QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays

Pour le titrage du génome vecteur avec une précision, une reproductibilité et une vitesse supérieures sur le système de PCR numérique QIAcuity

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dPCR CGT Assay GFP (FAM)

Cat. No. / ID:   250236

Pour 500 réactions de 12 µl (20x) : Dosage de thérapie génique et cellulaire QIAGEN pour GFP à utiliser avec le système de dPCR QIAcuity.
Assay
GFP
ITR2/5
bGH polyA
WPRE
SV40 promoter
SV40 polyA
CMV promoter
hGH polyA
CMV enhancer
AMP resistance
Dye
FAM
HEX
Cy5
Le dPCR CGT Assay GFP (FAM) est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Caractéristiques

  • Une offre large de dix différents dosage de CGT par dPCR validés en laboratoire humide
  • Les dosages avec des choix de fluorophore différents permettent le multiplexage pour tirer davantage d’informations d’un échantillon
  • Un flux de travail facile et rapide comparable à la qPCR

Détails produit

Le virus adéno-associé (AAV) est un vecteur viral largement utilisé dans les applications de thérapie génique. Cependant, la génération et la purification des vecteurs viraux requièrent un contrôle de qualité rigoureux pour permettre un dosage sûr et fiable pendant les études cliniques ou les soins du patient. La capacité à quantifier avec précision les titres des vecteurs et à détecter la contamination est essentielle pour des thérapies géniques basées sur AAV sûres et efficaces.

Performances

Les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays sont une grande offre de dix différents dosage de CGT par dPCR validés en laboratoire humide disponibles en plusieurs fluorophores, permettant une précision supérieure, une reproductibilité et une plage dynamique d’au moins 4 ordres de magnitude de vitesse dans la mesure de titres viraux dans une configuration multiplex. Les dosages fonctionnent en conjonction avec le QIAcuity Digital PCR System, le QIAcuity Probe PCR Kit et les nanoplaques QIAcuity, offrant un flux de travail de dPCR complet comparable à la qPCR, mais fournissant une quantification absolue des copies du génome vecteur d’AAV dans votre échantillon. Les dosages ont été conçus selon les exigences de la production biopharmaceutique et le CQ.

Principe

Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.

Les dosages de CGT dédiés permettent la quantification de l’AAV sur le QIAcuity. Ces dosages sont validés et peuvent être utilisés dans les réactions simplex et multiplex et peuvent être combinés avec les dosages de gènes d’intérêt, offrant :

  • Quantification précise jusqu’à 0,3 copies/µl
  • Précision élevée sur une vaste gamme dynamique
  • Précision élevée pour tous les dosages (indépendante des fluorophores) et opérateurs
  • Précision élevée (<10 % d’écart par rapport à la moyenne) indépendante des fluorophores et des opérateurs
  • Compatibilité avec l’affichage de la dPCR et qPCR

Procédure

Les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays sont fournis dans un mélange de sondes et d’amorces prêt à l’emploi 20x, disponibles dans plusieurs choix de fluorophores et optimisés pour l’utilisation avec le QIAcuity Probe PCR Kit. Ces dosages permettent des applications CGT simplex et multiplex, y compris la quantification absolue du titre de vecteur et la fiabilité du dosage.

Applications

Les QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays sont utilisés pour diverses applications, y compris les mesures du titre de vecteur viral, mesurant l’intégrité du génome du vecteur et déterminant la contamination par plasmides si vous utilisez des plasmides d’amplification pour la production d’AAV. L’intégration de ces dPCR CGT Assays dans le processus de contrôle de la qualité du développement de la thérapie génique signifie une meilleure certitude dans la production de traitements sûrs et performants.

Données et illustrations utiles

Ressources

Quick-Start Protocols (1)
Application Notes (2)
The QIAcuity dPCR System, complemented by the QIAcuity Software Suite version 2.5 and higher, offers a powerful solution for determining DNA integrity and stability. Analyzing up to 5 targets simultaneously enables accurate and precise integrity assessment. The importance of determining genome integrity becomes particularly evident in analyzing viral vectors such as AAVs, which are known for their susceptibility to packaging errors. Moreover, dPCR is a valuable tool for assessing DNA stability, providing valuable insights into storage and processing impacts.
The QIAcuity dPCR System, complemented by the QIAcuity Software Suite version 2.5 and higher, offers a powerful solution for determining DNA integrity and stability. Analyzing up to 5 targets simultaneously enables accurate and precise integrity assessment. The importance of determining genome integrity becomes particularly evident in analyzing viral vectors such as AAVs, which are known for their susceptibility to packaging errors. Moreover, dPCR is a valuable tool for assessing DNA stability, providing valuable insights into storage and processing impacts.
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Do I need to use restriction enzymes when quantifying AAV genomes?

In some cases, it is recommended to perform a digest with compatible restriction enzymes. For example, when quantifying ITRs, the strong secondary structure of the terminal repeats might affect titration. Compatible restriction enzymes are indicated in the corresponding data sheets of the CGT dPCR assays.

FAQ ID - 3866
How can I resuspend the lyophilized assay?

Please resuspend the lyophilized assays in 330 µl TE buffer to obtain a 20× stock. Additional information can be found in the QSP and the data sheets.

FAQ ID - 3864
Do you have any recommendations on how to process my AAV samples?

To ensure consistent and reproducible measurements of viral titers, we recommend the CGT Viral Vector Lysis Kit (cat. no. 250272/250273). It has been optimized to work in conjuction with the QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays and the QIAcuity Probe PCR Kit on the QIAcuity instruments as part of a standardized and complete viral vector titer workflow.

FAQ ID - 3860
Are the assays also compatible with qPCR?

Yes. The assays can also be used for vector genome titration in a qPCR.

FAQ ID - 3871
Can I use the CGT dPCR assays for the titer determination of RNA viruses?

Yes, you can. cDNA would be used in this case for quantification.

FAQ ID - 3869
In which channels can you detect the CGT dPCR assays?

Most of the assays are offered with a FAM, HEX, or Cy5 fluorophore, and can be detected in the Green, Yellow, or Crimson channel, respectively. SV40 poly A, hGH poly A, and Amp resistance assays are only available with a FAM or HEX fluorophore.

FAQ ID - 3863
How do I know if the assays are compatible with the sample DNA of interest?

An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheet. 

FAQ ID - 3870
Can they be used with lentiviral vectors?

Yes. The assays can also be used with lentiviral vectors. However, lentiviral vectors have an RNA genome. cDNA synthesis is crucial before performing the PCR for titer quantification.

FAQ ID - 3872
What quenchers are used?

The probes are double quenched with ZEN/TAO and IOWA black quenchers.

FAQ ID - 3865
Can I combine your CGT dPCR assays with custom designed assays?

Yes, the CGT dPCR assays can be used in singleplex and multiplex reactions. Custom designed assays can be added into a multiplex reaction according to customer needs.

FAQ ID - 3861
Can the CGT dPCR assays also be used for the analysis of AAV genome integrity?

Yes. When multiplexing different targets, it is possible to get additional information on genome integrity using the “Multiple occupancy” analysis in the QIAcuity Software Suite.

FAQ ID - 3867
Can the CGT dPCR assays also be used for the quantification of non-AAV samples?

Yes. They can be used as long as the assays match the region of interest.

FAQ ID - 3868
How many assays can be multiplexed?

Two to five assays can be combined into a multiplex reaction depending on the QIAcuity Digital PCR platform, hence the 2-plex or 5-plex instruments.

FAQ ID - 3862