dPCR Copy Number Assays

• Ensayos rediseñados para todos los genes en el genoma humano
• Variedad de 3 ubicaciones de diseño por gen: 5’, medio y 3’
• Hay más ensayos prediseñados disponibles a petición
• Se han analizado en un laboratorio experimental de dPCR ensayos para >200 blancos.
• Formato simple y directo para el uso de dPCR
• Práctico análisis de datos del número de copias con el QIAcuity Software Suite

Los dPCR Copy Number Assays permiten realizar un análisis del cambio en el número de copias específico, exacto, reproducible y fácil de interpretar de un gen o una zona de interés en particular. Se han analizado en un laboratorio experimental de dPCR ensayos para más de 200 blancos. Todos los otros diseños informáticos se han verificado en la mesa de laboratorio y están listos para usar en estudios de seguimiento de NGS, cribado de blancos específicos y otros estudios relacionados.

Los dPCR Copy Number Assays se encuentran disponibles en formato de tubo como ensayo con concentración de 25× listo para usar. El tubo contiene el par de cebadores que se utilizará con el QIAcuity EG PCR Kit y el instrumento QIAcuity. Los ensayos de laboratorio experimental de dPCR se marcan como tales en una vista de producto de ensayo específica.

La verificación en laboratorio de la calidad del ensayo garantiza que los dPCR Copy Number PCR Assays produzcan resultados fiables. El análisis del número de copias mediante PCR digital puede identificar con exactitud aneuploidia en líneas celulares que contienen anomalías cromosómicas previamente identificadas a través de métodos citogenéticos. La PCR digital es capaz de detectar cambios en el número de copias de tan solo 1,2 veces o de 5 a 6 copias. La división en partes de la reacción de dPCR es el factor clave que facilita el nivel de discriminación necesario para resolver dichos cambios pequeños.

Para la normalización, también se encuentran disponibles ensayos de referencia correspondientes a diferentes números de copia por genoma humano.

Todos los dPCR Copy Number PCR Assays están diseñados para zonas únicas del genoma humano. Los dPCR Copy Number Reference Assays (disponibles por separado) incluyen diversas referencias con diferentes números de copias en el genoma, lo que permite seleccionar las referencias de normalización óptima para cada análisis. Recomendamos incluir dos ensayos de referencia que permitan calcular el número de copias del gen o el blanco de interés.

Los dPCR Copy Number Assays están listos para usar: simplemente añada la muestra de ADN y la mezcla maestra del QIAcuity EG PCR Kit a los ensayos individuales o los ensayos de referencia de la QIAcuity Nanoplate. La detección se basa en el colorante intercalante EvaGreen.

El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.

Para preparar el experimento de dPCR, añada una alícuota de la muestra de ADN genómico (aislado de las muestras nuevas, congeladas o fijadas) a la mezcla maestra del QIAcuity EG PCR Kit y el dPCR Copy Number Assay. Cada gen o blanco de interés y cada ensayo de referencia se analizan en su propio pocillo individual.

Tras cargar y sellar la nanoplaca, ponga en funcionamiento la placa con el programa de ciclado recomendado en el instrumento QIAcuity. El resultado de las copias por microlitro se muestra en el tipo de análisis de cuantificación absoluta del QIAcuity Software Suite. Para calcular el número de copias por genoma, seleccione el tipo de análisis de datos del número de copias en el QIAcuity Software Suite y defina los pocillos de la nanoplaca para el gen o la región de interés, o la referencia de normalización.

Los dPCR Copy Number Assays resultan ideales para detectar con exactitud alteraciones o variaciones en el número de copias en los locus individuales utilizando ADN de muestras nuevas, congeladas o fijadas.