Kits DyeEx

• Procedimiento rápido solo con dos pasos cortos de centrifugación
• Material de filtración en gel hidratado previamente listo para usarse
• Eliminación eficaz de cualquier terminador de colorante

Los kits DyeEx incluyen columnas de centrifugación o placas de 96 pocillos y emplean tecnología de filtración en gel para eliminar los terminadores de colorante de las reacciones de secuenciación, incluidas las reacciones de la secuenciación de Sanger. Las reacciones de secuenciación se cargan en el material de filtración en gel hidratado previamente. Tras un paso de centrifugación corto, las reacciones estarán listas para cargarse en un secuenciador capilar. Los terminadores de colorante no incorporados se retienen en la matriz de gel.

Los kits DyeEx eliminan cualquier tipo de terminador de colorante de reacciones de secuenciación de 10–20 µl, incluidos BigDye, colorante dRhodamine, Rhodamine, DYEnamic ET y terminadores WellRED. Tras la limpieza, las reacciones de secuenciación se pueden separar en cualquier secuenciador capilar. Recomendamos el DyeEx 96 Kit que emplea el protocolo optimizado.

Secuenciación de gran calidad

Los kits DyeEx están optimizados para que la eliminación de los terminadores de colorantes sea rápida y práctica y se obtengan resultados de secuenciación de gran calidad. En contraste, la limpieza de la reacción de secuenciación mediante la precipitación con etanol requiere mucho tiempo (consulte la tabla «Comparación del procedimiento de DyeEx y la precipitación con etanol») y es poco eficiente. Si no se eliminan los terminadores de colorantes, aparecerán manchas de colorante en los datos de secuenciación y no se podrán leer los segmentos de la secuencia. El uso de los kits DyeEx para la limpieza de la reacción de la secuenciación garantiza que las reacciones cargadas en los instrumentos de secuenciación no contengan terminadores de colorante. Sin manchas de colorante, la secuencia se podrá leer con facilidad en todo momento (consulte la figura  «Resultados superiores de secuenciación»). Las intensidades de la señal son altas y esto da lugar a longitudes largas de lectura (consulte la figura  «Secuencia de lectura larga»).

Comparación del procedimiento de DyeEx y la precipitación con etanol

N.A.: no aplicable

* No incluye el tiempo requerido para el secado de las muestras antes de cargar el gel (cuando corresponda).
† Uso del protocolo estándar.

El procedimiento de DyeEx emplea la filtración en gel para eliminar de forma rápida y eficiente los terminadores no incorporados de las reacciones de secuenciación. La eliminación de los terminadores de colorante es importante para evitar que los terminadores marcados con colorantes no incorporados interfieran con el análisis de los resultados de la secuenciación. El material de la filtración en gel de DyeEx consta de esferas con poros uniformes y separa las moléculas según el peso molecular. Cuando las mezclas de la reacción de secuenciación se aplican a las columnas DyeEx, los terminadores marcados con colorante se difunden en los poros y se retienen en el material de filtración en gel, mientras que los fragmentos marcados de ADN se excluyen y se recuperan en el flujo continuo (consulte la figura  «Principio de separación de DyeEx»).

La eliminación del terminador marcado con colorante con los kits DyeEx es rápida debido a que el procedimiento es muy sencillo (consulte los diagramas de flujo  «Procedimiento de DyeEx 2.0 Spin» y  ”Procedimiento de DyeEx 96 Kit”). El paso de centrifugación rápida elimina el tampón de almacenamiento de las columnas o los pocillos, las muestras de secuenciación se cargan y el segundo paso de centrifugación elimina los terminadores de colorante no incorporados. A continuación, las muestras están preparadas para su carga directa en un secuenciador capilar o se pueden secar, volver a diluir y cargar en un gel de secuenciación.

Los kits DyeEx eliminan cualquier tipo de terminador de colorante de reacciones de secuenciación de 10–20 µl, incluidos BigDye, colorante dRhodamine, Rhodamine, DYEnamic ET y terminadores WellRED. Tras la limpieza, las reacciones de secuenciación se pueden separar en cualquier secuenciador capilar. Las intensidades de la señal son altas, lo que produce longitudes de lecturas largas.