisé et validé (marquées au MAX) pour la détection de l’ADN du contrôle interne Certal Détection spécifique du Certal Internal Control DNA uniquement. Optimisé pour éviter toute interférence avec les Certal Residual DNA Assays
Certal Internal Control DNA Internal Control DNA qui sera amplifié par le Certal Internal Control Assay Exclut la présence d’inhibiteurs de la PCR ou peut être utilisé pour contrôler la purification et l’amplification lorsqu’il est ajouté au cours de l’étape de purification
Certal ResDNA PCR Master Mix
HotStarTaq DNA Polymerase   15 min d’activation à 95 °C Réglage des réactions qPCR à température ambiante
Certal ResDNA PCR Buffer Combinaison équilibrée d’ions KCl et (NH4)2SO4 La renaturation spécifique des amorces garantit des résultats fiables de la PCR
Synthetic Factor MP Analyse multiplexe fiable d’un maximum de 4 gènes dans le même tube
Mélange dNTP Comprend du dUTP, qui remplace partiellement le dTTP et permet un traitement UNG optionnel Élimination efficace du transfert des produits de PCR lorsque la réaction est prétraitée avec de l’uracil-N-glycosylase (UNG)
Composants supplémentaires
50x ROX Dye Solution Tube séparé de colorant de référence passif pour la normalisation des signaux fluorescents sur les systèmes de real-time PCR Applied Biosystems 7500. En option : Peut être utilisé sur les appareils Stratagene d’Agilent Quantification précise sur les thermocycleurs nécessitant le colorant ROX. N’interfère pas avec la PCR sur tous les thermocycleurs en temps réel
50x High-ROX Dye Solution Tube séparé de colorant de référence passif pour la normalisation des signaux fluorescents sur les systèmes de PCR en temps réel Applied Biosystems 7900 et StepOne
Uracil-N-Glycosylase (UNG) Tube séparé d’enzyme recombinante pure, exempte de nucléase Élimination efficace du transfert des produits de PCR
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer Formule tampon exclusive pour la dilution et le stockage des étalons d’acides nucléiques Stabilise les étalons d’ARN et d’ADN pendant la dilution et la configuration de la réaction et empêche la perte d’acides nucléiques sur les surfaces en plastique, telles que les tubes ou les pointes de pipette

Procédure

Les Certal Residual DNA Detection Kits proposent une procédure simple pour la détection de l’ADN de la cellule hôte, du contrôle interne Certal et du contrôle positif d’ADN résiduel Certal (voir figure «  Procédure du kit de détection d’ADN résiduel Certal »). Il suffit de mélanger le master mix fourni avec le Certal Residual DNA Assay, le Certal Internal Control Assay et le Certal Internal Control DNA, puis d’ajouter l’ADN de votre échantillon ou le Certal Residual DNA Positive Control. Le manuel du kit contient des protocoles optimisés pour une utilisation sur un grand nombre de thermocycleurs. Le colorant ROX est fourni dans 2 tubes de concentrations différentes, ce qui permet de l’utiliser sur n’importe quel appareil en temps réel (voir le tableau « Choix de la concentration correcte de ROX »).

Choix de la concentration correcte de ROX
Instrument ROX Dye Solution
  Non nécessaire ROX Dye Solution High-ROX Dye Solution
Rotor‑Gene Q X    
Rotor‑Gene 6000 et Rotor‑Gene 3000 X    
Applied Biosystems 7500, ABI ViiA7   X  
Applied Biosystems 7900HT, StepOne et StepOne Plus, ABI PRISM 7700, 7000 et 7300     X
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 X En option  
iCycler iQ System X    
LightCycler 480 X    
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Applications

Les Certal Residual DNA Detection Kits permettent une PCR en temps réel sensible à l’aide de sondes propres à la séquence pour la détection de l’ADN de la cellule hôte, y compris un contrôle interne. Les kits peuvent être utilisés sur un grand nombre de thermocycleurs en temps réel, notamment les thermocycleurs de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche et Agilent.

Données et illustrations utiles

Ressources

Quick-Start Protocols (1)
Safety Data Sheets (1)
Kit Handbooks (1)
For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Can the Certal CHO Positive Control DNA be used to create a qPCR standard for relative quantification?
For quantification, it is recommended that a gDNA standard from your production cell be prepared using, for example, the QIAamp DNA Mini Kit. The positive control provided with Certal Residual DNA Detection Kits is not suitable for use as a qPCR standard for relative quantification.
FAQ ID -2979
How many freeze-thaw cycles can the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits tolerate?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits can be freeze-thawed up to 6 times without a decrease in performance. However, great care should be taken to avoid inadvertently introducing RNases or DNases into the Internal Control template solutions. In general, in order to avoid repeated freeze-thaw cycles, we recommend preparing aliquots of the Internal Control template.

Note:  The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits cannot be ordered separately

FAQ ID -2975
On which cyclers can Certal Residual Detection Kits be used?
Certal Residual Detection Kits can be used on virtually any real-time cycler. The master mix supplied with the Kits does not contain ROX. Instead, 2 different ROX concentrations are supplied in separate tubes. “High-ROX Dye Solution” is for use with all Applied Biosystems cyclers except the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems and the ViiA7 System, and “ROX Dye Solution” is for use with the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems, the ViiA7 System, and, optionally, instruments from Agilent. Recommendations are provided in the handbook (page 11).
FAQ ID -2973
What is the label of the probe that is used in the Internal Control Assay to detect the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?
The probe is labeled with the MAX-NHS ester (MAX) reporter dye, which has a spectrum equivalent to HEX, JOE, or VIC dyes. IowaBlack is used as the quencher dye. IowaBlack is a non-fluorescent quencher (dark quencher).
FAQ ID -2976
If a cycler from Applied Biosystems is used in combination with the Certal Residual DNA Detection Kit, should dye calibration for MAX be performed?

No, calibration is required if the instrument is already calibrated for VIC (which is normally the case). Simply create a new detector, for example, “MAX/IowaBlack”, and assign VIC as the reporter dye and “none” as the quencher (Table 3, page 17 of the Certal Residual DNA Detection Kit handbook describes the procedure in the footnote). 

MAX spectrum is nearly identical to VIC and the requirement for calibration has been thoroughly tested. There is no risk of crosstalk from the VIC channel to the FAM channel. However, crosstalk may occur from the FAM channel to the VIC channel if the pathogen target is present in very high copy numbers. Although this may slightly change the signal for the Internal Control, if a positive signal is detected in the FAM channel, then the Internal Control signal is no longer required.

FAQ ID -2977
On what cyclers have Certal Residual DNA Detection Kits been validated?
Certal Residual DNA Detection Kits have been validated on the Rotor-Gene Q and the Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time System.
FAQ ID -2978
Is there a risk of crosstalk from the FAM channel to the VIC channel if the residual DNA target is present in very high copy numbers?
Usually the amount of gDNA in process samples is low, for example, in the ng range or even lower. Therefore, no crosstalk is expected.
FAQ ID -2980
What is the nature and target of the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits is a non-linearized plasmid (naked nucleic acid).

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits has an artificial sequence that is not present in biological sample material.

FAQ ID -2974